施煒綱，徐東坡，劉凱，段金榮，張敏瑩

(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，江蘇無(wú)錫214081)

大銀魚(yú)ProtosaIartx hyalocranius主要分布于渤海、黃海、東海沿岸、長(zhǎng)江、淮河中下游河道、湖泊和水庫(kù)中，在中國(guó)已形成一定規(guī)模產(chǎn)量，且具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于大銀魚(yú)適應(yīng)性強(qiáng)，一直以來(lái)是國(guó)內(nèi)天然水域增殖、移植的重要種類。至今絕大多數(shù)省市均移植了大銀魚(yú)，并獲得了成功。

許多學(xué)者對(duì)大銀魚(yú)胚胎發(fā)育進(jìn)行過(guò)研究［1－2］，但鑒于顯微攝影設(shè)備及技術(shù)條件所限，對(duì)大銀魚(yú)胚胎發(fā)育各期圖片的截取及描述尚欠詳盡。亦有學(xué)者［3］對(duì)影響大銀魚(yú)孵化率的生態(tài)因子開(kāi)展了研究，有關(guān)大銀魚(yú)的池塘養(yǎng)殖也有報(bào)道［4］，但均停留在試驗(yàn)階段，大銀魚(yú)生產(chǎn)性養(yǎng)殖至今尚未突破。對(duì)孵出的仔魚(yú)在人工養(yǎng)殖條件下的食性及行為觀察亦不夠深入且尚未形成共識(shí)［5］。本試驗(yàn)中，作者對(duì)大銀魚(yú)各期胚胎發(fā)育及出膜仔魚(yú)習(xí)性進(jìn)行了顯微觀察與研究，期望能為大銀魚(yú)人工孵化及仔魚(yú)培育提供有益的技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

大銀魚(yú)成熟親體采自太湖三山島水域，取雌、雄親體各一尾，體長(zhǎng)分別為16、19 cm，以干法人工授精獲取受精卵共1.86萬(wàn)粒［6］，加注太湖湖水約3.5 L，帶回實(shí)驗(yàn)室觀察。

1.2 方法

孵化養(yǎng)殖用玻璃水族箱 (0.8 cm×0.8 cm)，采用提前45 d曝氣的自來(lái)水，保持水位約40 cm。受精卵至原腸后期帶水移入箱內(nèi)，在室溫4～9℃條件下孵化。每天取30粒卵在顯微鏡下觀察。

采用Pixera Penguin 600CL熒光顯微數(shù)碼攝像機(jī)跟蹤拍攝胚胎發(fā)育過(guò)程，設(shè)置每1 h截拍發(fā)育圖一張，供胚胎發(fā)育各期分析。

出膜后仔魚(yú)仍在原孵化水族箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，期間不投餌，微充氣，觀察仔魚(yú)的攝食與活動(dòng)，每天取30尾仔魚(yú)進(jìn)行腸道鏡檢，觀察大銀魚(yú)開(kāi)口時(shí)機(jī)及其天然開(kāi)口餌料的組成。

2 結(jié)果

2.1 受精與孵化過(guò)程

經(jīng)測(cè)定，50粒受精卵平均卵徑為1.1 mm，孵化耗時(shí)852 h，約35.5 d，至試驗(yàn)結(jié)束共截獲胚胎發(fā)育及開(kāi)口食性圖997張。經(jīng)篩選分析，大銀魚(yú)胚胎發(fā)育有9個(gè)發(fā)育階段，含30期(表1，圖1－A～Z、a～d)。出膜后仔魚(yú)體長(zhǎng)為4.76 mm，全長(zhǎng)為4.86 mm;平游期魚(yú)苗體長(zhǎng)為5.85 mm，全長(zhǎng)為6.09 mm。

2.2 胚胎發(fā)育

成熟的大銀魚(yú)卵近圓球形，沉性，受精卵透明。受精孔 (卵膜孔)呈錐形漏斗狀，與宋慧春等［7］在電鏡下的觀察描述一致 (圖1－A，圖2)。卵表面具有細(xì)密的卵膜絲，在赤道偏動(dòng)物極一側(cè)呈圓環(huán)狀排列。卵膜絲具有較強(qiáng)的吸附力，質(zhì)量好的受精卵大多可吸附在其他物體上。一旦卵膜絲受損，卵就完全失去黏性，隨水流漂移。

2.2.1 胚盤(pán)形成 受精后3.5 h，在質(zhì)膜與卵膜之間出現(xiàn)卵周隙，卵黃粒開(kāi)始沉積于植物極，原生質(zhì)逐漸向動(dòng)物極集中，胚盤(pán)形成，單細(xì)胞隆起 (圖1－A，圖2)。

2.2.2 分裂期 在胚盤(pán)頂部出現(xiàn)經(jīng)裂溝，受精卵進(jìn)入2細(xì)胞期。此后開(kāi)始進(jìn)行N次卵裂，每次卵裂均垂直于前一次卵裂溝，細(xì)胞數(shù)以2的N次方增殖，受精卵依次進(jìn)入32細(xì)胞期、64細(xì)胞期、128細(xì)胞期、256細(xì)胞期、多細(xì)胞各期。受精后45 h進(jìn)入桑葚期，此階段細(xì)胞顆粒仍很清晰，此后受精卵分裂速度漸漸變慢 (圖1－B～H)。

2.2.3 囊胚期 細(xì)胞繼續(xù)分裂，細(xì)胞數(shù)不斷增多，單個(gè)細(xì)胞體積不斷趨小。內(nèi)層細(xì)胞出現(xiàn)腔隙，受精卵進(jìn)入囊胚早期。隨著囊胚繼續(xù)發(fā)育，細(xì)胞變得細(xì)小，外層細(xì)胞顆粒界面變得模糊，囊胚高度逐步降低，受精卵依次進(jìn)入囊胚中期、囊胚晚期，此時(shí)外胚層形成 (圖1－I～K)。

2.2.4 原腸期 隨著囊胚層逐漸下包，胚層變薄變長(zhǎng)，受精卵進(jìn)入原腸早期。胚層各部高度無(wú)明顯差異，進(jìn)入原腸中期后，原腸胚略顯垂直拉長(zhǎng)狀，胚層兩端略有增厚。隨著囊胚下包，只剩下少量卵黃沒(méi)有被包入，原腸胚又重新趨于圓形(圖1－L～N)。

2.2.5 神經(jīng)胚期 胚體輪廓初現(xiàn)，背側(cè)神經(jīng)物質(zhì)增厚，神經(jīng)溝開(kāi)始出現(xiàn)，胚體漸變?yōu)樗较蚶?，已初具胚體雛形，但頭、尾部尚難分辨。受精后約224 h，胚孔封閉，此時(shí)頭尾分化已十分明顯，胚溝延伸一線已無(wú)法見(jiàn)到受精孔。受精258 h后進(jìn)入胚體形成期，胚體形成并又漸變呈圓形，頭部器官分化征兆出現(xiàn)，神經(jīng)管前端分化為前腦、中腦和菱腦三部分。(圖1－O～Q)。

2.2.6 器官形成與組織分化階段 器官形成與組織分化在胚胎發(fā)育至289～501.25 h階段內(nèi)完成，在頭部器官分化初期，體節(jié)逐漸形成，從眼囊、嗅板的出現(xiàn)，至尾芽期胚體延伸恰好一周，卵黃囊被擠壓成扇形狀。隨著耳囊及晶體各期的出現(xiàn)，在卵黃囊上方及耳囊下方出現(xiàn)心臟原基，心臟擴(kuò)大，心包腔清晰，此時(shí)體節(jié)增至33～40對(duì)(圖1－R～W)。

2.2.7 胚體蠕動(dòng)與心臟搏動(dòng)階段 此時(shí)胚體延伸已近一周半，胚胎開(kāi)始出現(xiàn)蠕動(dòng)，初期蠕動(dòng)幅度不大，頻率較低，約6次/h。心臟尚無(wú)搏動(dòng)跡象，胚胎發(fā)育到602.5 h，心臟開(kāi)始緩慢而輕微地搏動(dòng)，初期心臟搏動(dòng)頻率為6～7次/mim，至638 h耳囊中耳石形成，肌節(jié)已達(dá)56～64對(duì)。此時(shí)心臟搏動(dòng)開(kāi)始加快，胚體蠕動(dòng)頻繁，間隔3～4 min，幅度也變大，有時(shí)能見(jiàn)到整個(gè)胚體劇烈蠕動(dòng)，接連2～3次，胚體與卵膜已無(wú)粘連，此時(shí)心臟搏動(dòng)達(dá)30次/min(圖1－X ～Z、a)。

2.2.9 仔魚(yú)出膜階段 胚體心跳加速 (70～86次/mim)，翻轉(zhuǎn)非常劇烈，即進(jìn)入出膜前期 (圖1－c1)。在孵化腺分泌物溶解卵膜及胚體劇烈翻轉(zhuǎn)作用下，卵膜破裂，含脂滴的卵內(nèi)溶物滲出卵膜(圖1－c2)。至835 h仔魚(yú)出膜開(kāi)始，出膜方式以頭部破膜最為多見(jiàn) (圖1－d1、d2)，也有以尾部破膜或頭尾同時(shí)破膜的，或以背、胸、腹等部位破膜的，但較少見(jiàn)。剛出膜的仔魚(yú)全長(zhǎng)不足5 mm，鰭尚未出現(xiàn)，僅在背部、腹部和尾部有皮膚褶皺。腹部具黑色花紋色素，仔魚(yú)具趨光性。至852 h，進(jìn)入出膜高峰。至874 h，仔魚(yú)出膜全部完成。出膜后仔魚(yú)平均體長(zhǎng)為4.76 mm，平均全長(zhǎng)為4.86 mm。初孵仔魚(yú)卵黃囊呈卵圓形。

2.3 大銀魚(yú)仔魚(yú)早期的習(xí)性

水溫為7～10℃時(shí)，仔魚(yú)平游需10 d，至平游期魚(yú)苗平均體長(zhǎng)為5.85 mm，平均全長(zhǎng)為6.09 mm。但至平游后卵黃囊仍未完全吸收，此階段卵黃囊逐漸轉(zhuǎn)成前粗后細(xì)長(zhǎng)條形，附于腸管下方，后期卵黃囊長(zhǎng)約占體長(zhǎng)的60%，卵黃囊腹面每側(cè)可見(jiàn)一列黑色素細(xì)胞。仔魚(yú)游動(dòng)活潑，趨光，此時(shí)雖已能平游，但游泳能力仍很弱，只能作短距離平直游動(dòng)，而后還會(huì)下沉，這一階段可持續(xù)20 d左右。

出膜后10～20 d，養(yǎng)殖水體中浮游植物生物量為5.8～6.2 mg/L。在鏡下觀察仔魚(yú)腸道，發(fā)現(xiàn)浮游植物出現(xiàn)率高低依次為:菱形藻、柵列藻、針桿藻、衣藻、裸藻及微囊藻6個(gè)屬種 (圖3)。這一時(shí)期是仔魚(yú)口器逐步發(fā)育完善的階段，仔魚(yú)在此階段的后期攝食行為很特別。仔魚(yú)緩慢游動(dòng)至適口餌料的下方，頭部向上，魚(yú)體收縮成“S”狀，逐步靠近目標(biāo)后，通過(guò)身體迅速?gòu)椛煜蛏蟻?lái)捕獲目標(biāo)。

表1 大銀魚(yú)胚胎發(fā)育的過(guò)程Tab.1 The embryonic development of large icefish

圖1 大銀魚(yú)的胚胎發(fā)育Fig.1 The embryonic development of large icefish

圖2 受精卵單細(xì)胞胚盤(pán)Fig.2 Disc stage at single－cell stage

圖3 腸道內(nèi)的浮游植物Fig.3 Phytoplankton in the intestine of the larvae

仔魚(yú)出膜21～40 d內(nèi)，已完全能平游，營(yíng)水平游動(dòng)捕食，全長(zhǎng)平均為7.22 mm?？谝褟堥_(kāi)，活潑游動(dòng)，胸鰭基對(duì)體軸幾乎呈垂直狀態(tài)，其下面可見(jiàn)肩帶原基。鰾已充氣，肝臟形成，約占據(jù)5個(gè)肌節(jié)范圍，鏡檢可見(jiàn)腸管蠕動(dòng)，能夠消化食物。此階段對(duì)腸道進(jìn)行鏡檢，發(fā)現(xiàn)食物以輪蟲(chóng)為主，按出現(xiàn)率高低依次為:角突臂尾輪蟲(chóng)、蒲達(dá)臂尾輪蟲(chóng)、萼花臂尾輪蟲(chóng)、多肢輪蟲(chóng)、三肢輪蟲(chóng)、裂足輪蟲(chóng)、疣毛輪蟲(chóng)。魚(yú)苗食量較大，白天攝食頻率高于夜間，攝入的輪蟲(chóng)可布滿腸道 (圖4)，鏡檢發(fā)現(xiàn)輪蟲(chóng)殼及其休眠卵無(wú)法被魚(yú)苗消化吸收，最終從肛門(mén)排出(圖5、圖6)。

3 討論

本試驗(yàn)中，受精卵從分裂到出膜歷時(shí)35 d，實(shí)際上發(fā)育進(jìn)程主要取決于孵化期總積溫，同時(shí)還受光照、換水頻率的影響［3］。

圖4 腸道內(nèi)輪蟲(chóng)Fig.4 Rotifer in the intestine of the larvae

圖5 無(wú)法消化的輪蟲(chóng)殼從肛門(mén)處排出Fig.5 Shell of rotifers discharging from anus of the larvae

圖6 無(wú)法消化的休眠卵從肛門(mén)處排出Fig.6 The resting eggs of rotifers discharging from anus of the larvae

大銀魚(yú)生產(chǎn)性養(yǎng)殖長(zhǎng)期以來(lái)停滯不前，關(guān)鍵是大銀魚(yú)苗種供應(yīng)無(wú)保障。早期仔魚(yú)不肯開(kāi)口，無(wú)法順利轉(zhuǎn)入主動(dòng)攝食是主要技術(shù)障礙，隨著仔魚(yú)卵黃的消耗殆盡即大量死亡。本試驗(yàn)中觀察發(fā)現(xiàn)，仔魚(yú)出膜后水體中大量卵膜碎屑會(huì)在2～3 d內(nèi)全部自行溶解，試驗(yàn)水體中未進(jìn)行過(guò)人工投餌，但卻出現(xiàn)了浮游植物和輪蟲(chóng)，這與養(yǎng)殖水中含有一部分太湖湖水及卵膜碎屑轉(zhuǎn)化為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有一定關(guān)系。關(guān)于大銀魚(yú)仔魚(yú)早期是否攝取浮游植物一直有爭(zhēng)議。易建國(guó)等［5］認(rèn)為，大銀魚(yú)仔魚(yú)不能利用藻類。本研究中觀察的結(jié)果與朱成德［8］報(bào)道的大銀魚(yú)仔魚(yú)腸道出現(xiàn)少量浮游植物相吻合。榮長(zhǎng)寬等［9］亦報(bào)道野外水體大銀魚(yú)仔魚(yú)對(duì)小球藻、衣藻有一定量的攝入。本研究中觀察發(fā)現(xiàn)，大銀魚(yú)仔魚(yú)早期是以浮游植物作為開(kāi)口餌料 (圖3)，逐步過(guò)渡到捕食輪蟲(chóng)(圖4)。這也印證了仔魚(yú)在口器的不同發(fā)育階段攝食不同的適口餌料［10］。

關(guān)于大銀魚(yú)卵膜絲的發(fā)生、游離與著生至今尚有爭(zhēng)議［11－12］，大致可分為:1)卵膜絲從受精孔一極生長(zhǎng)出來(lái)或粘連于受精孔區(qū)，并朝相對(duì)一極游離，即“單極正向觀點(diǎn)”;2)卵膜絲從受精孔相對(duì)的一端發(fā)生，向受精孔方向游離，即“單極反向觀點(diǎn)”;3)卵膜絲從兩極游離出來(lái)，形成一環(huán)二端呈游離狀的細(xì)絲，絲中端黏于赤道偏動(dòng)物極一側(cè)呈圓環(huán)狀排列，即“兩極觀點(diǎn)”。本試驗(yàn)結(jié)果表明，卵膜絲著生在略偏卵膜孔一側(cè)的赤道環(huán)線上，構(gòu)成環(huán)狀卵膜絲，這與弋志強(qiáng)等［12］的觀察描述相符。但卵膜絲的發(fā)源處、游離方向、游離時(shí)機(jī)以及是單極游離還是兩極游離，本試驗(yàn)中尚無(wú)充分證據(jù)，有待進(jìn)一步深入研究。

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