封建凱 馬端葉 姜正德 陳世峰 陳靜 金文文

梅毒是由Tp（treponema pallidum，梅毒螺旋體）感染引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，近年來(lái)，我國(guó)梅毒發(fā)病率同全球一樣，呈快速上升趨勢(shì)[1]，對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。梅毒潛伏期長(zhǎng)、傳染性強(qiáng)、自然病程中臨床表現(xiàn)復(fù)雜，特別是晚期梅毒可累及皮膚粘膜、骨骼、眼睛、神經(jīng)及心血管內(nèi)臟系統(tǒng)，嚴(yán)重者可危及生命。但Tp感染機(jī)體后的免疫學(xué)損傷機(jī)制至今尚未闡明，我們通過(guò)對(duì)梅毒患者血清中ANA的檢測(cè)，研究Tp感染后機(jī)體產(chǎn)生自身抗體的情況，從自身免疫學(xué)角度闡述梅毒臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變的可能原因，同時(shí)為研究梅毒的免疫學(xué)損傷機(jī)制提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2010年3月～2011年5月我院皮膚性病門(mén)診確診的梅毒患者212例為研究對(duì)象，梅毒血清學(xué)確證試驗(yàn)TPPA檢測(cè)均陽(yáng)性，男66例，女146例，年齡16～68歲，平均（29.6±9.4）歲，其中160例TRUST試驗(yàn)陽(yáng)性，52例TRUST試驗(yàn)陰性。臨床均無(wú)自身免疫性疾病癥狀和其他性傳播疾病。另選正常對(duì)照組136例，均為我院健康查體者新鮮血清標(biāo)本，男90例，女46例，年齡17～74歲，平均（35.1±13.1）歲，TPPA和乙肝表面抗原檢測(cè)均陰性，本試驗(yàn)在所有研究對(duì)象知情同意并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行。

1.2 試劑和儀器

TPPA檢測(cè)試劑盒為日本富士瑞必歐株式會(huì)社產(chǎn)品，TRUST診斷試劑盒購(gòu)自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，ANA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自歐盟醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司；熒光顯微鏡為蔡司Axiostar plus。

1.3 研究方法

1.3.1 項(xiàng)目檢測(cè) 取所有研究對(duì)象及正常對(duì)照組血清標(biāo)本（均無(wú)溶血或脂血現(xiàn)象）進(jìn)行ANA檢測(cè)，ANA采用間接免疫熒光法，基質(zhì)為Hep-2細(xì)胞和猴肝，試驗(yàn)同時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2 結(jié)果判定 各種核型的結(jié)果均以定性研判。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)各組中ANA的陽(yáng)性率進(jìn)行x2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

212 例梅毒患者血清ANA的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，其陽(yáng)性率（44.8%）顯著高于正常對(duì)照組（16.2%），差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01。

表1 梅毒患者ANA結(jié)果

在212例梅毒患者中，有52例TRSUT試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，根據(jù)TRUST試驗(yàn)結(jié)果將研究對(duì)象分組，結(jié)果見(jiàn)表2。TRUST試驗(yàn)陽(yáng)性的梅毒患者ANA陽(yáng)性率分別高于TRUST試驗(yàn)陰性的梅毒患者（P＜0.05）和正常對(duì)照組（P＜0.01），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而TRSUT試驗(yàn)陰性的梅毒患者ANA陽(yáng)性率與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.645。

表2 TRUST結(jié)果不同的梅毒患者ANA陽(yáng)性率

3 討論

TPPA 是用無(wú)生物活性的明膠顆粒做抗原載體吸附從兔睪丸中提取的梅毒螺旋體粉碎物抗原，檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體，屬于Tp感染的確證試驗(yàn)[2]，對(duì)各期梅毒檢測(cè)的敏感性可達(dá)98.3%[3]，特異性達(dá)100%[4]。TRUST 是以膽固醇晶粒為載體，包被上心磷脂和卵磷脂構(gòu)成VDRL抗原顆粒，當(dāng)抗原與患者血清中反應(yīng)素以一定比例相互作用時(shí)出現(xiàn)凝集即為陽(yáng)性，此試驗(yàn)方法所包被抗原并非Tp自身成分，因此，檢測(cè)出的反應(yīng)素為非梅毒特異性抗體，一般用于梅毒的初篩檢查。

ANA是用間接免疫熒光法以Hep-2細(xì)胞結(jié)合猴肝臟組織為基質(zhì)檢測(cè)血清中自身抗體，基質(zhì)中約有120～150種抗原成分，在自身免疫性疾病的初篩診斷中應(yīng)用廣泛，具有重要的臨床意義。ANA陽(yáng)性往往預(yù)示著機(jī)體中存在針對(duì)自身器官或組織的抗體，盡管ANA無(wú)器官和種屬特異性[5]，大約5%的ANA陽(yáng)性個(gè)體可無(wú)相應(yīng)的臨床癥狀[6]，但抗體的持續(xù)存在和滴度的持續(xù)增高將會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生慢性免疫損傷，最終導(dǎo)致某些器官或組織的病理變化。早期認(rèn)為，自身免疫性疾病患者體內(nèi)可能存在與TRUST包被抗原產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗體，但曹文苓等[7]對(duì)33例各種自身抗體陽(yáng)性患者的血清進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)與TRUST試驗(yàn)出現(xiàn)交叉反應(yīng)的假陽(yáng)性病例。

自然病程中，Tp感染2年后，甚至長(zhǎng)達(dá)l0～15年，病變可波及全身組織和器官，病損部位Tp少但破壞性大，若侵害心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，可危及生命。多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從體液免疫和細(xì)胞免疫等多方面入手對(duì)梅毒螺旋體感染后的免疫損傷機(jī)制進(jìn)行研究[8-9]，獲得了大量的寶貴資料，但是至今仍未能圓滿解釋Tp感染機(jī)體后自然病程中表現(xiàn)出的多樣化特征。我們的研究發(fā)現(xiàn)，TRUST陽(yáng)性的梅毒患者其ANA的陽(yáng)性率顯著高于TRUST陰性的感染者（P＜0.01），而TRUST陰性的梅毒感染者其ANA陽(yáng)性率與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。據(jù)此推測(cè)，梅毒臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變可能與患者機(jī)體中產(chǎn)生自身抗體有關(guān)，機(jī)體在Tp的刺激下器官組織損傷，釋放自身免疫原性成分，誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生自身抗體，在自然病程中出現(xiàn)慢性、系統(tǒng)性器官組織損傷表現(xiàn)。晚期梅毒患者體內(nèi)Tp減少，特異性抗體滴度降低，但臨床癥狀反而嚴(yán)重的現(xiàn)象，也許正是由于自身抗體對(duì)宿主組織器官長(zhǎng)期免疫損傷的結(jié)果。對(duì)Tp侵入機(jī)體后最初如何造成組織損傷釋放自身免疫原性物質(zhì)的機(jī)制尚未完全闡明，但有研究表明[8,11]Tp的外膜脂蛋白是梅毒感染期間的主要促炎癥介質(zhì)，在激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)中起重要作用，其中Tp0751重組蛋白可通過(guò)TLR2和C14途徑激活MAPKs/p38和NF-κB，誘導(dǎo)THP-1表達(dá)CKs，其可能是Tp的一個(gè)重要的致病因子。

TRUST檢測(cè)屬于非特異性試驗(yàn)，所檢測(cè)出的非特異性抗體對(duì)機(jī)體無(wú)保護(hù)作用，經(jīng)過(guò)治療后，抗體可以逐漸減少直至轉(zhuǎn)為陰性。因此，可以用以療效觀察及判愈[10,12]。在《2010年美國(guó)疾病控制中心梅毒治療指南》中對(duì)梅毒的治療隨訪及療效評(píng)價(jià)中指出，如在治療后6個(gè)月內(nèi)血清滴度未有4倍下降，應(yīng)視為治療失敗或再感染。結(jié)合我們的研究，梅毒患者產(chǎn)生自身抗體的幾率顯著升高，因此，在對(duì)ANA陽(yáng)性梅毒患者的治療中，能否將ANA的檢測(cè)作為一項(xiàng)指導(dǎo)療效的參考指標(biāo)值得深思，當(dāng)然其在預(yù)防晚期梅毒并發(fā)癥中的積極作用還有待進(jìn)一步研究。

總之，Tp感染宿主后的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床表現(xiàn)多變，治療效果及評(píng)價(jià)不確切，因此，對(duì)梅毒進(jìn)行更加全面深入的研究，進(jìn)一步明確該病的發(fā)病機(jī)制、制定預(yù)防措施和治療方案，為公共健康提供有力的保障，任重道遠(yuǎn)。

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