吳偉明，王 軍，吳妙妙

(溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院藥劑科，浙江 溫州 325027)

厄多司坦屬黏痰溶解藥[1]，為前體藥物，其分子結(jié)構(gòu)中含有被封閉的巰基(－SH)，通過(guò)肝臟生物轉(zhuǎn)化成含有游離巰基的活性代謝產(chǎn)物而發(fā)揮黏痰溶解作用，另外還具有增強(qiáng)黏膜纖毛運(yùn)轉(zhuǎn)功能等作用。厄多司坦可提高抗生素在支氣管炎癥部位的濃度，具有良好祛痰鎮(zhèn)咳和清除自由基的活性作用，臨床主要用于急性和慢性支氣管炎、鼻竇炎、耳炎、咽炎和感冒等引起的呼吸道阻塞及黏液黏稠[1]。為了進(jìn)一步控制該制劑的質(zhì)量，筆者建立了一種比較靈敏和簡(jiǎn)便的厄多司坦膠囊的含量測(cè)定方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

HP1100型高效液相色譜儀(美國(guó)惠普公司)，包括G1311A 1100/1200四元泵，G1314A 1100可變波長(zhǎng)檢測(cè)器;Chem32安捷倫色譜工作站(agilent，Version 6.1);FA1004N型電子天平(上海精密科學(xué)有限公司，d=0.1 mg);TU－1901型雙光束紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);pHS－3C型精密pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司，編號(hào)為025016)。厄多司坦對(duì)照品(純度為99.7%，批號(hào)為20081005)，厄多司坦膠囊(規(guī)格為300 mg/粒，批號(hào)為091101，091115，091201)，均由浙江康樂(lè)藥業(yè)有限公司提供;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，柱前加保護(hù)柱(4 mm ×4 mm，5 μm);流動(dòng)相:pH 為 6.8的磷酸緩沖液(磷酸二氫鈉 1.95 g+0.1mol/L 氫氧化鈉 55 mL，用 0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾)－甲醇(95∶5);柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):237 nm;進(jìn)樣量:20 μL。用外標(biāo)法測(cè)定。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取樣品適量(約相當(dāng)于厄多司坦25 mg)，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液250 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方制備不含厄多司坦的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取厄多司坦對(duì)照品25 mg，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得100 μg/mL的對(duì)照品貯備液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):精密吸取2.2 項(xiàng)下 3 種溶液各 20 μL，注入液相色譜儀，在擬訂的色譜條件下，色譜圖見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜在同一保留時(shí)間有相同的色譜峰出現(xiàn)，而陰性對(duì)照品溶液色譜則無(wú)此峰，說(shuō)明輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。厄多司坦保留時(shí)間約為6.69 min，理論板數(shù)按厄多司坦峰計(jì)算為4822。

線(xiàn)性關(guān)系考察:分別精密吸取對(duì)照品貯備液適量，加流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度分別為50，40，25，20，10，4，1 μg/mL 的溶液。在上述色譜條件下取以上溶液各20 μL注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積。以厄多司坦質(zhì)量濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回 歸 方 程 Y=20.289X－5.001，r=0.9997(n=5)。結(jié)果表明，厄多司坦質(zhì)量濃度在 1～50 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為20 μg/mL的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.87%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，依法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.92%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為1.05%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):取對(duì)照品約40 mg，精密稱(chēng)定，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，精密量取2，6，8 mL，置25 mL容量瓶中，再分別加入已測(cè)知含量的供試品溶液適量，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述溶液各1 mL，分別置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，即得低、中、高3組供試品溶液，每組2份。另取對(duì)照品貯備液，加流動(dòng)相稀釋?zhuān)瞥?5 μg/mL的對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 厄多司坦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，吸取20 μL進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為091101，091115，091201的3批樣品中厄多司坦含量分別為標(biāo)示量的98.52%，99.07%，98.76%(n=3)。

3 討論

厄多司坦是氨基酸衍生物，分子結(jié)構(gòu)中既有酸性基團(tuán)也有堿性基團(tuán)，故流動(dòng)相的pH決定了樣品分子以何種形式存在，從而決定樣品在色譜柱上的保留與峰形。文獻(xiàn)[2－3]采用水－乙腈－三氟醋酸或1 mmol/L醋酸銨－乙腈(80∶20，pH=3.2)為流動(dòng)相，對(duì)柱子損傷較大。為此，本研究中采用了比較廉價(jià)易得的流動(dòng)相，如甲醇、水和磷酸鹽緩沖溶液，并調(diào)整各流動(dòng)相比例及流速，同時(shí)考察了反相色譜柱在其耐受的pH(即pH為2～8)條件下，厄多司坦色譜峰形及保留與流動(dòng)相pH之間的關(guān)系。但由于厄多司坦極性較大，采用十八烷基鍵合硅膠為固定相做反相色譜分離時(shí)容量因子較小，在試驗(yàn)中選擇流動(dòng)相時(shí)曾嘗試25%甲醇、5%甲醇等，主成分峰保留時(shí)間均小于3 min，與相鄰雜質(zhì)峰分離度不符合要求。最后發(fā)現(xiàn)選擇以甲醇－pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液(5∶95)為流動(dòng)相時(shí)，樣品不僅保留好且峰形較好。

厄多司坦在熱水中微溶，易溶于甲醇。曾嘗試加熱水溶解，但雜質(zhì)峰明顯增加，可能加熱導(dǎo)致其分解;當(dāng)以甲醇為溶劑時(shí)，其對(duì)照品溶液紫外圖譜顯示237 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，但有肩峰出現(xiàn);以流動(dòng)相為溶劑配制的厄多司坦對(duì)照品溶液在237 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，且峰形較理想。因此，選擇流動(dòng)相為溶劑。

取對(duì)照品貯備液，在190～360 nm波長(zhǎng)處掃描，結(jié)果厄多司坦在237 nm波長(zhǎng)處有最強(qiáng)吸收。為便于檢測(cè)，選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm。

本試驗(yàn)對(duì)厄多司坦的含量測(cè)定方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究，結(jié)果顯示，方法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，輔料不干擾測(cè)定結(jié)果。

[1]劉 萍，邊 強(qiáng).黏痰溶解藥物——厄多司坦[J].國(guó)外醫(yī)藥·合成藥、生化藥、制劑分冊(cè)，1996，17(4):239.

[2]Kim H，Chang KY，Lee HJ，et al.Sensitive determination of erdostein in human plasma by use of automated 96－well solid－phase extraction and LC－MS/MS[J].Pharm Biomed Anal，2004，34(3):661.

[3]Savu S，Mitrea M，Silvestro L，et al.HPLC with on－line mass spectrometry detection application to elucidate Erdosteine metabolism:preliminary study[J].Clin Pharrnacol Ther，2000，38(8):415.