舒成仁，葛苗苗，黃露，吳海燕，黎維勇

(1.湖北省黃石市中心醫(yī)院藥劑科，435000;2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院藥劑科，武漢 430022;3.湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究院，武漢 430061)

復(fù)方利多卡因乳膏是一種淺表鎮(zhèn)痛藥，主要由利多卡因和丙胺卡因組成，能夠滲透到達(dá)真皮層，實(shí)現(xiàn)長時(shí)間的鎮(zhèn)痛效果。該藥適用于淺表皮膚各種小手術(shù)的鎮(zhèn)痛，尤其對減輕兒童注射疼痛有顯著作用。為評價(jià)該制劑，筆者采取藥物對照的方法研究該制劑透皮吸收效果并觀察存放過程對其透皮吸收的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀(Waters510泵，486檢測器)，TK-12A透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀(上海偕凱科技貿(mào)易有限公司)，電子分析天平AUW22OD(日本島津)，PHS-3B pH計(jì)(上海精科雷磁)。

1.2 試藥 利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品(批號:1P000353)，丙胺卡因(批號:1P000356)。實(shí)驗(yàn)藥:5%利多卡因透皮乳膏(Lidiprine Cream，成分:利多卡因、丙胺卡因，中生生技制藥股份有限公司淡水廠，批號:91020，81044，71071);對照藥:5%安麻樂乳膏(Emla，批號:LA4540，利多卡因∶丙胺卡因 =1∶1，油/水性乳劑，這種制劑具有皮膚麻醉作用且適用于表皮處理，臺灣阿斯特捷利康股份有限公司生產(chǎn))。實(shí)驗(yàn)所用試劑甲醇為色譜純，磷酸二氫銨、氫氧化鈉為分析純。

1.3 動物 SD大白鼠9只，購于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部，雄性，體質(zhì)量250～300 g，合格證號:SCXK(鄂)2004-0007。

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC測定方法

2.1.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:0.5%磷酸二氫銨(pH7.0)∶甲醇(30∶70)混合溶液;流速:1 mL·min-1，檢測波長:254 nm;進(jìn)樣量:20 μL;柱溫為室溫。

2.1.2 專屬性實(shí)驗(yàn) 對照品溶液的制備:精密稱取利多卡因、丙胺卡因適量，用流動相稀釋成每毫升含利多卡因、丙胺卡因各約31.25 μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。樣品溶液:取乳膏劑1.0 g，均勻地涂布于Franz擴(kuò)散池的鼠皮上，1 h取接收液適量，經(jīng)孔徑0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為樣品溶液?？瞻谆|(zhì)液:取空白基質(zhì)1.0 g均勻地涂布于Franz擴(kuò)散池的鼠皮上，8 h后取接收液適量，經(jīng)孔徑0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為空白基質(zhì)液。

分別取上述對照品溶液、樣品溶液、空白基質(zhì)液20 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明空白基質(zhì)及皮膚不干擾測定。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取利多卡因、丙胺卡因各10 mg，分別置于10 mL量瓶，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，各精密量取5 mL，置于10 mL量瓶中，得標(biāo)準(zhǔn)儲備液(利多卡因、丙胺卡因的濃度均為500 μg·mL-1)。制備利多卡因、丙胺卡因?qū)φ掌啡芤簼舛染鶠?250.00，125.00，62.50，31.25，25.00，12.50 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，搖勻，取 20 μL 進(jìn)樣，按峰面積(A)對濃度(C)進(jìn)行回歸。線性范圍均為12.5～250.0 μg·mL-1，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為利多卡因:A=1 765.5C+3 052.7(r=0.999 6);丙胺卡因:A=10 203C+31 319(r=0.999 4)。

2.1.4 相對回收率實(shí)驗(yàn) 將利多卡因、丙胺卡因?qū)φ掌啡芤?，加入已知含量的透皮吸收溶液中，分別制備對照品濃度為 12.5，31.25，125 μg·mL-1的樣品溶液，每個濃度各3份樣品。被檢測的樣本的藥物濃度減去透皮溶液的本底濃度與加入的已知對照品濃度的比值，即為本方法的加樣回收率。結(jié)果顯示，其中所含利多卡因的平均回收率為101.9%(RSD為1.58%)，丙胺卡因的平均回收率為100.2%(RSD為2.98%)。

2.1.5 精密度與穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取相對回收率實(shí)驗(yàn)中的中濃度樣本，連續(xù)進(jìn)樣6次，觀察波動性。結(jié)果顯示，該檢測方法精密度良好(利多卡因RSD 1.98%，丙胺卡因RSD 2.17%);取相對回收率實(shí)驗(yàn)中的中濃度樣本，室溫下放置6 h，進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，在室溫下放置6 h其中所含的藥物濃度基本不變(利多卡因和丙胺卡因的RSD分別為0.76%和0.57%)。

2.2 體外鼠皮的制備 大鼠斷頸處死后，用剪刀減去大鼠腹部的毛，涂上脫毛膏，放置1～2 min后刮去脫毛膏，用水沖洗，剪下腹部皮膚，除凈皮下脂肪，洗凈，將其置于0.9%氯化鈉溶液中，冷藏，備用，不超過7 d［1-2］。

2.3 體外透皮吸收實(shí)驗(yàn) 將大鼠皮膚固定在改進(jìn)的Franz擴(kuò)散池的上、下兩室之間，角質(zhì)層朝上，準(zhǔn)確稱取凝膠1.0 g，均勻涂于皮膚表面，接受池(擴(kuò)散面積=3 cm2，容積7 mL)中盛pH7.4的磷酸鹽緩沖液為接受液，且接受液與皮膚真皮層剛好接觸［3］。在恒溫［(37±1)℃］下保持恒速(300 r·min-1)，不斷攪拌。以后于涂藥后的 1，2，3，4，5，6，7，8 h，分別取全部接受液同時(shí)補(bǔ)充等量接受液進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。取出各時(shí)段的透皮接受液，樣品用孔徑0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液20 μL進(jìn)樣(必要時(shí)加流動相定量稀釋)，記錄峰面積，通過外標(biāo)法計(jì)算釋放液中藥物濃度，計(jì)算各時(shí)點(diǎn)的藥物釋放量，再計(jì)算各時(shí)點(diǎn)的累計(jì)釋放量(Q)，以Q-t作線性回歸，直線的斜率即為藥物釋放速率［4］。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用軟件SPSS13.0，對不同制劑和同制劑不同批次各時(shí)點(diǎn)藥物累計(jì)釋放量和釋放速率進(jìn)行方差分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)藥物與對照藥各時(shí)點(diǎn)及平均累積釋藥量對比結(jié)果，以制劑丙胺卡因、利多卡因平均累積釋放量-時(shí)間曲線圖表示(圖1A，圖1B)。方差分析各時(shí)點(diǎn)丙胺卡因和利多卡因累積釋藥量均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

3 批實(shí)驗(yàn)藥(批號:91020，81044，71071)丙胺卡因、利多卡因各時(shí)點(diǎn)累積釋藥量經(jīng)方差分析P均＞0.05，說明各時(shí)點(diǎn)累計(jì)釋放量均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2，表2)。

表1 實(shí)驗(yàn)藥和對照藥累積釋藥量方差分析結(jié)果Tab．1 Variance analysis of cumulative release of test drugs and control drugs

表2 3批實(shí)驗(yàn)藥物累積釋藥量方差分析結(jié)果Tab．2 Variance analysis of cumulative release of 3 batches of drugs

3 討論

筆者在本實(shí)驗(yàn)中所用鼠皮由專人采集，雖來源穩(wěn)定，但時(shí)間各異，而且手工制備過程難免存在差異，透皮吸收實(shí)驗(yàn)中藥物涂布的均勻性有差異，可能會對單次實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生偏倚［5-6］。通過多次平行實(shí)驗(yàn)，基本可以剔除系統(tǒng)誤差。雖然不同存放時(shí)間的實(shí)驗(yàn)藥釋藥曲線有所差異，但是釋藥累積量及釋藥速率經(jīng)方差分析，均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明在一定時(shí)間內(nèi)的存放對藥物釋藥透皮吸收無影響。

以利多卡因和丙胺卡因制成經(jīng)皮吸收的復(fù)方利多卡因乳膏，局部用藥方便、安全。本研究證實(shí)受試乳膏在有效期內(nèi)的不同存放時(shí)間段，其透皮釋放穩(wěn)定，與對照藥物的透皮釋藥效果相似。

［1］ 官仕杰，閆小平，毛超一，等.微米大黃痤瘡乳膏的透皮吸收研究［J］.中國中藥雜志，2008，33(10):1215-1217.

［2］ 王勇，賈曉斌，李霞，等.復(fù)方香黃巴布膏體外透皮吸收研究［J］.中成藥，2006，28(9):1254.

［3］ 虞瑞堯.5%恩納霜在皮膚科臨床的應(yīng)用［J］.中國新藥雜志，2000，9(9):608-610.

［4］ FLEISCHER A B，F(xiàn)ORD P G.How to minimize adverse effects of topical anesthetics［J］.Skin Aging，1998，6(3):54-61.

［5］ 張峰，楊媚，毛德香.月桂氮酮對利多卡因噴霧劑中利多卡因透皮吸收的影響［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29(1):31-33.

［6］ 周建平，鐘鳴，黃建華.尼莫地平透皮制劑的研究［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，31(5):348-351.