王潔，楊長(zhǎng)青，金貞姬，郭建鵬（.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，延吉市 33000；.中國(guó)藥科大學(xué)藥理學(xué)研究室，南京市 0009；3.延邊大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，延吉市 33000）

長(zhǎng)白山高山紅景天Rhodiola saccharinensis A.Bor.（簡(jiǎn)稱高山紅景天）為景天科屬植物，系多年生草本或亞灌木植物，主要成分為紅景天苷（Salidroside）、苷元酪醇（Tryosol）、多酚類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)、18種氨基酸、系種微量元素和豐富的維生素A、D、E等，具有提高機(jī)體免疫力、增強(qiáng)體質(zhì)、改善人體造血機(jī)能、抗缺氧、抗衰老、抗腫瘤、抗疲勞、抗病毒、抗放射、預(yù)防高原反應(yīng)、降血糖和清除自由基等多種功能[1，2]，是一種很有前途的環(huán)境適應(yīng)藥物。

文獻(xiàn)[3，4]報(bào)道，高山紅景天提取物對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)糖尿病大鼠具有良好降血糖作用，其機(jī)制是高山紅景天提取物的抗氧化作用。另外，臨床研究結(jié)果顯示，紅景天制劑對(duì)治療糖尿病及其并發(fā)癥具有一定的療效[5，6]。最近，Lee MW等[2]的體外研究表明，高山紅景天多酚類成分具有顯著的清除自由基能力，但是高山紅景天總多酚對(duì)糖尿病的體內(nèi)研究尚未見報(bào)道。本文著重探討了高山紅景天總多酚對(duì)高脂食物-STZ誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠高血糖的治療作用，以為2型糖尿病臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

SPD-10AVP型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；HM-150Ⅳ型離心機(jī)（韓國(guó)Hanil Science Industrial公司）；FA2004型分析天平（上海精密科學(xué)儀器廠）；超聲細(xì)胞粉碎儀（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）；恒溫水浴鍋（上海衡平儀器儀表廠）。

1.2 試藥

高山紅景天根莖（人工栽培，由延邊長(zhǎng)白山紅景天種植有限公司提供，經(jīng)延邊大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科金貞姬主任藥師鑒定為真品）；二甲雙胍片（貴州制藥廠，批號(hào)：100327）；丙二醛（MDA）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：S0131）、總超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：S0102）均由碧云天生物技術(shù)研究所提供；STZ（廣州市齊云生物技術(shù)公司，批號(hào)：090405）。

1.3 動(dòng)物

Wistar大鼠46只，♂，體重（250±25）g，由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（吉）2003-0005）。

2 方法

2.1 高山紅景天總多酚的制備

2.1.1 高山紅景天藥材的脫脂 取干燥的高山紅景天根莖345 g，粉碎，過40目篩，加入石油醚，于60℃回流提取30 min，重復(fù)2次。將已脫脂的高山紅景天藥材置于空氣中，揮干石油醚，置于干燥器貯藏，備用（335 g）。

2.1.2 高山紅景天總多酚的提取 已脫脂的高山紅景天藥材中加入30%的乙醇，其料液比為1∶15，于80℃水浴鍋里回流提取75 min，過濾，殘?jiān)谙嗤臈l件下回流提取75 min。合并2次濾液，回收提取液，濃縮液蒸干至膏狀，得浸膏98.6 g（提取率為28.57%）。

2.1.3 高山紅景天總多酚含量的測(cè)定 采用酒石酸亞鐵分光光度法，以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定高山紅景天提取物中的總多酚含量。

2.2 高山紅景天總多酚對(duì)高脂食物-STZ誘導(dǎo)大鼠糖尿病模型的影響

2.2.1 高脂食物-STZ誘導(dǎo)大鼠2型糖尿病模型的復(fù)制 （1）高糖高脂飼料的組成：基礎(chǔ)料66.6%、蔗糖20%、豬油10%、膽固醇2.5%、膽酸鈉1%。（2）STZ溶液的配制：稱取0.42 g檸檬酸，加入20 mL注射用水，溶解，用50%的NaOH調(diào)pH值至4.4，配成0.1 mol·L-1的檸檬酸緩沖溶液（pH 4.4）。精密稱取STZ 0.55 g溶于已配好的檸檬酸緩沖溶液20 mL中，制備成11 mg·mL-1的濃度。（3）模型的復(fù)制：取46只大鼠，隨機(jī)留取6只作為正常對(duì)照，其余40只大鼠用高糖高脂飼料喂養(yǎng)22 d后，禁食不禁水18 h，測(cè)定血糖，然后按55 mg·kg-1（5 mL·kg-1）一次性ip STZ溶液。注射后48 h用血糖測(cè)試儀定量測(cè)試血糖。30只成膜，成膜率75%。

2.2.2 高山紅景天總多酚對(duì)高脂食物-STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠血糖值的影響 30只糖尿病模型大鼠隨機(jī)分為模型（等容生理鹽水）、二甲雙胍（0.3 g·kg-1）和高山紅景天總多酚高、中、低劑量（100、50、25 mg·kg-1）組，另設(shè)正常對(duì)照組（生理鹽水），ig給藥，每天1次，連續(xù)21 d，末次給藥12 h后，禁食不禁水18 h尾靜脈取血，測(cè)血糖值，評(píng)價(jià)高山紅景天多酚的降糖作用。

2.2.3 高山紅景天總多酚對(duì)高脂食物-STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠胰腺線粒體MDA含量和SOD活性的影響 將“2.2.2”項(xiàng)下大鼠末次給藥后18 h剖腹分離出胰腺，沖洗，拭干，分離去脂，分別稱重。用冷生理鹽水制成10%組織勻漿，2000 r·min-1離心10 min，取上清液，再以10000 r·min-1低溫高速離心15 min，沉淀用冰冷生理鹽水制成線粒體混懸液，用超聲細(xì)胞粉碎儀將線粒體破碎，按試劑盒說明進(jìn)行MDA含量和SOD活性的測(cè)定。蛋白定量采用考馬斯亮藍(lán)法。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 高山紅景天總多酚的含量

所制備的高山紅景天提取物中總多酚含量為34.95%。

3.2 高山紅景天總多酚對(duì)2型糖尿病模型大鼠相關(guān)指標(biāo)的影響

3.2.1 高山紅景天總多酚對(duì)2型糖尿病模型大鼠體重變化的影響 高脂食物喂養(yǎng)22 d的大鼠體重與正常大鼠比較顯著增加（P＜0.01），然而用二甲雙胍與高、中劑量紅景天總多酚干預(yù)高脂食物-STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠21 d后，大鼠體重顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，紅景天總多酚對(duì)高脂食物-STZ誘導(dǎo)大鼠糖尿病具有良好的降低體重作用。高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠體重變化的影響見表1。

表1 高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠體重變化的影響（±s，n＝6）Tab 1 Effect of total polyphenol of R.sachalinensis on body weight of model rats（±s，n＝6）

表1 高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠體重變化的影響（±s，n＝6）Tab 1 Effect of total polyphenol of R.sachalinensis on body weight of model rats（±s，n＝6）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

組別正常對(duì)照組模型組二甲雙胍組高山紅景天總多酚低劑量組高山紅景天總多酚中劑量組高山紅景天總多酚高劑量組體重/g藥物干預(yù)第21天323.0±14.6368.8±10.7335.5±12.6#345.2±13.5334.3±18.0#336.7±10.1#0天246.5±13.7242.8±12.1243.2±13.1243.8±14.6240.5±10.6243.3±13.2高脂飲食第22天298.7±15.5335.8±17.3＊332.5±14.7＊337.5±15.2＊332.8±12.3＊335.0±13.9＊

3.2.2 高山紅景天總多酚對(duì)2型糖尿病模型大鼠血糖值的影響 模型組大鼠血糖值顯著高于正常對(duì)照組（P＜0.01）；與模型組比較，高山紅景天總多酚高、中、低劑量組的血糖值均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，高山紅景天總多酚具有良好的降糖作用。高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠血糖值變化的影響見表2。

3.2.3 高山紅景天總多酚對(duì)糖尿病模型大鼠胰腺線粒體MDA含量和SOD活性的影響 與正常對(duì)照組比較，模型組胰腺線粒體中MDA含量顯著升高（P＜0.01），SOD活性顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，高山紅景天總多酚高、中劑量組MDA 含量顯著降低（P＜0.01），SOD 活性顯著升高（P＜0.01）。結(jié)果表明，糖尿病大鼠胰腺細(xì)胞線粒體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，抗自由基損傷的作用減弱，導(dǎo)致胰腺受損；高山紅景天總多酚治療可在一定程度上可減輕糖尿病過程中脂質(zhì)過氧化和自由基損傷，對(duì)胰腺起到保護(hù)作用，阻止糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展[7]。高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠線粒體中MDA含量、SOD活性的影響見表3。

表2 高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠血糖值變化的影響（±s，n＝6）Tab 2 Effect of total polyphenol of R.sachalinensis on BG level of model rats（±s，n＝6）

表2 高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠血糖值變化的影響（±s，n＝6）Tab 2 Effect of total polyphenol of R.sachalinensis on BG level of model rats（±s，n＝6）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

組別正常對(duì)照組模型組二甲雙胍組高山紅景天總多酚低劑量組高山紅景天總多酚中劑量組高山紅景天總多酚高劑量組血糖值/mmol·L-1干預(yù)后4.49±0.1821.06±1.01＊5.88±0.10#13.02±0.10#6.04±0.06#14.35±0.44#復(fù)制模型前4.67±0.314.80±0.314.88±0.575.18±0.874.97±0.284.83±0.48復(fù)制模型后-20.78±2.9419.87±2.3019.87±2.0821.67±2.6821.53±3.92

表3 高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠線粒體中MDA含量、SOD活性的影響（±s，n＝6）Tab 3 Effect of total polyphenol of R.sachalinensis on the content of MDA and activity of SOD in pancreas cell mitochondria of model rats（±s，n＝6）

表3 高山紅景天總多酚對(duì)模型大鼠線粒體中MDA含量、SOD活性的影響（±s，n＝6）Tab 3 Effect of total polyphenol of R.sachalinensis on the content of MDA and activity of SOD in pancreas cell mitochondria of model rats（±s，n＝6）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

組別正常對(duì)照組模型組二甲雙胍組高山紅景天總多酚低劑量組高山紅景天總多酚中劑量組高山紅景天總多酚高劑量組SOD/U·mg-1 0.27±0.020.15±0.02＊0.20±0.01#0.17±0.020.19±0.01#0.18±0.02#MDA/nmol·mg-1 0.41±0.021.43±0.03＊0.49±0.02#1.21±0.010.71±0.03#1.09±0.03#

4 討論

糖尿病的慢性高血糖和急性高血糖均能促進(jìn)組織中氧化應(yīng)激的產(chǎn)生，氧化應(yīng)激是導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥的最根本的原因[7]。在2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制中氧自由基不但影響糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，同樣參與胰島素抵抗[8]。高山紅景天總多酚是從高山紅景天干燥根中提取的，越來越多的證據(jù)表明，紅景天多酚是一種較好的天然抗氧化物質(zhì)，有較好開發(fā)和應(yīng)用前景[9]。

本研究表明，高山紅景天總多酚對(duì)高脂食物-STZ誘導(dǎo)大鼠2型糖尿病具有良好的治療作用，其機(jī)制很可能是高山紅景天多酚類成分的抗氧化作用[2]。此結(jié)果將為高山紅景天降糖藥物的研發(fā)提供可靠的藥效學(xué)依據(jù)。

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