徐玉善 趙云娟 楊慧英 劉 華 李 紅 黃云超

脂聯(lián)素具有促進糖脂代謝、減輕胰島素抵抗、抗感染以及抗動脈粥樣硬化等作用[1]。脂聯(lián)素基因編碼位于染色體的3q27，與糖尿病的易感位點位于同一區(qū)域[2]。國內一項Meta分析顯示，脂聯(lián)素基因+45G為中國2型糖尿?。═2DM）的危險等位基因型，SNP+45GG基因型與T2DM顯著相關[3]。氧化應激水平升高是導致糖尿病慢性并發(fā)癥的重要機制[4]。8-異前列腺素F2a是反應體內氧化應激的較穩(wěn)定指標之一，其水平穩(wěn)定，可以特異、準確地反映體內的氧化應激水平[2]。本研究旨在通過檢測T2DM患者脂聯(lián)素SNP+45（T/G）不同基因型的8-異前列腺素F2α水平，探討脂聯(lián)素基因多態(tài)性與T2DM氧化應激的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年3月—2009年10月于我院就診的T2DM患者（T2DM組）120例，男63例，女57例，平均年齡（50.7±7.8）歲，病史2～20年，平均（10.2±7.9）年，體質量指數（BMI）≥20 kg/m2，平均（24.6±3.25）kg/m2。納入標準：參照1999年WHO糖尿病診斷標準，空腹血糖≥7.0 mmol/L或（和）口服75 g葡萄糖粉后2 h血糖≥11.1 mmol/L，若只符合一項，需在另一天復查確認。排除標準：1型糖尿病和其他特殊類型糖尿病者；住院期間處于感染、急性心肌梗死、外傷、手術、糖尿病酮癥酸中毒、糖尿病高滲性昏迷等急性應激狀態(tài)者。同時取2009年1月—2009年3月來我院門診正常體檢者60例為對照組，男31例，女29例，平均年齡（49.5±6.8）歲，BMI正常（<24 kg/m2）,平均（23.3±2.4）kg/m2。2組性別（χ2=0.011）、年齡（t=1.014）差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），BMI差異有統(tǒng)計學意義（t=1.991，P<0.01）。

1.2 主要儀器與試劑 全自動生化分析儀（AU5421，日本奧林巴斯），放射免疫法儀器GC-1500購自中國科學技術大學創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司，8-異前列腺素F2α試劑盒購自Cayman公司。

1.3 脂聯(lián)素基因多態(tài)性的檢測 采用常規(guī)氯酚萃取法提取外周血白細胞DNA；PCR上游引物5′- GCA GCT CCT AGA AGT AGA CTC TGC TC-3′，下游引物5′-GCA GGT CTG TGA TGA AAG AGG CC-3 ′。PCR反應體積為50 μL：10×buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl23 μL，2 mmol/L三磷酸脫氧核糖核苷（dNTP）1 μL，上下游引物（20 μmol/L）各1 μL，DNA 模板1 μL，Taq 酶（5×103U/L）1 μL，滅菌純水37 μL。反應條件：94℃初期變性5 min，94℃變性30 s，63℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35個循環(huán)，72℃延伸5 min。PCR產物的酶切：用SmaⅠ酶切，30℃加熱模塊，過夜酶切。2%的瓊脂糖凝膠，電泳結束于凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶并照相。選擇典型的TT、TG和GG型條帶樣品送晨綠生物公司進行測序。

1.4 觀察指標 全自動生化分析儀測定空腹血糖（FPG）、總膽固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）；放射免疫法測定空腹胰島素（FINS）；胰島素抵抗采用穩(wěn)態(tài)模型HOMA公式評估，即HOMA-IR=FINS（mU/L）×FPG（mmol/L）/22.5；競爭酶免疫測定法檢測血清8-異前列腺素F2α的水平。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進行分析。計量數據進行正態(tài)分布檢驗，非正態(tài)分布資料，經對數轉換后進行分析。以Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗樣品的群體代表性，2組間均數比較用t檢驗，多組間均數比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 8-異前列腺素F2α檢測 T2DM患者血清8-異前列腺素F2α水平高于對照組[（57.92±11.87）ng/L vs（24.81±13.5）ng/L]，差異有統(tǒng)計學意義（t=16.84，P<0.01）。

2.2 T2DM脂聯(lián)素不同基因型Hardy-Weinberg吻合度檢驗 372 bp的脂聯(lián)素基因經SmaⅠ酶切產生3種基因型：TT（野生型，372 bp）；TG（雜合子型，372 bp、163 bp、209 bp）；GG（純合子突變型，163 bp、209 bp）。對群體資料作Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗，符合Hardy-Weinberg平衡定律（T2DM組χ2=2.8，對照組χ2=0.70，總體χ2=0.932，均P>0.05）；120例T2DM患者中T等位基因的頻率為66.7%，G等位基因的頻率為33.3%，與對照組（T等位基因的頻率為73.3%，G等位基因的頻率為26.7%）比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.659，P>0.05）。 2型糖尿病GG基因型與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.059，P<0.05），見表1。

表1 T2DM組與對照組SNP 45等位基因型分布

2.3 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標比較 各基因型間FPG、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR及血清8-異前列腺素F2α水平差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）；GG型BMI高于TT及TG型（均P<0.05），見表2。

表2 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標比較 ±s）

表2 T2DM患者脂聯(lián)素基因SNP 45多態(tài)性不同基因型臨床指標比較 ±s）

*P<0.05

TT TG GG F 64 32 24 BMI（kg/m2）23.12±2.51 23.42±3.32 25.43±3.26 5.69*FPG（mmol/L）10.23±3.58 10.09±2.98 11.55±3.91 1.48 CHO（mmol/L）5.33±1.21 5.08±1.36 5.24±1.28 0.416 TG（mmol/L）2.21±1.39 2.14±1.72 2.18±1.47 0.023 64 32 24 HDL-C（mmol/L）1.11±0.32 1.05±0.27 1.19±0.31 1.44 LDL-C（mmol/L）2.96±0.76 3.07±0.82 2.87±0.69 0.49 2.96±1.86 3.17±1.92 3.65±2.23 1.17 8-異前列腺素F2α（ng/L）55.51±16.69 59.89±13.87 59.60±12.91 1.16 TT TG GG F基因型 n基因型 n HOMA-IR

3 討論

脂聯(lián)素基因突變可導致脂聯(lián)素分泌減少或功能不全[6]。Hara等[7]報道日本人患T2DM的風險與脂聯(lián)素基因SNP+45（T/G）多態(tài)性有關。+45G等位基因是由糖耐量異常（impaired glucose tolerance，IGT）轉變成糖尿病的危險預測因子[8]。本研究結果進一步證實糖尿病患者GG基因型者居多，與國內學者報道一致[9]。目前研究認為，胰島素抵抗是其發(fā)病的關鍵環(huán)節(jié)[10]。Stumvoll等[11]對371例非糖尿病人群研究結果顯示，在無糖尿病家族史的人群中，含有G等位基因者的BMI高，胰島素敏感性下降[6]。本研究結果顯示，GG基因型的HOMA-IR較TT和TG呈增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義，BMI均增高且差異有統(tǒng)計意義，提示GG基因型患者可能有較明顯的胰島素抵抗。另一研究示+45G等位基因者可能由于合并有低度炎癥，而使IGT的發(fā)生率增高[12]。

糖尿病胰島素抵抗、低度炎癥均可使體內氧化應激水平增高。本研究顯示，血漿8-異前列腺素F2α水平在T2DM組明顯高于對照組，表明T2DM患者體內氧化應激可能明顯增加，但對于有較明顯的胰島素抵抗的GG型基因T2DM患者，其體內的8-異前列腺素F2α水平較TT和TG型并無明顯增高。鑒于本研究中樣本數較少，脂聯(lián)素SNP+45 GG基因型的氧化應激狀況在其易患糖尿病的病生理機制中的作用尚有待擴大樣本量進一步研究。

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