朱永琴，景愛華，雷萬軍

匹多莫德是一種人工合成的免疫刺激劑，雖無直接殺菌及抗病毒作用，但可增強特異性及非特異性免疫功能［1］，臨床用于防治兒童反復發(fā)作的呼吸道感染，慢性支氣管炎等［2］。匹多莫德分散片現(xiàn)行質量標準收載于《中國藥典》2005 年版二部［3］，其含量測定采用紫外分光光度法，未控制其有關物質。本文參考有關文獻［4－6］，建立了高效液相色譜法測定匹多莫德分散片含量及其有關物質的方法，結果準確可靠，方法準確、高效、簡便、快速。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 Waters 2695 高效液相色譜儀;Agilent 8453 紫外可見分光光度計;DELTA－320 pH計;匹多莫德分散片對照品(開封制藥(集團)有限公司提供，供含量測定用，批號:050303，含量:99.5%);匹多莫德分散片(開封制藥(集團)有限公司生產(chǎn)，批號:20050601、20050602、20060603，規(guī)格:0.4 g/片);甲醇、異丙醇均為優(yōu)級純;水為高純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用Waters 2695 液相色譜儀;色譜柱:Eclipse Plus C18(4.6 mm ×250 mm，5 m);流動相:0.01 mol/L 磷酸二氫鈉溶液－甲醇－異丙醇(97∶2 ∶1);流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:210 nm，進樣量:5 μL。

2.2 溶液配制 精密稱取匹多莫德對照品適量(約25 mg)，置25 mL 量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液;精密量取上述溶液1 mL 置10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為含量測定對照品溶液。取匹多莫德分散片20 片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于匹多莫德12.5 mg)，置25 mL 量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量續(xù)濾液取2.0 mL置10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得含量測定供試品溶液。

精密稱取本品細粉適量(約相當于匹多莫德12.5 mg)，置25 mL 量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，制成每毫升約含匹多莫德0.5 mg 的溶液，作為有關物質檢查的供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0 mL，置100 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，配制成每ml 約含匹多莫德5 μg 的溶液，作為有關物質檢查的對照溶液。

2.3 專屬性實驗 精密稱取匹多莫德分散片細粉適量(約相當于匹多莫德50 mg)，置50 mL 量瓶中，加流動相適量使溶解后，分別加1 mol/L 鹽酸溶液1.0 mL、氫氧化鈉溶液1.0 mL 和30%過氧化氫溶液5 滴，搖勻，放置2 h 后，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液按上述液相色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定結果見圖1。由以上實驗結果的色譜圖可知，本品經(jīng)酸破壞、堿破壞、過氧化氫氧化破壞后，各雜質峰均與主成分峰均分離良好。按處方比例配制空白輔料溶液，在上述高效液相色譜條件下，取5 μL，注入液相色譜儀記錄色譜圖，輔料峰與匹多莫德主峰分離良好，對測定無干擾。

圖1 HPLC 色譜圖

2.4 檢測限 取匹多莫德供試品溶液，加流動相逐級稀釋在上述高效液相色譜條件下，取5 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定信噪比為3，檢測限為0.5 ng。

2.5 線性關系 精密稱取對照品儲備液適量，加流動相稀釋制成濃度分別為20.0、10.0、5.0、1.0、0.5、0.1、0.05 mg/mL 的溶液，作為標準曲線系列溶液。在上述液相色譜條件下，精密量取系列溶液各5 μL，注入液相色譜儀記錄色譜圖。以峰面積(A)與標準系列濃度(C)進行線性回歸，繪制標準曲線，回歸方程為:A =21624C +15621，r =0.9999。結果表明，匹多莫德在0.05 ～20.0 mg/mL 的濃度范圍內線性關系良好。

2.6 精密度及穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品，按2.8.1 項下方法測定，考察日內和日間精密度，RSD分別為0.31%(n=5)和0.75%(n=5)，測定結果表明本測定方法精密度較好。取含量測定供試品溶液，分別在室溫放置0、1、2、4、6 h 后測定，記錄色譜圖。平均峰面積為5289.2，RSD% 為0.31% (n =5)，供試品溶液在6 h 內基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 按處方比例的80%、100%、120%精密稱取匹多莫德對照品和輔料，置100 mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取上述溶液與含量測定對照品溶液各5 μL，注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，按外標法計算，即得。平均回收率為98.9%，RSD%為1.55%(n=9)。

2.8 樣品測定

2.8.1 含量測定在上述液相色譜條件下，精密量取對匹多莫德含量測定對照品溶液和供試品溶液各5 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。3 批樣品的含量測定結果見表1。

表1 含量測定結果

2.8.2 有關物質的測定 按上述色譜條件，精密量取有關物質對照溶液5 μL，注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的20%。再精密量取供試品溶液和對照溶液各5 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3 倍。3 批樣品的純度均在99.5%以上。

3 討論

測定波長的選擇。以流動相作為溶解，配置匹多莫德溶液，在190 ～400 nm 波長范圍進行掃描，匹多莫德在210 nm 波長處有最大吸收，故選擇210 nm作為檢測波長。

［2－4］，選擇0.02 mol/L 磷酸二氫鈉溶液(含0.25%的三乙胺與0.01 mol/L 己烷磺酸鈉，用磷酸調節(jié)pH)－乙腈(60∶40)水溶液、磷酸－乙腈－甲醇緩沖液(68∶22∶10)、醋酸鈉緩沖液(含0.04 mol/L 庚烷磺酸鈉溶液，0.2%的三乙胺)－甲醇(70∶30)(用冰醋酸調pH 值)、0.01 mol/L 磷酸二氫鈉溶液－甲醇－異丙醇(97∶2∶1)等幾種不同的流動相進行試驗，結果以0.01 mol/L 磷酸二氫鈉溶液－甲醇－異丙醇(97∶2∶1)為流動相時，得到較好的匹多莫德的色譜峰。

由上述試驗可知，采用HPLC 法測定匹多莫德分散片中匹多莫德含量的檢測限低，精密度、穩(wěn)定性及回收率均良好。所得結果與藥典方法無顯著差異，但較之藥典方法更簡便快捷，適用于匹多莫德分散片含量測定，可作為一種含量測定的平行方法。

參考文獻:

［1］田新平，曾小峰. 新型合成免疫調節(jié)劑－匹多莫德［J］. 中國新藥雜志，2005，14(1):111－114.

［2］徐小軍，趙志剛，徐建中，等. 匹多莫德(萬適寧)的藥理作用及其臨床應用［J］. 中國醫(yī)院用藥評價與分析，2003，3(2):115－117.

［3］國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2005 年版二部［S］.北京:化學工業(yè)出版社，2005:563－564.

［4］王鳳秋，呂潔，鄧鐵宏，等. HPLC 測定匹多莫德口腔崩解片的含量［J］. 光譜實驗室，2009，26(2):427－430.

［5］劉宏，茆玲. 高效液相色譜法測定注射用匹多莫德中匹多莫德的含量［J］. 中國醫(yī)藥導報，2010，7(10):88－89.

［6］張聰，王紹杰，麻榮麗，等. HPLC 法測定非布司他的含量及有關物質［J］. 沈陽藥科大學學報，2010，27(8):648－651，674.