魯金鳳，姜 麗

(1.吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132001;2.吉林康乃爾藥業(yè)有限公司，吉林 吉林 132001)

結(jié)核散由白及、麥芽、天花粉、異煙肼組方，用于消癭散結(jié)，對各種結(jié)核均有很好的治療作用。原標(biāo)準(zhǔn)中只有顯微鑒別，筆者對白及的薄層色譜鑒別和異煙肼的含量測定進行了研究，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;Sartorius Bp211D型電子天平;SB5200型超聲振蕩器。白及對照藥材和異煙肼對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供，批號分別為090625，090712，090819;結(jié)核散(市售品);硅膠G板為青島海洋化工廠生產(chǎn);其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別[1]

取供試品5 g，加70%甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮至1 mL，作為供試品溶液。取不含白及的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。另取白及對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯 － 甲醇(6 ∶2.5 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，放置。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的桃紅色斑點，陰性對照無干擾(圖1)。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Apollo C18柱 (250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.02 mol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)pH至6.0)－甲醇(85∶15);檢測波長:262 nm。

2.2.2 溶液制備

精密稱取異煙肼對照品，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。取供試品5包，混勻，精密稱取 0.62 g，置 50 mL量瓶中，加水 30 mL，超聲處理 20 min，用水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取續(xù)濾液3 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取不含異煙肼的陰性樣品，按供試品溶液處理方法制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

圖1 薄層色譜圖

專屬性考察:分別精密吸取陰性對照品溶液、對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見圖2?？梢?，在該色譜條件下，陰性對照對測定無干擾。

圖2 高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精密稱取異煙肼對照品，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，精密吸取上述對照品溶液2，5，10，15，20 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、異煙肼進樣量為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=－29.4783+3415.34 X，r=1.0000(n=5)。結(jié)果表明，異煙肼進樣量在0.2～2.0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，測定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.2%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，放置 0，2，4，6，8，10 h 后，測定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.6%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:精密稱取同一批號供試品6份，按供試品溶液處理方法制備溶液，依法測定含量。結(jié)果供試品中異煙肼含量為25.5 mg/g，RSD=0.5%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:取已知含量(25.5 mg/g)的供試品約0.31 g，平行取樣6份。另精密稱取異煙肼對照品50.09 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解并制成質(zhì)量濃度為1.0018 g/L的溶液。分別精密吸取該對照品溶液適量，加入6份供試品中，按供試品溶液的制備方法制備溶液，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 異煙肼加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

分別取3批樣品，按供試品溶液和對照品溶液的制備方法制備成溶液，在擬訂的色譜條件下測定，計算含量。結(jié)果批號為090625，090712，090819 的樣品中，異煙肼含量分別為 25.5，26.4，24.9 mg/g。

3 討論

在含量測定中，對供試品的取樣量進行了考察。取樣量過多，則不利于過濾，過少則誤差大，故選擇本方法的取樣量。同時考察了0.02 mol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)pH至6.0)－甲醇(90∶10)和0.02 mol/L磷酸氫二鈉溶液(用磷酸調(diào)pH至6.0)－甲醇(87∶13)兩個流動相，發(fā)現(xiàn)本方法采用的流動相峰形和時間均較好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅥB.