(江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇 江陰 214434)

二陳湯出自《太平惠民和劑局方》，由陳皮、半夏(制)、茯苓、甘草、生姜等中藥組方，具有除濕化痰、理氣和胃之功效，適用于咳嗽痰多、胸膈痞悶、惡心嘔吐等癥[1]。二陳湯配方顆粒是由上述藥味經(jīng)現(xiàn)代制劑技術(shù)制成的顆粒劑。為有效控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床用藥安全有效，筆者應(yīng)用薄層色譜(TLC)法建立了陳皮、甘草的鑒別方法，采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)陳皮中主要有效成分橙皮苷進(jìn)行了含量測(cè)定[2]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);AT－330型柱溫箱(天津奧特賽恩斯科學(xué)儀器有限公司);超聲清洗機(jī)(無錫超聲電子設(shè)備廠);十萬分之一電子天平(瑞士梅特勒公司)。橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)為0721－200010)、甘草酸銨對(duì)照品(批號(hào)為0731－200205)均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用;二陳湯配方顆粒(批號(hào)分別為200811，200901，200904，江陰天江藥業(yè)有限公司);硅膠G(青島海洋化工廠);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

陳皮[2]:取本品3 g，研成細(xì)粉，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。取不含陳皮的陰性樣品3 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)為展開劑，展開，展距約3 cm，取出，晾干;再以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展開，展距約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液則無此斑點(diǎn)(圖1 A)。

甘草[2]:取本品2 g，加甲醇30 mL，超聲處理1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。再取不含甘草的陰性樣品2 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取甘草對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取甘草酸銨對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品溶液則無此斑點(diǎn)(圖1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 橙皮苷含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Lichrospher C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－醋酸－水(35∶4∶61)[2];檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.2 溶液制備

取橙皮苷對(duì)照品約10.70 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.107 0 g/L的對(duì)照品溶液。取本品約1 g，精密稱定，精密加甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，離心，即得供試品溶液。取缺陳皮的陰性樣品約1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液各5 μL，分別注入色譜儀。供試品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上顯示相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間處無干擾，見圖3。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液(0.107 0 g/L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度分別為 0.021 4，0.042 8，0.064 2，0.085 6 g/L 系列對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、橙皮苷質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=21 503.99 X－6.84，r=0.999 87。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在 0.214 ～1.070 μg 范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

圖3 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液(0.107 0 g/L)10 μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定橙皮苷峰面積積分值。結(jié)果的RSD為0.40%(n=5)，表明精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為200811)樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果平均含量為4.25 mg/g，RSD為0.89%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):同一供試品(批號(hào)為 200811)溶液，分別于0，2，4，6，8 h時(shí)分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定橙皮苷的峰面積。結(jié)果的 RSD為1.02%(n=5)表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取橙皮苷對(duì)照品約10.15 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(1.015 g/L)，備用。取已知含量的樣品(批號(hào)200811)0.5 g，精密稱定，分別加入上述橙皮苷對(duì)照品溶液 0.8，1.0，1.2 mL，各 2 份，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進(jìn)樣5 μL，測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取二陳湯配方顆粒約1.0 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液并進(jìn)樣5 μL，測(cè)定、計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為200811，200901，200904 的樣品中橙皮苷含量分別為 4.24，4.32，4.40 mg/g。

3 討論

二陳湯配方顆粒中陳皮、甘草的定性鑒別采用TLC法，并分別與各自的陰性對(duì)照品溶液進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果沒有干擾、斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，收到良好的效果。本試驗(yàn)中采用2005年版《中國藥典(一部)》陳皮含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相，分離效果好。

文中建立的定性、定量方法，可有效控制二陳湯配方顆粒的質(zhì)量。另外，二陳湯配方顆粒制備工藝先進(jìn)，服用、攜帶方便，可為臨床應(yīng)用提供新的用藥方式。

[1]余子川，劉焱文，方 穎，等.二陳湯配方顆粒與傳統(tǒng)煎劑的化學(xué)成分比較[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2003，9(10):42.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:59，132.