劉金霞，周 平，胡志民，趙 曉，時(shí)鳳敏，林艷華，毛高平

(1河北北方學(xué)院，河北張家口 075000;2中國人民解放軍空軍總醫(yī)院;3鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院)

Brg1基因是 SWI/SNF基因家族的重要組成成分，是近幾年新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因。本研究通過免疫組化方法檢測(cè) Brg1蛋白在小腸癌組織、Peutz-Jeghers綜合征(PJS)息肉組織、正常小腸黏膜組織中的表達(dá)情況，探討 Brg1基因在 PJS發(fā)生、發(fā)展以及癌變中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇空軍總醫(yī)院病理科 2004年 4月 ～2010年 9月歸檔的蠟塊標(biāo)本，其中 PJS息肉組織 72例，遠(yuǎn)離瘤體的小腸黏膜以及正常小腸黏膜組織 12例，小腸癌組織 30例。病理切片均經(jīng) 2位以上病理醫(yī)師確診。

1.2 方法 選取石蠟組織塊，脫蠟至水化后采用抗原修復(fù)處理的鏈霉素抗生物素蛋白 S-P法染色，DAB顯色。Brg1蛋白免疫組化檢測(cè)技術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟按說明書進(jìn)行。S-P試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，Brg1抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，用已知陽性片作為陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):Brg1染色陽性細(xì)胞為細(xì)胞核呈棕黃色至深褐色，部分細(xì)胞質(zhì)同時(shí)為淡黃色和(或)黃色。其中陽性細(xì)胞 ＜25%為(-);25%～50%為陽性(+)，51%～75%為中等陽性(++)，＞75%為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差別采用四格表χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Brg1蛋白在 PJS息肉組織及正常小腸黏膜組織中均表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕黃色至深褐色，多數(shù)部分細(xì)胞質(zhì)同時(shí)為黃色。Brg1蛋白在小腸癌組織中為中等陽性或強(qiáng)陽性表達(dá)，在 PJS息肉組織中為中等陽性或弱陽性表達(dá)，在正常小腸黏膜組織中為弱陽性表達(dá)或不表達(dá)。Brg1蛋白的陽性表達(dá)在癌組織與PJS息肉組織之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.870，P＜0.05)，兩者列聯(lián)系數(shù) C=0.206;PJS息肉組織與正常小腸黏膜組織比較差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.497，P＜0.05)。見表1。

表1 Brg1蛋白在 PJS息肉組織、小腸癌組織及正常小腸黏膜組織中的表達(dá)(例)

3 討論

PJS是一種常染色體顯性遺傳性疾病，以多發(fā)性胃腸道錯(cuò)構(gòu)瘤性息肉和皮膚黏膜的黑色素沉著為特征，因此又稱黑斑息肉綜合征和色素沉著綜合征，可發(fā)生在消化道的任何部位，是胃腸道和胃腸道外腫瘤并出現(xiàn)多種惡性腫瘤的高危因素[1]。目前對(duì)PJS的發(fā)病機(jī)制還不是很明確，一般認(rèn)為 PJS是一種常染色體單基因顯性遺傳性疾病，在 PJS家系患者中 STK11的突變率為 70%，散發(fā)病例中的突變率為 30%～67%。這就意味著在家族性和散發(fā)性 PJS中除 STK11突變外還有其他致病基因的存在。有報(bào)道 STK11/LKB1與 Brgl蛋白相關(guān)，Brgl蛋白是SWI1-SNF2復(fù)合蛋白的成員，具有 ATP依賴的解旋酶活性，在 SWI1-SNF2核染色質(zhì)改造功能中發(fā)揮重要作用，同時(shí)是許多基因復(fù)制所必需的蛋白[2]。而LKB1的 N末端區(qū)域(1-146堿基)是與 Brgl解旋酶結(jié)合區(qū)域，雖然 Brgl未被 LKB1磷酸活化，但在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)它的 ATP酶活性通過與 LKB1結(jié)合而增加，同時(shí)其阻滯細(xì)胞周期的作用也需要 LKB1的參與[3]。另外，在 p53依賴的凋亡 HT1080細(xì)胞中LKB1有過表達(dá)跡象，并且在纖維肉瘤細(xì)胞 HT1080裂解物中也發(fā)現(xiàn) STK11/lKB1基因與 p53相耦聯(lián)，暗示兩者相關(guān)聯(lián)或者存在相關(guān)聯(lián)的蛋白。由此推測(cè)Brg1有可能是 PJS息肉發(fā)生發(fā)展的原因之一。

Murphy等研究發(fā)現(xiàn)，Brg1可以 E2F非依賴方式抑制 c-fos的轉(zhuǎn)錄[4，5]，表明它是一種重要的抑癌基因。另有研究發(fā)現(xiàn)，SWI/SNF家族與許多基因激活有關(guān)，也與轉(zhuǎn)錄抑制有關(guān)，它主要通過轉(zhuǎn)錄活化和抑制功能來控制腫瘤的生長(zhǎng)[6]。不同的研究發(fā)現(xiàn)，Brg1基因在前列腺癌、宮頸癌及胃癌組織中高表達(dá)，而在肺癌組織及多種腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)或缺失[7～10]。

本研究結(jié)果表明，Brg1蛋白在小腸癌組織和PJS息肉組織中高表達(dá)，二者陽性表達(dá)率明顯高于正常小腸黏膜組織，且 Brg1蛋白在小腸癌組織中的陽性率高于PJS息肉組織。Brg1蛋白在小腸癌中的表達(dá)以強(qiáng)陽性或中等陽性為主，在 PJS息肉組織中的表達(dá)以中等陽性或弱陽性為主，而在正常小腸黏膜組織中以弱陽性表達(dá)或不表達(dá)為主。由此可推測(cè)Brg1很可能是PJS息肉發(fā)生發(fā)展和息肉癌變的一個(gè)關(guān)鍵性因素之一。Brg1基因作為一種抑癌基因，在PJS息肉組織和小腸癌組織中卻表現(xiàn)為癌基因的活性，究其原因，可能是 Brg1基因在 PJS息肉組織和小腸癌組織中發(fā)生了功能丟失或轉(zhuǎn)錄激活作用，從而失去了原本的抑癌作用，進(jìn)而在 PJS息肉發(fā)生發(fā)展及息肉癌變過程中起著一定的作用。

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