蔣大義，張 娓，楊宏圖，馬惠萊，王惠玲，常 翠

(廣東省深圳市人民醫(yī)院·暨南大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 深圳 518020)

茵陳合血膠囊由茵陳、七寸金、黃芩、制大黃、甘草組方，是將臨床應(yīng)用多年、用于防治圍產(chǎn)期母嬰ABO血型不合的協(xié)定處方加以改進(jìn)研制而成。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，筆者選擇活性成分明確的黃芩苷作為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法測(cè)定茵陳合血膠囊中黃芩苷的含量[1－3]，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－20A型高效液相色譜儀，包括DGU－20A3脫氣機(jī)、LC－20AT溶劑輸送泵、SIL－20A自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO－20A柱溫箱、SPD－20A紫外－可見(jiàn)檢測(cè)器、CBM－20A系統(tǒng)控制器、LCSolution(Ver.1.21)工作站等;pHS－29A型精密pH計(jì)(上海雷磁儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(廣東省汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠);日本AND電子分析天平;DS系列超聲波清洗器(天津市東康科技有限公司);FY－3C型真空泵(溫嶺市飛越機(jī)電有限公司)。黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為10715－200212);茵陳合血膠囊(自制，批號(hào)為20100205，20100315，20100626);甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，色譜純)，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:島津 Shimpak VP －ODS柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －水 － 冰醋酸(52∶48∶1);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;進(jìn)樣量:10 μL;柱溫:25℃。理論板數(shù)以黃芩苷計(jì)為5763。在此條件下，色譜圖見(jiàn)圖1，黃芩苷色譜峰與雜質(zhì)完全分離，保留時(shí)間為9.18 min，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

精密稱取對(duì)照品10.59 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品貯備液(每1 mL含黃芩苷0.2118 mg);再精密量取該溶液3 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(于2～8℃保存)。取樣品膠囊內(nèi)容物0.5 g(相當(dāng)于1粒的量)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入70%乙醇適量，超聲處理30 min，冷卻后，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，并用70%乙醇稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按照茵陳合血膠囊的制備工藝制備不含黃芩苷的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密量取黃芩苷對(duì)照品貯備液(211.8 mg/L)1，2，3，4，5，6 mL，置 20 mL 容量瓶中，定容，搖勻，在擬定的色譜條件下進(jìn)樣分析，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、相應(yīng)質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=368.87 X+0.158，r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明，黃芩苷質(zhì)量濃度在 10.55 ～63.30 mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為20100205)約0.25 g，精密加入黃芩苷對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備方法制備，依法操作測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

精密度試驗(yàn):配制質(zhì)量濃度為 12.00，36.00，60.00 mg/L 的對(duì)照品溶液各5份，連續(xù)測(cè)定2 d，計(jì)算日內(nèi)和日間的精密度。結(jié)果見(jiàn)表2。

穩(wěn)定性試驗(yàn):配制質(zhì)量濃度為18.00，24.00 mg/L的供試品溶液，置室溫或 37 ℃恒溫水浴中，于 0，0.5，1，2，4 h 時(shí)取出適量，自然冷卻，觀察溶液外觀并測(cè)定含量。結(jié)果供試品溶液在不同時(shí)間的外觀均澄清、無(wú)渾濁，色譜峰面積及峰形無(wú)變化，含量見(jiàn)表3。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品含量測(cè)定

取供試品溶液和對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10 μL，讀取峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

通過(guò)試驗(yàn)得知，黃芩苷在280 nm波長(zhǎng)處有較大吸收[3]，其他成分在該波長(zhǎng)處無(wú)干擾，因此可選擇此波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。文中建立的黃芩苷含量測(cè)定方法結(jié)果可靠、方法簡(jiǎn)便，為茵陳合血膠囊的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/粒)

[1]WS3－238(Z－033)－2003(Z)，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:441.

[3]YBZ10162004，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].