陳蘇娟 陳蘇蓉
江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院腫瘤治療中心,腫瘤內(nèi)科三病區(qū),江蘇 鹽城 224000
VEGF-A在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義
陳蘇娟 陳蘇蓉
江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院腫瘤治療中心,腫瘤內(nèi)科三病區(qū),江蘇 鹽城 224000
非小細(xì)胞肺癌; 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A; 免疫組化
肺癌是目前最常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)病率和死亡率逐年上升。全世界每年新發(fā)病例約120萬(wàn),80%為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)[1]。雖然隨著腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和臨床診斷方法的進(jìn)步,可予以積極手術(shù)、化療和放療,但NSCLC的復(fù)發(fā)率及病死率仍然很高。本研究運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)NSCLC組織中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(VEGF-A),探討其在NSCLC的發(fā)生、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用,以期指導(dǎo)臨床治療。
60例標(biāo)本均來(lái)自江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院(2004—2008年)NSCLC手術(shù)切除患者,其中男性45例,女性15例;年齡36~73歲,平均60歲。術(shù)后病理均證實(shí)為NSCLC,其中34例為肺腺癌,26例肺鱗癌。根據(jù)組織學(xué)腫瘤分級(jí),高分化9例,中分化25例,低分化26例;根據(jù)臨床病理分期(TNM),Ⅰ期為19例,Ⅱ期18例,Ⅲ期17例,Ⅳ期6例;根據(jù)淋巴轉(zhuǎn)移情況,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例。另各取15例性別和年齡構(gòu)成與上述60例無(wú)顯著差異的良性病變組織手術(shù)標(biāo)本作對(duì)照組。
鼠抗人VEGF-A多克隆抗體、S-P試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司,抗原修復(fù)液為檸檬酸鈉緩沖液(pH=6.0),由邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供配方自行配制。
VEGF-A表達(dá)的檢測(cè)均采用免疫組化SP法對(duì)石蠟切片行染色。陽(yáng)性對(duì)照為福州邁新公司提供的陽(yáng)性標(biāo)本染色片,陰性對(duì)照用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗。試驗(yàn)組和對(duì)照組分別是NSCLC和正常組織,試驗(yàn)組按腫瘤的分化級(jí)別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡、性別和臨床分期等項(xiàng)目分別進(jìn)行研究。
所有切片均采取雙盲法由兩位病理醫(yī)師觀察診斷。VEGF-A表達(dá)結(jié)果判斷:兩位醫(yī)師均認(rèn)為細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕褐色為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。低倍鏡(×10)下各選取5個(gè)有代表性區(qū)域,在高倍鏡(×40)下利用目鏡網(wǎng)格測(cè)微尺分成10個(gè)視野計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例,取陽(yáng)性細(xì)胞平均百分率(labeling index,LI)。LI=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/1 000×100%。LI≤9%為陰性,>9%~25%為(+),>25%~50%為(++),≥50%為(+++)。采用雙盲半定量計(jì)算法計(jì)算LI。
采用Stata7.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析處理,分級(jí)資料用行×列表記錄,計(jì)數(shù)資料運(yùn)用χ2檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
VEGF-A陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞主要表達(dá)產(chǎn)物呈黃色、棕褐色陽(yáng)性顆粒彌漫分布在胞質(zhì)中,60例患者中VEGF-A陽(yáng)性表達(dá)共49例,陽(yáng)性率為81.7%,其中(+)16例(26.7%),(++)16例(26.7%),(+++)6例(10%)。
NSCLC組織中VEGF-A的表達(dá)與年齡、性別、組織類型無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05);但在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.001)。VEGF-A在NSCLC的臨床TMN分期中,陽(yáng)性表達(dá)率分別為Ⅰ期68.4%,Ⅱ期77.7%,Ⅲ期94.1%,Ⅳ期100%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.138),但在Ⅲ、Ⅳ期中的陽(yáng)性表達(dá)率較Ⅰ、Ⅱ期高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在分化差的腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)率高于分化好的腫瘤(P<0.01,表1)。
表 1 NSCLC患者中VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征間的關(guān)系Tab. 1 The correlation between the positive expression of VEGF-A and the clinicopathological features in NSCLC
腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌患者死亡最主要的原因,肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移常見(jiàn)有兩條途徑,一條是經(jīng)血管轉(zhuǎn)移,另一條是經(jīng)淋巴管轉(zhuǎn)移。腫瘤經(jīng)何種途徑轉(zhuǎn)移除與腫瘤的組織學(xué)起源、生長(zhǎng)部位、惡性程度及大小關(guān)系密切外,新近的研究顯示還與腫瘤內(nèi)部血管或淋巴管生成有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道,VEGF-A表達(dá)水平與腫瘤血管轉(zhuǎn)移之間關(guān)系密切[1]。1971年,F(xiàn)olkman等[2]就提出腫瘤生長(zhǎng)依賴血管生成的概念,即腫瘤細(xì)胞通過(guò)血管供應(yīng)方式獲得營(yíng)養(yǎng),同時(shí)血管也為腫瘤轉(zhuǎn)移提供通道。因此,抑制腫瘤血管生成,可以抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[3]。當(dāng)腫瘤直徑超過(guò)2 mm時(shí),直接由微血管提供營(yíng)養(yǎng)已不能滿足其生長(zhǎng)需求,此時(shí)腫瘤生長(zhǎng)依靠新生血管運(yùn)送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。新生血管不僅提供原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)所需血供,還能提供腫瘤血行轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移所需通路。許多研究結(jié)果證實(shí)VEGF-A在腫瘤生長(zhǎng)中起重要作用[4]。
VEGF-A是一種相對(duì)分子質(zhì)量為34~45×103的同源二聚體,通過(guò)兩對(duì)煉間二硫鍵或共價(jià)鍵連接,與受體結(jié)合后促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖,增加微血管的通透性,對(duì)腫瘤血管生成起重要作用。本研究發(fā)現(xiàn):VEGF-A在NSCLC的臨床TMN分期中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為Ⅰ期68.4%,Ⅱ期77.7%,Ⅲ期94.1%,Ⅳ期100%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.138)。提示不同分期NSCLC中血管生成因子表達(dá)無(wú)差異性,可解釋臨床上一部分病理早期NSCLC患者的早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。另外,VEGF-A在NSCLC陽(yáng)性表達(dá),總體上臨床Ⅲ、Ⅳ期患者顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.05),與臨床上中晚期患者易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相符。
VEGF-A是最強(qiáng)、最特異的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂劑。它不但是內(nèi)皮細(xì)胞存活的因素之一,而且是將循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞運(yùn)達(dá)新生血管的關(guān)鍵因素[5]。VEGF不僅能促進(jìn)原發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)和血管生成,還在新轉(zhuǎn)移灶早期形成過(guò)程中起重要作用[6]。Koukourakis等[7]報(bào)道晚期NSCLC局部VEGF及其受體升高提示預(yù)后不良。江豐收等[8]報(bào)道VEGF在NSCLC的發(fā)生、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起著極其重要的作用,有可能成為一種新的腫瘤標(biāo)記物。王曉彬等[9]報(bào)道VEGF檢測(cè)有助于預(yù)測(cè)早期NSCLC患者預(yù)后,為術(shù)后輔助治療提供了參考依據(jù)。本研究結(jié)果提示VEGF-A通路與癌癥發(fā)生發(fā)展及血行轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)相關(guān)。
肺癌發(fā)病率及死亡率逐年提高,尤其是NSCLC對(duì)化療的療效尚不能令人滿意。以腫瘤血管為靶點(diǎn)抑制血管形成進(jìn)而控制腫瘤生長(zhǎng),對(duì)腫瘤的治療及防止其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有重要意義。ECOG-E4599研究采用重組人抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子單克隆抗體(Avastin)針對(duì)VEGF靶點(diǎn)的單克隆抗體與化療聯(lián)合的隨機(jī)臨床試驗(yàn),該研究自2004年7月開始,共878例晚期NSCLC患者入選臨床試驗(yàn)[10]。結(jié)果顯示化療加Avastin組(434例)與標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合化療組(444例),中位生存期(TTP)分別為12.5個(gè)月和10.2個(gè)月,臨床緩解率分別為6.4個(gè)月和4.5個(gè)月,1年和2年生存率Avastin組為51.9%和22.1%,標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合化療組為43.7%和16.9%。2007年ASCO年會(huì)上,Magengade等[11]報(bào)告了由120個(gè)中心參加的、1 050例大樣本Ⅲ期隨機(jī)雙盲對(duì)照臨床研究的結(jié)果。對(duì)照組GP方案化療347例患者有效率為20%,TTP時(shí)間4.7個(gè)月,試驗(yàn)組Avastin7.5 mg/kg+GP方案,有效率為34%,TTP時(shí)間6.1個(gè)月;試驗(yàn)組Avastin15 mg/kg+GP方案,有效率30%,TTP時(shí)間為6.1個(gè)月。這些研究證明Avastin聯(lián)合化療在緩解率及TTP等方面均優(yōu)于單純化療,顯示了其在肺癌治療中的重要地位。
國(guó)內(nèi)自行研制的腫瘤血管生成抑制劑如恩度、參一膠囊等聯(lián)合化療進(jìn)行臨床試驗(yàn)都取得了令人滿意的結(jié)果。如王金萬(wàn)、孫燕等[12]負(fù)責(zé)的化療聯(lián)合恩度Ⅲ期臨床研究(NVB+DDP與NVB+DDP+恩度),共有493例NSCLC患者入組,結(jié)果治療組緩解率為35.4%,對(duì)照組為19.5%(P<0.001);治療組TTP為6.3個(gè)月,對(duì)照組為3.6個(gè)月;治療組1年生存率為62.7%,對(duì)照組為31.5%(P<0.001)。這些臨床試驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明了NSCLC轉(zhuǎn)移及預(yù)后與血管生成相關(guān)。
總之,VEGF-A在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。本研究通過(guò)檢測(cè)其在NSCLC組織中的表達(dá),與腫瘤病理學(xué)特征的相關(guān)性,提示其可作為腫瘤生物學(xué)行為的評(píng)估及預(yù)后的指標(biāo),并為多靶點(diǎn)靶向治療NSCLC提供了依據(jù)。
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10.3969/j.issn.1007-3969.2011.02.015
R734.2
A
1007-3639(2011)02-0153-03
陳蘇娟 E-mail:chensujuan77@163.com
2010-09-17
2010-11-23)