寧夏自治區(qū)第五人民醫(yī)院石嘴山中心醫(yī)院(石嘴山 753000)王 飆

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子 4(Octamer-binding transcription factor 4,OCT4)是一具有高度保守DNA結(jié)合域轉(zhuǎn)錄因子,具有維持胚胎干細(xì)胞多能性和自我更新的特性,而且對于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(Multipotential stem cell,M PS)來講,是一個(gè)特殊且獨(dú)特的重構(gòu)因子[1]。OCT4在人體組織的表達(dá)和功能也已經(jīng)被研究。本次試驗(yàn)旨在探究 OCT4剪切變體在人類乳腺癌組織中的表達(dá)情況。

材料和方法

1 材 料 本實(shí)驗(yàn)病例包括 2009～ 2010年間在本院就診患者 37例,取腫瘤組織和瘤周組織外科手術(shù)標(biāo)本,共獲得腫瘤組織 37例,瘤周組織 28例。獲得的組織標(biāo)本立刻浸入液氮中速凍并在-185℃環(huán)境中保存,對標(biāo)本進(jìn)行 RNA提取操作。同時(shí),記錄患者的臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況。

2 提取 RNA和實(shí)時(shí)定量 PCR 總 RNA由組織勻漿中提取,使用 TaKaRa RNAiso Reagent(TaKaRa,Japan)試劑盒按照廠家說明書進(jìn)行操作,提取液純度使用紫外光分光光度計(jì)進(jìn)行檢測。RNasefree DNase(promega,USA)按照廠家說明書進(jìn)行操作。逆轉(zhuǎn)錄過程使用 M-MLV試劑盒(promega,USA),操作過程按照廠家說明書進(jìn)行。

對基因 OCT4A,OCT4B,OCT4B1和甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPHD)分別設(shè)計(jì)引物(見表 1),該過程參照 GenBank相關(guān)數(shù)據(jù)以及 AlleleID4.0和 Gene Runner軟件。

表1 引物序列表

實(shí)時(shí)定量 PCR使用 Taqman法,應(yīng)用 Ex Tap試劑盒(TaKaRa,Japan),ABI 7500實(shí)時(shí)定量 PCR系統(tǒng)進(jìn)行,過程嚴(yán)格遵循廠家說明書。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用 SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析,差異采用t檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用秩檢驗(yàn),P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 OCT4的三種剪切變體與臨床參數(shù)之間的關(guān)系 OCT4的三種剪切變體均在早期表現(xiàn)出較高的陽性率,Ⅰ、Ⅱ 期其中 OCT4B1 27例,OCT4A23例,OCT4B21例,但只有 OCT4B1的表達(dá)和腫瘤分期顯著相關(guān);OCT4B1和 OCT4A均在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中表現(xiàn)出較高的陽性率,而且兩者的表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān) ,見表 2。

表2 OCT4的三種剪切變體與臨床參數(shù)之間的關(guān)系(n)

2 OCT4的三種剪切變體都是良好的腫瘤標(biāo)記物我們的數(shù)據(jù)顯示 OCT4B1在乳腺癌組織和癌旁正常組織中都有所表達(dá)。 OCT4B1的檢出率為 94.59%(35/37),癌旁組織則為 32.14%(9/28);與對照組相比,OCT4B1在乳腺癌中的表達(dá)水平明顯增高,并具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

同樣地,我們檢測的 OCT4A和 OCT4B也具有類似的結(jié)果。其中,OCT4A的檢出率為 81.08%(30/37),在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著升高,與癌旁組織有顯著差異(P＜0.05)。對于 OCT4B,檢出率為 78.38%(29/37),在乳腺癌組織中表達(dá)也顯著增高,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

3 在乳腺癌中,OCT4B1是更好的腫瘤標(biāo)記物在乳腺癌中,OCT4B1有著較高的檢出率,而且和腫瘤分期,有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(見以上結(jié)果)。不僅如此,在 OCT4的三種剪切變體中,OCT4B1比其他兩種剪切變體 OCT4A和 OCT4B與m RNA比率顯著增高,而且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而 OCT4A與 OCT4B之間則無明顯差異(P＞ 0.05)。

討 論

轉(zhuǎn)錄因子 OCT4是一個(gè)眾所周知的干細(xì)胞標(biāo)記物,對于干細(xì)胞的多向分化潛能,自我更新能力等都起著重要的作用。近期有研究稱在一些腫瘤細(xì)胞系和腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)了 OCT4的表達(dá),但另一些早期的研究稱在大體腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中并未發(fā)現(xiàn) OCT4的表達(dá)?？赡苡捎?OCT4假基因在起作用,也有可能是早期的實(shí)驗(yàn)沒有能夠發(fā)現(xiàn) OCT4的剪切變體2,3。

為了深入了解OCT4及其剪切變體在腫瘤中的表達(dá)情況,我們開展了本項(xiàng)研究調(diào)查。我們在手術(shù)中搜集了37例乳腺癌腫瘤組織和 28例瘤旁組織,并觀察 OCT4A,OCT4B以及 OCT4B1在腫瘤組織中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:其一,OCT4的三種剪切變體在腫瘤組織中都呈現(xiàn)明顯的高表達(dá),這表示 OCT4的三種剪切變體都可以作為比較良好的腫瘤標(biāo)記物;其二,從臨床參數(shù)來講,我們可以看到,OCT4B1和腫瘤的分期以及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān),這表明 OCT4B1具有較高的敏感性;其三,在三種剪切變體中,OCT4B1有著最高的檢出率,起 m RNA的表達(dá)在三者中也是最高的,這表明 OCT4B1有著較高的特異性?？偠灾?OCT4的剪切產(chǎn)物 OCT4A,OCT4B,OCT4B1在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中表達(dá)增高,可以作為良好的腫瘤標(biāo)記物使用,更值得一提的是,剪切變體OCT4B1有著良好的特異性與敏感性,有望成為乳腺癌腫瘤肝細(xì)胞更好的標(biāo)記物。

[1]Kang J,Shakya A, Tantin D. Stem cells,stress,metabolism and cancer: a drama in two Octs[J].Trends Biochem Sci,2009,34:491-499.

[2]Looijenga LH,Stoop H,de Leeuw HP,et al.POU5F1(OCT3/4)identifies cells with pluripotent potential in human germ cell tumors[J].Cancer Res,2003,63:2244-2250.

[3]Monk M,Holding C.Human embryonic genes reexpressed in cancer cells[J].Oncogene,2001,20:8085-8091.