陳遠(yuǎn)崇，陳竹雨

結(jié)直腸癌患者血清Th 1/Th 2細(xì)胞因子水平變化及其臨床意義研究

陳遠(yuǎn)崇，陳竹雨

目的 探討結(jié)直腸癌病理分期、組織分型及手術(shù)治療對(duì)血清Th1/Th2細(xì)胞因子變化的不同影響及其臨床意義。方法 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)檢測(cè)45例結(jié)直腸癌患者和10例健康體檢者 (正常對(duì)照組)外周血中干擾素γ(IFN－γ)、白介素 (IL) －2、IL－4、IL－10的水平。結(jié)果 正常對(duì)照組、Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。其中Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組較正常對(duì)照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);結(jié)直腸癌患者隨著Dukes'分期的升高，IFN－γ、IL－2逐漸降低，IL－4、IL－10逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。腺癌組和黏液性腺癌組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。術(shù)后較術(shù)前IFN－γ、IL－2明顯升高，IL－4、IL－10明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。但術(shù)后較正常對(duì)照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。結(jié)論 結(jié)直腸癌患者外周血中Th1、Th2免疫反應(yīng)失衡，向Th2方向漂移;結(jié)直腸癌患者外周血Th1/Th2失衡程度與臨床分期呈正相關(guān)，與腫瘤的組織分型無關(guān);術(shù)后Th1/Th2失衡有可能逆轉(zhuǎn)。

結(jié)直腸腫瘤;T淋巴細(xì)胞;腫瘤分期;組織分型

結(jié)直腸癌是常見的消化道腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類健康。臨床面對(duì)的多為進(jìn)展期腫瘤，雖然目前治療水平有了顯著進(jìn)步，但術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的比例仍可達(dá)40%～70%?，F(xiàn)代研究已證實(shí)，1型、2型輔助性T淋巴細(xì)胞 (Th1、Th2)平衡失調(diào)會(huì)造成機(jī)體免疫抑制狀態(tài)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、擴(kuò)散及復(fù)發(fā)均密切相關(guān)。本研究采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)結(jié)直腸癌的病理分期、組織分型及其手術(shù)治療前后細(xì)胞因子的變化進(jìn)行分析，從而了解免疫功能變化情況，以期望有助于指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取張家口市第五醫(yī)院和張家口市第一醫(yī)院普通外科2005年3月—2010年10月行手術(shù)治療的結(jié)直腸癌患者45例為研究對(duì)象，其中男23例，女22例;年齡33～62歲，平均年齡 (52.55±13.69)歲;Dukes分期:B期24例，C期17例，D期4例;組織學(xué)分型:腺癌39例，黏液性腺癌6例。所切除標(biāo)本均已經(jīng)病理學(xué)診斷證實(shí)。外周血抽取前未經(jīng)化學(xué)治療或放射治療。同時(shí)收集同時(shí)期體檢健康者10例為正常對(duì)照組，其中男5例，女5例;年齡30～65歲，平均年齡(50.82±13.69)歲。受檢者均無免疫系統(tǒng)性疾病。

1.2 試劑 Multiskan MK3酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo公司;干擾素γ(IFN－γ)、白介素 (IL) －2和IL－4、IL－10檢測(cè)試劑盒，上海依科賽生物制品有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血清標(biāo)本的采集 正常對(duì)照組及結(jié)直腸癌患者手術(shù)前后各采取外周靜脈血2 ml，3 000 r/min，離心5 min，收集血清，－20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 細(xì)胞因子的檢測(cè) 采用ELISA檢測(cè)試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，檢測(cè)血清中 IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用(±s)表示，采用t檢驗(yàn)和方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常對(duì)照組和不同病理分期結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較 正常對(duì)照組、Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。其中Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組較正常對(duì)照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);結(jié)直腸癌患者隨著Dukes'分期的升高，IFN－γ、IL－2逐漸降低，IL－4、IL－10逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05，見表1)。

2.2 不同組織分型結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較 腺癌組和黏液性腺癌組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05，見表2)。

2.3 手術(shù)前后結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較 術(shù)后結(jié)直腸癌患者較術(shù)前IFN－γ、IL－2明顯升高，IL－4、IL－10明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (q值分別為4.15、5.63、4.96和6.92，P＜0.01)。但術(shù)后較正常對(duì)照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (q值分別為6.21、7.48、5.26和6.69，P＜0.01，見表3)。

表1 正常對(duì)照組和不同病理分期結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 1 Serum level of cytokine concentration in different pathological colorectal cancer colorectal cancer patients and normal control

表1 正常對(duì)照組和不同病理分期結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 1 Serum level of cytokine concentration in different pathological colorectal cancer colorectal cancer patients and normal control

注:IFN－γ=干擾素γ，IL－2=白介素2

IL－2 IL－4 IL－10正常對(duì)照組 10 151.83±18.13 121.68± 9.63 43.71± 9.11 12組別 例數(shù) IFN－γ 0.13±13.51 Dukes'B組 24 105.82±23.12 89.66±20.15 75.91±21.06 158.47±20.87 Dukes'C組 17 80.17±18.37 73.17±17.44 97.03±18.83 198.15±17.90 Dukes'D組 4 44.58±13.93 42.98±10.03 120.55±15.47 211.62±15.39 F 0.000 0.000 0.000 0.000 37.202 25.708 24.587 46.782 P值值

表2 不同組織分型結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 2 Serum level of cytokine concentration in different tissue－typing colorectal cancer patients

表2 不同組織分型結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 2 Serum level of cytokine concentration in different tissue－typing colorectal cancer patients

.43±23.21黏液性腺癌組 6 95.13±13.20 78.68±12.78 98.79±12.03 193.13±13.22 t IL－2 IL－4 IL－10腺癌組 39 89.83±28.13 83.52±21.63 104.15±20.91 187組別 例數(shù) IFN－γ 1.319 1.289 1.295 1.303 P值值0.163 0.184 0.192 0.176

表3 手術(shù)前后結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 3 Serum level of cytokine concentration in colorectal cancer patients before and after operation

表3 手術(shù)前后結(jié)直腸癌血清細(xì)胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 3 Serum level of cytokine concentration in colorectal cancer patients before and after operation

IL－2 IL－4 IL－10正常對(duì)照組 10 151.83±18.13 121.68±9.63 43.71± 9.11 12組別 例數(shù) IFN－γ 0.13±13.51術(shù)前 45 91.54±14.54 81.72±8.22 101.94±10.28 189.31±15.73術(shù)后 45 130.82±17.65 113.29±11.35 68.42± 8.19 157.28±14.66 F 92.616 141.699 236.795 107.037 P值值0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

輔助性T淋巴細(xì)胞 (Th)根據(jù)分泌細(xì)胞因子及效應(yīng)的不同分為兩類:Th1和Th2。Th1細(xì)胞分泌IFN－γ和IL－2等，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，能夠增強(qiáng)免疫殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，激發(fā)遲發(fā)型超敏反應(yīng);Th2細(xì)胞分泌IL－4、IL－10等，主要介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生［1］。機(jī)體處于正常狀態(tài)時(shí)，Th1/Th2類細(xì)胞因子處于平衡狀態(tài)。一旦Th1/Th2平衡失調(diào)，將會(huì)造成機(jī)體各種疾病，如過敏性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等。

隨著腫瘤的進(jìn)展，患者均會(huì)出現(xiàn)免疫抑制狀態(tài)，其機(jī)制十分復(fù)雜，最主要的原因是腫瘤細(xì)胞本身造成的。機(jī)體的抗腫瘤免疫以Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主。當(dāng)Th1/Th2平衡失調(diào)，Th1向Th2漂移時(shí)，便會(huì)造成腫瘤免疫功能嚴(yán)重減弱，促使腫瘤細(xì)胞能夠逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，從而大量增殖［2－4］。

結(jié)直腸癌的診治強(qiáng)調(diào)早期診斷、早期治療，但其在早期常無明顯癥狀，只能依靠患者的主動(dòng)篩查發(fā)現(xiàn)。因此，臨床上面對(duì)的多為進(jìn)展期腫瘤。本研究中，經(jīng)病理證實(shí)研究對(duì)象的結(jié)直腸癌病理分期多為Dukes'B期和C期。從組織分型上來講多為腺癌。與正常對(duì)照組比較，結(jié)直腸癌患者血清中Th1細(xì)胞因子 (IFN－γ、IL－2)水平下降，而Th2細(xì)胞因子 (IL－4、IL－10)水平顯著升高;并且，Dukes病理分期之間存在差異，隨著病情加重，Th1細(xì)胞因子下降幅度增加，Th2型細(xì)胞因子逐漸上升。另外，腺癌組與黏液腺癌組之間未見明顯差異，可見組織分型對(duì)細(xì)胞因子的表達(dá)無影響。

目前，結(jié)直腸癌的主要治療方法仍是以手術(shù)為主的綜合治療。盡管醫(yī)療水平有了顯著進(jìn)步，但術(shù)后5年內(nèi)，結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的比例仍可達(dá)40%～70%。手術(shù)只能清除肉眼所見腫塊，并不能確保清除所有腫瘤細(xì)胞。殘留的腫瘤細(xì)胞在機(jī)體免疫功能正常時(shí)能被機(jī)體殺死;相反，若機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，這些腫瘤細(xì)胞則能在失去免疫控制的條件下迅速增殖，造成復(fù)發(fā)［5－7］。另外，手術(shù)切除腫瘤的同時(shí)，也對(duì)機(jī)體產(chǎn)生了損傷，不僅導(dǎo)致手術(shù)創(chuàng)口的炎癥反應(yīng)，而且引起機(jī)體細(xì)胞免疫的抑制，包括淋巴細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞毒性減弱，細(xì)胞因子分泌減少，但對(duì)體液免疫的影響較小［8－9］。本研究中，手術(shù)切除腫瘤后，解除了大部分腫瘤對(duì)Th1細(xì)胞的抑制作用，Th1型細(xì)胞因子較術(shù)前明顯升高，但Th1細(xì)胞因子水平仍低于正常對(duì)照組。Th2細(xì)胞因子由于手術(shù)創(chuàng)傷的影響，雖比術(shù)前降低，但仍明顯高于正常對(duì)照組。充分說明手術(shù)治療可以逆轉(zhuǎn)Th2型細(xì)胞的偏倚。

通過對(duì)研究對(duì)象的全面分析可知，Th1、Th2細(xì)胞因子水平與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)均密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌的發(fā)病過程中，可以用免疫治療方法對(duì)Th1/Th2細(xì)胞的平衡狀態(tài)進(jìn)行干預(yù)，也有可能尋找到一個(gè)治療結(jié)直腸癌的新靶點(diǎn)。另外，通過對(duì)術(shù)后細(xì)胞因子水平的干預(yù)，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫，有可能延緩轉(zhuǎn)移，阻止復(fù)發(fā)。

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A Study on the Change of Serum Cytokine Levels in Colorectal Cancer Patients and Its Significantce

CHEN Yuanchong，CHEN Zhu－yu.The Fifth Hospital of Zhangjiakou，Zhangjiakou 075000，China

ObjectiveTo investigate the influence of pathological staging，tissue－typing and operation on Th1/Th2 imbalance in colorectal cancer patients and its significance through detecting the serum levels of Th1/Th2 type cytokines.Methods

45 colorectal cancer patients and 10 healthy volunteers(control group)were recruited for the study.Peripheral blood samples were collected，and the levels of IFN－γ，IL－2，IL－4，IL－10 levels were detected by ELISA kits.ResultsThe differences of the levels of IFN－γ，IL－2，IL－4 and IL－10 between control group，Dukes'B group，Dukes'C group and Dukes'D group were significant(P＜0.01).Compared with control group，IL－2 and IFN－γ levels of colorectal cancer patients were significantly decreased(P＜0.05)，but IL－4，IL－10 levels were significantly increased(P＜0.05).With pathogenetic condition aggravating，IL－4 and IL－10 levels were increased gradually，while IL－2 and IFN －γ levels were decreased gradually，and the difference was statistically significant(P＜0.05).The cytokine levels were not significantly different between adenocarcinoma patients and mucinous adenocarcinoma patients(P＞0.05).After operation，IL－2 and IFN －γ levels were increased significantly(P＜0.01)，but IL－4 and IL－10 levels were decreased significantly(P＜0.01).After operation，compared with control group，the IFN－γ and IL－2 levels were significantly decreased，while IL－4 and IL－10 levels were significantly increased(P＜0.01).ConclusionThere is response imbalance in Th1 and Th2 in colorectal cancer patients.The imbalanced Th1/Th2 response is correlated with Dukes staging，but uncorrelated with tissue－typing，and can be reversed by operation.

Colorectal neoplasms;T－lymphocytes;Neoplasms staging;Tissue－typing

R 735.3

A

1007－9572(2011)12－4136－03

075000河北省張家口市第五醫(yī)院 (陳遠(yuǎn)崇);張家口市第一醫(yī)院 (陳竹雨)

2011－07－12;

2011－10－13)

(本文編輯:陳素芳)