胡玉琴，蔣學(xué)華，于志瀛，陶勇，黃美蘭

(1.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣州 510520;2.四川大學(xué)華西藥學(xué)院臨床藥學(xué)與藥事管理學(xué)系，成都 610041)

非索非那定(fexofenadine)是特非那定在人體的活性代謝產(chǎn)物，是組胺H1受體拮抗藥［1］，用于治療季節(jié)性過敏性鼻炎及慢性特發(fā)性蕁麻疹。近年來國(guó)外研究認(rèn)為［2-3］，非索非那定的吸收與腸黏膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)密切相關(guān)。P-gp介導(dǎo)的腸道分泌可以降低非索非那定的口服吸收。千金藤素(cepharanthine)是從防己科千金藤屬植物的塊根中提取分離出的一種雙芐基異喹啉類生物堿單體化合物，具有抗炎、抑菌、調(diào)節(jié)免疫等多種生物學(xué)活性［4］。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)［5］表明，其有逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的作用，效果明顯優(yōu)于經(jīng)典的P-gp逆轉(zhuǎn)藥，且細(xì)胞毒性作用遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)的逆轉(zhuǎn)藥。為此，筆者研究了千金藤素對(duì)非索非那定在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響，為將千金藤素開發(fā)為潛在的P-gp抑制藥提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 LC-10AT高效液相色譜儀［包括SPD-10AV紫外檢測(cè)器，LC-10AT泵(日本島津)］，Genius 3漩渦混合儀(德國(guó)IKA公司)，Anke TGL-16C臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 試藥 非索非那定原料藥(杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)康潤(rùn)制藥有限公司，含量＞99%)，非索非那定對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100852-200601)，非那西丁原料藥(佳木斯鹿靈制藥有限責(zé)任公司，含量:＞99.5%，批號(hào):0703035)，非索非那定混懸液(自制，精密稱取30 mg非索非那定原料藥，置10 mL量瓶，用20%甘油稀釋定容至刻度，搖勻，得每毫升含非索非那定3.086 8 mg的胃灌注液)，千金藤素原料藥(昆明長(zhǎng)春花科技有限公司提供，含量:93%，批號(hào):20060319P)，甲醇、丙酮為色譜純，水為二級(jí)純化水，其他試劑為分析純。

1.3 動(dòng)物 雄性SD大鼠［四川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào):0003481，平均體質(zhì)量為(250±20)g］。

2 方法與結(jié)果

2.1 給藥方法 SD大鼠10只，雌雄各半，隨機(jī)分成兩組，每組5只，禁食24 h，自由飲水。A組灌胃給予3.086 8 mg·mL-1非索非那定胃灌注液，B組灌胃給予非索非那定濃度為 3.086 8 mg·mL、千金藤素濃度為2.007 mg·mL-1的胃灌注液，均10 mL·kg-1。分別于灌胃后 0，0.083，0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12 h尾靜脈取血約0.35 mL，置0.5 mL肝素化離心管，8 000 r·min-1離心5 min，分離血漿，并于-20 ℃保存。

2.2 血藥濃度測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:DikmaTMC18柱(5.6 mm×250 mm，4.6 μm)，流動(dòng)相:乙腈-0.5% 磷酸二氫鉀(pH3.8)-三 乙 胺 (30∶ 70∶ 0.3)，流 速:1.2 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm，柱溫:40℃;進(jìn)樣量:20 μL。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取大鼠空白血漿100 μL，精密加入非索非那定對(duì)照品系列濃度甲醇液20 μL，使血漿濃度分別為 0.098，0.196，0.392，0.980，1.960，4.200，7.000 μg·mL-1。再于各管中精密加入14 μg·mL-1非那西丁(內(nèi)標(biāo))溶液 20 μL，充分混合后加入乙腈 300 μL。渦旋 5 min，15 000 r·min-1離心5 min，取上清液置于另一離心管中，50℃下氮?dú)鈸]干后，用流動(dòng)相75 μL 溶解，渦旋1 min，取20 μL 進(jìn)樣，記錄色譜圖與峰面積。以非索非那定與內(nèi)標(biāo)峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)，非索非那定濃度(X)為橫坐標(biāo)，用最小二乘法線性回歸，得回歸方程:Y=0.590 3X-0.042 2(r=0.999 7)。表明血漿樣品在0.098～7.000 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定量限為0.098 μg·mL-1。

2.2.3 方法專屬性考察 在“2.2.1”項(xiàng)條件下，分別將空白血漿、空白血漿加內(nèi)標(biāo)和非索非那定、血漿樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下處理，進(jìn)樣，色譜圖見圖1。非那西丁的保留時(shí)間約10.8 min，非索非那定的保留時(shí)間為14.6 min，內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾內(nèi)標(biāo)及非索非那定的分離測(cè)定。

2.2.4 方法回收率與精密度實(shí)驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備高、中、低濃度質(zhì)控樣品，連續(xù)3 d測(cè)定，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線同時(shí)進(jìn)行，考察方法回收率及日內(nèi)、內(nèi)間精密度(表1)。

2.2.5 血漿樣品與相關(guān)溶液的穩(wěn)定性考察 取0.2，5.0 μg·mL-1非索非那定對(duì)照品甲醇溶液，室溫放置24 h后測(cè)定(n=3)，藥物剩余率分別為(99.73±0.60)%(n=3)和(101.8±2.1)%(n=3)。另將濃度為 0.02，0.5 μg·mL-1的質(zhì)控樣品，置-70 ℃保存 7 d后測(cè)定，藥物剩余率分別為(99.6±3.6)%(n=3)和(106.4±1.4)%(n=3)。高、低濃度的質(zhì)控樣品按“2.2.2”項(xiàng)下處理后放置12 h測(cè)定，藥物剩余率分別為(102.2±0.6)%(n=3)和(103.8±6.6)%(n=3)。結(jié)果表明，非索非那定在上述存放狀態(tài)下基本穩(wěn)定。

圖1 空白血漿(A)、空白血漿加非索非那定對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)(B)和大鼠給藥后血漿樣品(C)的HPLC色譜圖1.內(nèi)標(biāo);2.非索非那定Fig．1 HPLC chromatograms blank plasma(A)and blank plasma spiked with fexofenadine and internal standard(I．S)(B)and plasma sample after iv administration of fexofenadine(C)1.I.S;2.fexofenadine

表1 方法回收率和日內(nèi)、日間精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab．1 The recovery，inter-and intra-day precision μg·mL-1，n=5

2.4 藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 A、B組大鼠給藥后血藥濃度-時(shí)間關(guān)系曲線呈二室開放模型(圖2)，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。

從圖2、表2可以看出，A、B組的血藥濃度-時(shí)間曲線形狀相似，均于1～3 h后達(dá)峰，且該曲線存在多峰現(xiàn)象。與A組比較，B組血藥濃度升高，AUC0-t、Cmax增大明顯，AUC0-t增加 7.09%(P＜0.01)，Cmax增大15.67%(P＜0.05)。tmax、MRT、Ka變化不明顯(P＞0.05)。表明合用千金藤素后，非索非那定的吸收增加，生物利用度增大。

3 討論

目前已報(bào)道的非索非那定血藥濃度測(cè)定僅限于高效液相熒光檢測(cè)法和液質(zhì)聯(lián)用法［6-7］。高效液相紫外檢測(cè)方法一般用來檢測(cè)制劑配方中非索非那定的含量。而非索非那定是藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物，由于它在體內(nèi)不被代謝，常用來作為體內(nèi)評(píng)價(jià)P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)行為的探針?biāo)幬铮?-9］。因此，本實(shí)驗(yàn)中建立的方法也可用于轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的藥動(dòng)學(xué)相互作用的研究。

圖2 2組灌胃給藥后非索非那定藥物濃度-時(shí)間曲線Fig．2 Plasma concertration-time curves of fexofenadine after oral administration in the 2 groups

表2 2組大鼠非索非那定的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tab．2 Main pharmacokinetic parameters of fexofenadine the 2 groups ±s

表2 2組大鼠非索非那定的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tab．2 Main pharmacokinetic parameters of fexofenadine the 2 groups ±s

組別Cmax/(μg·mL-1)tmax/h AUC0-12/(mg·h·L-1)MRT/h Ka/h-1 A 組 1.225±0.770 1.800±0.447 5.379±1.570 5.013±0.660 1.680±0.723 B 組 1.417±0.440 1.400±0.822 8.088±1.760 4.770±0.171 1.895±0.766

大鼠灌胃給予非索非那定后，其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程符合二室開放模型，藥物濃度-時(shí)間曲線存在多個(gè)峰現(xiàn)象。合用千金藤素后，非索非那定Cmax、AUC0-t、絕對(duì)生物利用度顯著增加，但tmax無(wú)明顯變化，灌胃給藥后均于1～3 h后達(dá)峰。近年來研究表明［5］，千金藤素可部分逆轉(zhuǎn)細(xì)胞的多藥耐藥性，效果明顯優(yōu)于經(jīng)典的P-gp逆轉(zhuǎn)藥，而非索非那定是P-gp的底物［8-9］，因此可以初步認(rèn)為P-gp可能參與了非索非那定大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程。合用千金藤素后，千金藤素可能限制了P-gp外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體而使非索非那定的生物利用度增加。

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