單守勤趙權(quán)張立營孫英姿

·論 著·

阿爾茨海默病患者的腦脊液tau蛋白及Aβ1-42水平☆

單守勤*趙權(quán)△張立營*孫英姿*

目的 探討腦脊液（cerebrospinal fluid，CSF）中tau蛋白及β－淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）對診斷阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）的早期診斷價值，尋找AD理想的生物學(xué)標志。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測36例AD、24例血管性癡呆患者（vascular dementia，VD）和26名正常對照者（對照組）CSF中tau蛋白及Aβ1-42濃度的變化。結(jié)果 CSF中tau蛋白平均濃度：AD組（336±126）ng／L，VD組（183±96）ng／L，對照組（98±54）ng／L，AD組CSF中tau蛋白濃度明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；CSF中Aβ1-42平均濃度：AD組（341±113）ng／L，VD組（457±132）ng／L，對照組（502±167）ng／L，AD組CSF中Aβ1-42濃度明顯低于對照組，差異有顯著性意義（P＜0.05）。結(jié)論 腦脊液Aβ1-42、tau蛋白濃度的變化，不僅對診斷阿爾茨海默病具有較高的敏感性和特異性，而且亦可作為阿爾茨海默病與血管性癡呆鑒別診斷的生物學(xué)指標。

阿爾茨海默病 tau蛋白 β－淀粉樣蛋白1-42 酶聯(lián)免疫吸附實驗

影響阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）臨床診斷的因素較多，難度較大，尋找有意義的生物學(xué)標志對AD的臨床診斷、特別是早期診斷很有必要［1］。腦脊液（cerebrospinal fluid，CSF）中tau蛋白水平可能是大腦神經(jīng)元纖維纏結(jié)形成信息的間接反應(yīng)，可作為逐漸進展的神經(jīng)元和軸突變性的指標。由于CSF中β－淀粉樣蛋白（β-amyloid peptide，Aβ）水平可部分反映腦內(nèi)Aβ的產(chǎn)生和清除障礙，因此，我們對AD、VD患者及正常人CSF中tau蛋白和Aβ濃度進行了測定，探討其在AD早期臨床診斷中的應(yīng)用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

1.1.1 AD組 選擇401醫(yī)院2009年12月至2010年12月門診及住院治療的早期AD患者36例，男16例，女20例；年齡60～81歲，平均（72.4 ±6.6）歲。均符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第4版 （Diagnostic Statistical Manual 4 th edition，DSM-IV）中AD診斷標準，簡易精神狀態(tài)檢查量表（Mini-Mental State Examination，MMSE）評分 ＜24分；哈金斯基缺血指數(shù)（Hachinski Ischemic Scale，HIS）評分＜4分。根據(jù)患者臨床表現(xiàn)、神經(jīng)系統(tǒng)檢查、精神檢查、頭部CT和MRI檢查，以及其他相關(guān)實驗室檢查排除其他系統(tǒng)疾病和有毒物質(zhì)等所引起的癡呆。

1.1.2 VD組 病例來源于401醫(yī)院2009年12月至2010年12月門診或住院治療的早期血管性癡呆患者24例， 男14例，女10例；年齡70～83歲，平均（77.80±4.89）歲。均符合DSM-IV中血管性癡呆的診斷標準，病史、臨床表現(xiàn)、神經(jīng)系統(tǒng)檢查、精神檢查、頭部CT或MRI檢查均提示存在腦血管病和局灶性神經(jīng)系統(tǒng)體征。

1.1.3 正常對照組 26例受試者均為無癡呆表現(xiàn)、無中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的健康老年人，男13例，女13例；年齡70～75歲。MMSE評分大于按文化程度的分界值分，即文盲≥18分，小學(xué)≥21分，初中以上≥25分。 3組研究對象的性別、年齡的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），所有研究對象均對本研究知情及同意。

1.2 標本采集與處理 患者在入組后，分別行腰椎穿刺術(shù)抽取腦脊液2 mL，分裝置于－20℃條件下凍存待測。

1.3 檢測方法 采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（比利時InnogeneticsNV公司提供）測定CSF中tau蛋白濃度，使用酶標儀讀取吸光度A值。依照A值求出CSF中tau蛋白濃度的回歸曲線和回歸方程，根據(jù)曲線或方程求出各CSF標本的tau蛋白濃度和Aβ1-42濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 所有資料均使用SPSS 13.0處理，計算各組CSF中tau蛋白及Aβ1-42平均濃度并做方差分析。計量資料以均數(shù)±標準差±s表示，兩樣本均數(shù)的比較行t檢驗。

表1 AD組與VD組、對照組CSF中tau蛋白及Aβ1-42濃度的比較（ng／L，±s）

表1 AD組與VD組、對照組CSF中tau蛋白及Aβ1-42濃度的比較（ng／L，±s）

注：AD為阿爾茨海默?。籚D為血管性癡呆。單因素方差分析，與對照組比較，P＜0.05，其余比較均P＞0.05。

Aβ1-42濃度341±113 457±132 502±167組別AD組VD組對照組n 36 24 26 Tau蛋白濃度336±126 183±96 98±54

2 結(jié)果

AD組CSF中tau蛋白濃度與Aβ1-42濃度無相關(guān) （r＝－0.015，P＞0.05）。從表1可見，AD組CSF中tau蛋白濃度明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；AD組較VD組、VD組較對照組有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。AD組Aβ1-42濃度明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），而AD組與VD組與對照組Aβ1-42濃度的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

3 討論

近年來，對AD的研究焦點主要集中于與其典型病理變化老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)相關(guān)的腦脊液Aβ1-42和tau蛋白的定量研究。據(jù)文獻報道［2－3］，AD患者腦脊液Aβ1-42濃度顯著低于且tau蛋白濃度顯著高于正常老年人群，對腦脊液中這兩種生物學(xué)標志物的檢測可能有助于對臨床上高度懷疑為阿爾茨海默病患者的早期診斷。

老年斑是明確診斷阿爾茨海默病的病理特征和依據(jù)［4－5］。Aβ1-42主要存在于AD患者的腦組織中。Aβ1-42與AD的發(fā)病機制密切相關(guān)［6］。根據(jù)AD的病理改變，凡腦組織中β-淀粉樣蛋白沉積性疾病如血管性癡呆、Lewy小體癡呆、進行性核上性麻痹及額葉癡呆患者，腦脊液Aβ1-42濃度均呈不同程度降低。提示單純腦脊液Aβ1-42定量檢測的特異性較低，不能單獨作為AD診斷的標準，但它對臨床高度懷疑為AD的患者具有輔助診斷意義［5］。本結(jié)果顯示，AD組的CSF中Aβ1-42濃度明顯低于對照組，提示CSF中Aβ1-42濃度的降低是AD的生物學(xué)標志之一。而AD組與VD組CSF中Aβ1-42濃度無明顯差異的結(jié)果表明單純應(yīng)用CSF中Aβ1-42濃度來診斷AD缺少特異性，使其臨床應(yīng)用受到一定限制。

tau蛋白為一種大腦磷酸化蛋白質(zhì)，具有合成和穩(wěn)定神經(jīng)元的作用，它可連接軸突中的微管，從而促進微管裝配過程中的穩(wěn)定性［7－9］。通過ELISA法定量檢測阿爾茨海默病患者腦脊液中的tau蛋白濃度顯示，約85%的阿爾茨海默病患者腦脊液tau蛋白濃度顯著升高。本結(jié)果顯示，AD組CSF中總tau蛋白濃度明顯高于對照組，這提示CSF中tau蛋白濃度升高是AD的生物學(xué)標志之一，而AD組與VD組CSF中tau蛋白濃度差異無顯著性意義。單純測定CSF中tau蛋白濃度來診斷AD很難與其他原因所致的癡呆相鑒別。

本研究結(jié)果表明，腦脊液Aβ1-42、tau蛋白濃度的變化，不僅對診斷阿爾茨海默病具有較高的敏感性和特異性，而且亦可作為阿爾茨海默病與血管性癡呆鑒別診斷的生物學(xué)指標，但由于本研究的樣本量較小，所獲得的結(jié)果尚有待進一步的大樣本臨床研究予以證實，而且作為橫斷面研究，證據(jù)等級亦較低。在本研究中，我們未對其他類型癡呆（如帕金森病癡呆、亨廷頓病）進行觀察研究，亦未對輕度認知功能損害者腦脊液中的生物學(xué)標志物濃度進行研究。

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Cerebrospinal fluid biomarkers for early diagnosis of Alzheimer disease.

SHAN Shouqin， ZHAO Quan，ZHANG Liying， SUN Yingzi.Rehabilitation department the 2ndSanatorium of Ji'nan Military Command， Qingdao 266070.China.Tel：13678895842.

Objective To investigate the cerebrospinal fluid（CSF） levels of tau protein and β-amyloid peptide1－42（Aβ1－42）in the patients with Alzheimer disease（AD）and their diagnosetic value for AD.Methods The subjects were 36 patients with AD and 26 controls，includeing 24 patients with vascular dementia（VD）and 26 normal controls（NC）.The CSF levels of tau protein and Aβ1－42were measured with ELISA.Results The mean CSF levels of tau protein were（336±126）ng／L in AD patients，（183±96）ng／L in VD，and（98±54）ng／L in NC，respectively，and the difference between AD and NC was statistically significant（P＜0.05）.The mean CSF levels of Aβ1－42were（341±113）ng／L in AD，（457±132）ng／L in VD，and（502±167）ng／L in NC，and the differentce between AD and NC was statistically significant（P＜0.05）.Conclusions Cerebrospinal fluid Aβ1－42， tau protein and tau protein are useful biomarkers for the diagnosis of AD with high sensitivity and specificity，and can be used to differentiate AD and VD.

Alzheimer disease Tau protein Amyloid beta-protein Phosphorylation enzyme-linked immunosorbent assay

R749.1＋6

A

2011－02－14）

（責任編輯：李 立）

全軍保健專項課題項目（編號：10BJ215）

* 濟南軍區(qū)青島第二療養(yǎng)院 （青島 266071）

（E-mail：shanshouqing＠yahoo.cn）

△ 濟南軍區(qū)青島401醫(yī)院檢驗科