李思明 裴晶 李偉 徐福平
葉下珠復(fù)方由葉下珠、綠茶和三七葉組成,對(duì)于肝癌具有明顯的防治作用,具有解毒活血、疏肝健脾的功效。葉下珠是大戟科植物(Phyllanthus urinaria Linn)的全草,具有清熱利尿,消積解毒的功效,具有抗乙型肝炎病毒,抗腫瘤作用,抗HSV病毒等廣泛藥理活性[1-2],三七為五加科植物三七(Panax notoginseng F.H.Chen)的根,其主要藥理活性成分為人參皂苷和三七皂苷R1,R2等,具有多靶點(diǎn)抗腫瘤作用,可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化等途徑發(fā)揮抗腫瘤作用[3-4]。綠茶中具有茶多酚、兒茶素和咖啡堿等成分,通過(guò)阻斷細(xì)胞增殖、阻斷細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等途徑抑制腫瘤生長(zhǎng)增殖[5]。為考察葉下珠復(fù)方對(duì)動(dòng)物移植性肝癌的抑制作用,本文以肝癌細(xì)胞H22荷瘤小鼠為模型,探討不同劑量葉下珠復(fù)方對(duì)荷瘤小鼠肝癌細(xì)胞的影響。
SW-CJ-IF超凈工作臺(tái),蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司;十萬(wàn)分之一電子天平(Mettler Toledo AB135-S型);Milli-Q型超純水制備儀(美國(guó)Millipore公司)。
葉下珠復(fù)方顆粒,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供;注射用環(huán)磷酰胺(CTX),批號(hào)09010321,江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司。
KM小鼠,SPF級(jí),64只,雌性,18~22g,廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物質(zhì)量合格證:SCXK(粵)2008-0002。
小鼠肝癌H22細(xì)胞株,由廣東省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。
選取已接種肝癌H22腹水瘤12d,腫瘤生長(zhǎng)良好的荷瘤小鼠,頸椎脫臼處死,超凈工作臺(tái)上腹部用碘酒局部皮膚消毒,在無(wú)菌條件下取出腹水,置于已消毒燒杯中,加無(wú)菌生理鹽水稀釋成1∶3的瘤細(xì)胞懸液,置冰浴低溫保持。
在無(wú)菌條件下于小鼠右前肢腋窩皮下接種肝癌細(xì)胞懸液0.2mL(約2×107個(gè)細(xì)胞)。將造模成功的荷瘤小鼠隨機(jī)分為5組,分別為模型對(duì)照組,CTX陽(yáng)性對(duì)照組,葉下珠復(fù)方低劑量組(0.2g/(kg·d))、葉下珠中劑量組(1.0g/(kg·d))、葉下珠高劑量組(5g/(kg·d)),每組各8只。陽(yáng)性對(duì)照組采用腹腔注射給藥,其余各組均采取灌胃給藥,每天1次,連續(xù)8天,模型對(duì)照組給予同容積的生理鹽水。
末次給藥24h后,稱(chēng)取小鼠體質(zhì)量,隨后頸椎脫臼處死小鼠,剝?nèi)×鰤K、脾臟和胸腺,稱(chēng)取質(zhì)量。計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率(%),脾指數(shù),胸腺指數(shù)。脾指數(shù)、胸腺指數(shù)分別為小鼠的脾臟、胸腺的重量與它們體重的比值,腫瘤生長(zhǎng)抑制率計(jì)算公式如下:
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)采用均數(shù)(±s)進(jìn)行分析。
由表1可見(jiàn),與模型對(duì)照組比較,各給藥組小鼠的瘤重均顯著性降低(P<0.01)。葉下珠復(fù)方低、中、高劑量組的抑瘤率分別為50.3%、49.9%、50.3%。各給藥組的抑瘤率與模型對(duì)照組相比較均有顯著性差異(P<0.01),但葉下珠復(fù)方低、中、高劑量組之間的抑瘤率沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。
表1 各藥物對(duì)小鼠H22肝癌的抑瘤作用(±s,n=8)
表1 各藥物對(duì)小鼠H22肝癌的抑瘤作用(±s,n=8)
注:與模型組比較,*P<0.01。
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研究結(jié)果表明(見(jiàn)表2),與模型對(duì)照組比較,CTX的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著性降低(P<0.05),葉下珠復(fù)方的脾指數(shù)、葉下珠復(fù)方的低劑量組和高劑量組的胸腺指數(shù)沒(méi)有顯著性差異(P>0.05),但葉下珠高劑量組的胸腺指數(shù)顯著性降低(P<0.05)。
表2 各藥物對(duì)H22肝癌小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響
脾和胸腺是體內(nèi)重要的免疫器官,研究結(jié)果表明CTX組呈現(xiàn)顯著性抑瘤作用的同時(shí),體重、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著降低,葉下珠復(fù)方低、中劑量組對(duì)荷瘤小鼠的體重、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均未有明顯影響,但葉下珠復(fù)方高劑量組與模型組相比較,胸腺指數(shù)顯著性降低,說(shuō)明葉下珠復(fù)方具有一定的抑瘤作用,并沒(méi)有降低機(jī)體的免疫功能,CTX組和葉下珠復(fù)方高劑量可能對(duì)機(jī)體免疫器官具有一定的抑制作用。
腫瘤的產(chǎn)生和發(fā)展與機(jī)體免疫功能應(yīng)答密切相關(guān),而惡性腫瘤發(fā)生后又能產(chǎn)生免疫抑制因子抑制宿主的免疫功能[6]。CTX屬于抗代謝抗腫瘤藥物,本實(shí)驗(yàn)中觀察到其抑瘤率高達(dá)69.4%,顯示十分明顯的抑制腫瘤作用,但荷瘤小鼠的免疫功能明顯降低,與之比較,葉下珠復(fù)方在抑制腫瘤的前提下并能顯著提高小鼠的免疫功能,此方在防治惡性腫瘤和提高生存質(zhì)量方面具有潛在的優(yōu)勢(shì),但葉下珠復(fù)方高劑量的抑瘤作用機(jī)制需進(jìn)一步研究。
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