古穎春 ，宋業(yè)琳 ，張春玲 ，古保亮

(1青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東青島 266003;2青島市胸科醫(yī)院;3青島海慈醫(yī)療集團;4青島市中心醫(yī)院)

惡性腫瘤的異常增殖主要取決于促進細(xì)胞生長原癌基因的激活以及控制細(xì)胞生長抑癌基因的失活，同時也與細(xì)胞凋亡過程受到抑制作用有重要關(guān)系。近年來，我們應(yīng)用免疫組化對 129例肺癌患者手術(shù)標(biāo)本行 bcl-2、p53及 nm23蛋白檢測，以期探討3種蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集青島醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室、青島市中心醫(yī)及青島市胸科醫(yī)院 2001～2005年確診的原發(fā)性肺癌手術(shù)切除標(biāo)本 129例，男 89例、女 40例，年齡 27～76(57±10.53)歲，術(shù)前均未行放療或化療。按 WHO(1981)分類標(biāo)準(zhǔn)分型，鱗癌 53例，腺癌 48例(腺泡細(xì)胞癌 28例，乳頭狀腺癌 12例，支氣管肺泡癌 5例，實體黏液癌 3例)，小細(xì)胞癌8例，大細(xì)胞癌 16例，腺鱗癌 4例。術(shù)后隨訪 5 a以上，其中術(shù)后 0.5 a內(nèi)死亡 23例，0.5～5 a內(nèi)死亡 60例，存活 5 a以上 44例，2例失訪。

1.2 方法 標(biāo)本均經(jīng) 10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。每個標(biāo)本切片 5張，行 HE染色和免疫組化染色。采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白過氧化酶連結(jié)法鼠抗人 bc1-2單克隆抗體、鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人 nm23單克隆抗體及鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化物酶免疫組織染色試劑盒(均購自北京中山生物技術(shù)有限公司)，檢測程序按照說明書操作，同時用已知陽性切片，在同等條件下染色，作為陽性對照，用 PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，bc1-2、p53和 nm23蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理關(guān)系采用 χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p53、bcl-2及 nm23在肺癌中的表達(dá) bcl-2主要見于癌細(xì)胞核膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，正常支氣管黏膜及肺泡上皮均為陰性，腫瘤間質(zhì)中，少量浸潤的淋巴細(xì)胞呈弱陽性表達(dá)。p53見于癌細(xì)胞核內(nèi)，正常肺組織及腫瘤間質(zhì)均為陰性。nm23主要位于細(xì)胞質(zhì)中。p53、bcl-2及 nm23在肺癌中的陽性表達(dá)率分別為51.9%、26.3%及 55.0%。

2.2 p53、bcl-2、nm23表達(dá)與肺癌臨床病理因素的關(guān)系 小細(xì)胞肺癌中的 bcl-2及 p53陽性表達(dá)率高于其他各組，但差異無顯著性(P＞0.05)。p53及nm23與組織分型無關(guān)。局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組bcl-2陽性表達(dá)率(39.2%)明顯高于淋巴結(jié)陰性組(18.7%)(P＜0.01)。 p53、nm23蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)。見表1。

表1 bcl-2、p 53、nm23蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

2.3 p53、bcl-2及 nm23表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 bcl-2、p53及 nm23均呈陰性表達(dá)病例與 bcl-2、p53及 nm23蛋白均呈陽性表達(dá)的病例預(yù)后有明顯差異(P＜0.01)，均陰性組預(yù)后明顯好于均陽性組。見表2。

表2 bcl-2、p53、nm23蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

3 討論

不同腫瘤有著不同的 p53突變譜，Cheah等[1]研究表明，p53基因突變譜的不同可能影響到肺癌的易感性及相應(yīng)腫瘤的形成。有研究表明，突變型p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率為 30%～65%[2]，在小細(xì)胞肺癌中的陽性表達(dá)率為 44%～80%[3]。本文非小細(xì)胞肺癌 p53的陽性表達(dá)率為51.3%、小細(xì)胞肺癌陽性表達(dá)率為 62.5%，與文獻報道相近。本文 p53陽性表達(dá)組術(shù)后生存時間短于陰性表達(dá)組，表明 p53蛋白異常表達(dá)與肺癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)，并可能成為評估肺癌預(yù)后的有效標(biāo)志物。

研究發(fā)現(xiàn)，bcl-2蛋白過度表達(dá)與肺癌的發(fā)生有關(guān)[3，4]。本文表明 bcl-2的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可能與 bcl-2蛋白增加腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的能力有關(guān)，bcl-2在肺癌的陽性表達(dá)可作為評估預(yù)后的一項指標(biāo)。

nm23基因是由美國癌癥研究所 Steeg等[5]1988年用消減雜交法，在 7個潛能不同的黑色素瘤中分離出來的一種 cDNA基因。nm23基因與肺癌的轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，國內(nèi)外有不同的報道[6，7]。本研究結(jié)果顯示，肺癌組織中 nm23陽性表達(dá)與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性，陽性表達(dá)者預(yù)后有好于陰性表達(dá)者的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異性，可能與樣本量有關(guān)。目前尚不能就此判斷 nm23蛋白表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性，nm23基因?qū)Ψ伟┺D(zhuǎn)移及預(yù)后的價值有必要進一步探討。

目前肺癌的預(yù)后較差，原因之一是肺癌的生物學(xué)行為并不遵循一定的模式，而在治療前人們又不能準(zhǔn)確地預(yù)測腫瘤對治療的敏感性。因此根據(jù)肺癌基因蛋白的表達(dá)水平探索更有臨床應(yīng)用價值的生物學(xué)指標(biāo)、利用腫瘤分子生物學(xué)特征協(xié)助判斷肺癌的轉(zhuǎn)移與預(yù)后有重要意義。

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[4]古保亮，鄒偉，楊梅懷，等.bcl-2、p53蛋白在肺癌中的表達(dá)[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，1998，12(6):547-549.

[5]Steeg PS，Bevilaxqua G，Lopper L，et al.Evidence of anovel geneassociated with low tumorm etastasic potential[J].Journal of the National Cancer in Statute，1988，80(2):200.

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