劉煒，曾蔚欣，劉禮斌，唐宛晨，孫路路（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院，北京市 100038）

復(fù)方苯海拉明滴鼻液為北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬護(hù)國(guó)寺中醫(yī)醫(yī)院的傳統(tǒng)制劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)主要成分的含量測(cè)定方法。為更好地控制該制劑質(zhì)量，本研究采用反相離子對(duì)高效液相色譜（HPLC）法，同時(shí)測(cè)定復(fù)方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果表明，該方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于測(cè)定復(fù)方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 HPLC儀、紫外-可見分光光度儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸苯海拉明對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110728-200806，含量:99.9%）；鹽酸苯海拉明原料藥（遼源市百康藥業(yè)有限公司，批號(hào):100401，含量:99.5%）；鹽酸麻黃堿原料藥及對(duì)照品（赤峰艾克制藥科技股份有限公司，批號(hào):081027，含量:99.2%）；硫酸卡那霉素注射液（天津藥業(yè)焦作有限公司，批號(hào):10030521，規(guī)格:0.5 g∶2mL）；羥苯乙酯（臺(tái)山新寧制藥有限公司，批號(hào):20100304）；氯化鈉原料藥（江蘇省勤奮藥業(yè)有限公司，批號(hào):20091207）；復(fù)方苯海拉明滴鼻液（北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬護(hù)國(guó)寺中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào):20110314、20110517、20110520，含量:鹽酸苯海拉明0.125%、鹽酸麻黃堿1%、硫酸卡那霉素0.5%）；水為純化水，乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（150mm×4.6mm，0.5 μm）；流動(dòng)相:0.02 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液（用85%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2.85）-甲醇-三乙胺＝52∶48∶0.5，流速:1.0mL·min－1；紫外檢測(cè)波長(zhǎng):256 nm；柱溫:30 ℃；進(jìn)樣量:20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸苯海拉明對(duì)照品貯備液。精密稱定鹽酸苯海拉明對(duì)照品約24.9mg置于100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液。精密稱定鹽酸麻黃堿約200mg置于100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 鹽酸苯海拉明與鹽酸麻黃堿混合貯備液。分別精密稱定鹽酸苯海拉明對(duì)照品約25mg、鹽酸麻黃堿約200mg，置于同一100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 空白樣品溶液。按處方制備不含鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的空白樣品溶液100mL，備測(cè)。

2.2.5 供試品溶液。按處方制備樣品100mL。精密吸取樣品溶液2.0mL，置于25mL容量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性考察

分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下制備的所有溶液，進(jìn)樣分析，比較保留時(shí)間（tR），確定色譜峰的專屬性，結(jié)果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.鹽酸麻黃堿對(duì)照品；B.鹽酸苯海拉明對(duì)照品；C.鹽酸苯海拉明+鹽酸麻黃堿；D.空白樣品；E.供試品；1.鹽酸麻黃堿；2.鹽酸苯海拉明；3.雜質(zhì)（羥苯乙酯）Fig 1 HPLC chromatogramsA.ephedrine hydrochloride control；B.diphenhydramine hydrochloride control；C.ephedrine hydrochloride+diphenhydramine hydrochloride；D.blank sample；E.test sample；1.ephedrine hydrochloride；2.diphenhydramine hydrochloride；3.impurity（ethylparaben）

圖1結(jié)果表明，鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿及其他成分之間分離良好，空白樣品溶液在各對(duì)照品溶液相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，說(shuō)明鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿的檢測(cè)不受干擾。按鹽酸麻黃堿色譜峰計(jì)，理論板數(shù)均值5355，RSD為1.8%（n＝6）；按鹽酸苯海拉明色譜峰計(jì)，理論板數(shù)均值10646，RSD＝1.4%（n＝6）。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取“2.2.3”項(xiàng)下鹽酸苯海拉明與鹽酸麻黃堿混合貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于5mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，得一系列濃度溶液。過(guò)濾后，分別取20μL進(jìn)樣、測(cè)定。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合回歸方程，得鹽酸苯海拉明回歸方程y＝96.591x+8.1007（r＝0.9998，n＝6）；鹽酸麻黃堿回歸方程y＝954.667x+234.12（r＝0.9994，n＝6）。結(jié)果表明，鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量線性范圍分別為0.5002～5.0020、4.0058～40.0580μg。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取“2.2.3”項(xiàng)下鹽酸苯海拉明與鹽酸麻黃堿混合貯備液1.0mL，置于5mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，過(guò)濾。取濾液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定。結(jié)果，鹽酸苯海拉明含量的RSD＝1.3%，鹽酸麻黃堿含量的RSD＝1.1%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

分別精密稱定鹽酸苯海拉明對(duì)照品約25mg、鹽酸麻黃堿對(duì)照品約200mg，置于同一100mL容量瓶中，加水適量，完全溶解后，加水至刻度，搖勻。精密吸取2.0mL至5mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，作為回收率試驗(yàn)待測(cè)溶液。同法制備9份，濾過(guò)后，分別取20μL進(jìn)樣，測(cè)定，外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，每份樣品測(cè)3次，回收率試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.7 樣品含量測(cè)定

精密吸取樣品2.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取對(duì)照品混合溶液（每1mL含鹽酸苯海拉明0.1mg、含鹽酸麻黃堿0.8mg），分別經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后，各精密量取20μL注入色譜儀，記錄色譜。按外標(biāo)法，分別以鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿色譜峰面積計(jì)算含量。3批樣品（批號(hào):20110314、20110517、20110520）含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

反相離子對(duì)色譜系統(tǒng)中流動(dòng)相的pH值對(duì)峰的保留時(shí)間有明顯影響[1]。有文獻(xiàn)[2]報(bào)道，當(dāng)調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值為4.0時(shí)，鹽酸麻黃堿出峰時(shí)間為4min，鹽酸苯海拉明出峰時(shí)間為9min左右。但筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)pH≥3時(shí)，鹽酸苯海拉明出峰時(shí)間延長(zhǎng)至11min；當(dāng)pH低于2.8時(shí)，出峰時(shí)間雖然縮短，但峰形不好，拖尾嚴(yán)重。在參考文獻(xiàn)[3，4]基礎(chǔ)上曾選用0.02 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液-甲醇-三乙胺體系（52∶48∶0.5，用磷酸調(diào)pH至5.0）為流動(dòng)相，結(jié)果鹽酸麻黃堿在2.67min左右出峰，鹽酸苯海拉明出峰時(shí)間約為17.741min，雖然其他成分對(duì)測(cè)定不干擾，但鹽酸苯海拉明出峰時(shí)間太晚。故最終選擇0.02 mol·L－1十二烷基硫酸鈉水溶液（用85%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2.85）-甲醇-三乙胺（52∶48∶0.5）為流動(dòng)相，結(jié)果表明該流動(dòng)相可行。

本品處方含有羥苯乙酯及其他輔料，均在256 nm波長(zhǎng)處有吸收，尤其羥苯乙酯吸收較強(qiáng)。在本文色譜條件下（見圖1D、E），羥苯乙酯色譜峰（tR為2.6min）與鹽酸麻黃堿基線分離（分離度R＝9.13），說(shuō)明羥苯乙酯及其他輔料完全不干擾鹽酸麻黃堿的測(cè)定。

鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明均有胺基側(cè)鏈，顯堿性，在水溶液中為陽(yáng)離子，而當(dāng)流動(dòng)相中加入十二烷基硫酸鈉（陰離子）后，可以與之形成離子對(duì)，從而達(dá)到改變保留時(shí)間、改善峰形、提高分離度的作用。但要嚴(yán)格控制其濃度，當(dāng)?shù)陀?.02 mol·L－1時(shí)峰形不好；濃度過(guò)高，又會(huì)損害色譜柱[4]。

原標(biāo)準(zhǔn)中并未對(duì)本品的主成分進(jìn)行含量控制，而用本法可以同時(shí)測(cè)定鹽酸麻黃堿、鹽酸苯海拉明的含量，且結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于復(fù)方苯海拉明滴鼻液的質(zhì)量控制。

[1]傅若農(nóng)主編.色譜分析概論[M].第1版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:176-178.

[2]程輝躍.HPLC法同時(shí)測(cè)定百喘朋中鹽酸麻黃堿和鹽酸苯海拉明的含量 [J].中國(guó)藥房，2001，12（10）:622.

[3]顏 挺.反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定中藥橡膠膏中鹽酸苯海拉明的含量[J].藥物分析雜志，2008，28（3）:437.

[4]張 濤.HPLC法測(cè)定復(fù)方苯海拉明麻黃堿糖漿麻黃堿、苯海拉明的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，6（21）:42.