閆占峰， 王振營， 何康來

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所，植物病蟲害生物學(xué)國家重點實驗室，北京 100193）

玉米田蚜蟲的發(fā)生和為害近年來逐年加重，已成為我國玉米生產(chǎn)中亟待解決的問題。在已有的報道中我國玉米田為害玉米的蚜蟲種類除玉米蚜［Rhopalosiphum maidis（Fitch）］外，還有禾谷縊管蚜［R．padi（Linnaeus）］、荻 草 谷 網(wǎng) 蚜［Macrosiphum （Sitobion）miscanthi （Takahashi）］和 麥 二 叉 蚜 ［Schizaphis graminum （Rondani）］等麥類蚜蟲［1－2］。然而我們在對河北省廊坊地區(qū)玉米田蚜蟲種類進(jìn)行調(diào)查研究時發(fā)現(xiàn)在玉米下部葉片為害的有一種體色為黃色的蚜蟲，該種蚜蟲在玉米生長前期主要集中在植株下部葉片為害，隨著玉米生長，玉米下部葉片逐漸老化、脫落，逐漸向玉米中上部轉(zhuǎn)移為害。根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定，該種蚜蟲不是上述4種蚜蟲的任何一種。為確定該蚜蟲的種類，我們進(jìn)行了標(biāo)本采集，帶回實驗室內(nèi)進(jìn)行形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定。形態(tài)特征委托中國科學(xué)院動物研究所喬格俠研究員鑒定。

1 形態(tài)學(xué)特征

該種無翅孤雌蚜蟲體黃色，卵圓形，體長1．90 mm，體寬1．00 mm；觸角6節(jié)，第1～6節(jié)長度比例為19∶18∶100∶75∶75∶（43＋89）；腹管長圓筒形，有瓦紋、緣突和切跡；長0．39 mm，為體長的0．21倍，為尾片的2．40倍。尾片圓錐形，近中部收縮，有微刺突組成瓦紋，有曲毛4～7根。

上述形態(tài)學(xué)特征與棉蚜［3］一致，因此，玉米田黃色未知蚜蟲鑒定為棉蚜（Aphis gossy pii）。

2 分子生物學(xué)鑒定

為了進(jìn)一步驗證該種蚜蟲是否為棉蚜，利用分子生物學(xué)做了進(jìn)一步的鑒定。試驗方法：用DNA提取試劑盒提取的蚜蟲總DNA為模板，利用引物（正向Lep F：ATTCAACCAATCATAAAGATATTGG；反向 Lep R：TAAACTTCTGGATGTCCAAAAAATCA）對蚜蟲COⅠ（細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ）基因進(jìn)行PCR擴增。反應(yīng)總體系為50μL，其中含10×PCR Buff er 5μL、2．5μmol／L d NTPs 4 μL、10μmol／L引 物 各 1μL、Taq 酶0．6μL，模板DNA 5μL，用雙蒸水補充至50μL。擴增條件為95℃預(yù)變性4 min；95℃變性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10 min，4℃保存。擴增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，并送博邁德科技發(fā)展有限公司測序。

瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明，在600～800 bp之間有一條特異性的條帶（圖1），測序結(jié)果用DNAS－tar的Seqman進(jìn)行正反拼接，然后在Gen Bank中進(jìn)行Blast比對，手工校正，得到信息準(zhǔn)確的片段633 bp。比對結(jié)果顯示與Gen Bank中的部分棉蚜株系（EU701419等）的序列相同，從分子生物學(xué)上進(jìn)一步確定了玉米田采集到的黃色蚜蟲為棉蚜。

圖1 黃色蚜蟲COⅠ基因PCR擴增結(jié)果

3 討論

傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)可將特征比較明顯的蚜蟲種類進(jìn)行區(qū)分，然而形態(tài)學(xué)難以鑒別的蚜蟲則需要通過分子生物學(xué)鑒定［4］。Sabater－Munoz［5］用小片段 COI基因序列準(zhǔn)確地鑒定了形態(tài)學(xué)上難以鑒別的五節(jié)根蚜族（For dini）蚜蟲的次生寄主型。許多學(xué)者建議將分子生物學(xué)應(yīng)用于蚜蟲研究［4－7］。在對河北廊坊地區(qū)玉米田采集到的黃色無翅孤雌蚜蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定的基礎(chǔ)上，輔助以分子生物學(xué)鑒定，兩者鑒定結(jié)果一致，可以確定該蚜蟲種類為棉蚜。這是棉蚜在玉米上為害的首次報道，其在玉米上的為害機制有待于進(jìn)一步研究。

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