夏 強(qiáng)（綜述） 萬康林*（審校）

（1 南華大學(xué)病原生物研究所，湖南 衡陽421001；2中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所/傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室，北京 102206）

結(jié)核分枝桿菌對二線藥物耐藥性及機(jī)制研究進(jìn)展

夏 強(qiáng)1,2（綜述） 萬康林2*（審校）

（1 南華大學(xué)病原生物研究所，湖南 衡陽421001；2中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所/傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室，北京 102206）

結(jié)核分枝桿菌；藥物耐藥；機(jī)制；研究進(jìn)展

結(jié)核病耐藥性的產(chǎn)生和傳播已成為全球公共衛(wèi)生工作的焦點。世界衛(wèi)生組織（WHO）最新統(tǒng)計顯示，全球有39萬～51萬例耐多藥結(jié)核?。╩ulti-drug-resistant tuberculosis，MDR-TB），其中50%分布在印度和中國[1]。MDR-TB指結(jié)核分枝桿菌至少同時對異煙肼、利福平耐藥。WHO指出，初治結(jié)核病治愈率能夠達(dá)到95%以上，雖然MDR-TB可以選用個體化治療方案，但治愈率不會超過60%～70%，且治療時間是初治病例的4～5倍，治療成本是初治病例的50～200倍。

2005年南非發(fā)現(xiàn)首例廣泛耐藥結(jié)核?。╡xtensively drug-resistant tuberculosis，XDR-TB）。這種廣泛耐藥結(jié)核菌株一出現(xiàn)就引起全球的高度關(guān)注，目前已成為結(jié)核病防治工作的最大難題和挑戰(zhàn)。XDR-TB是指在MDR-TB的基礎(chǔ)上對任何一種喹諾酮類藥物以及至少對二線結(jié)核藥物中三種注射藥物卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星之一具有耐藥性的結(jié)核病。目前，全球已有58個國家和地區(qū)報告發(fā)現(xiàn)此類病例[1]，另外人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）的廣泛蔓延也造成XDR-TB 病例迅速增加。遏制XDR-TB的困難在于采用傳統(tǒng)的藥敏試驗進(jìn)行確診需要4～8周時間，在沒有確診的情況下，常規(guī)的治療方案無效。以至于患者病情在治療期間不斷惡化，極易發(fā)生菌株的擴(kuò)散，后果十分嚴(yán)重。

充分了解二線抗結(jié)核藥物的耐藥流行趨勢、分子機(jī)制、檢測方法對于XDR-TB的及時診斷、早期治療、切斷疾病傳播十分重要。本文將從以上3個方面的研究對常用二線抗結(jié)核藥物進(jìn)行綜述。

1 結(jié)核分枝桿菌對二線藥物耐藥的研究現(xiàn)狀和流行趨勢

根據(jù)藥物的作用機(jī)制、毒副作用、價格將抗結(jié)核藥物劃分為一、二線藥物。一線藥物包括異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素和吡嗪酰胺。二線藥物包括喹諾酮類藥物、氨基苷類藥物如卡那霉素和阿米卡星、硫代酰胺類藥物如乙硫異煙胺與丙硫異煙胺、卷曲霉素以及對氨基水楊酸等。WHO最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示[1]，XDR-TB以每年2.5萬～5萬例遞增，不良反應(yīng)小、價格便宜的一線藥物已經(jīng)難以遏制其蔓延，而二線抗結(jié)核藥物耐藥率也不斷攀升。

1.1 喹諾酮類藥物

喹諾酮類藥物是人工化學(xué)合成的抗菌藥。目前環(huán)丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、克林沙星等應(yīng)用于各類耐藥結(jié)核病的治療，特別對一線藥物如異煙肼、利福平不敏感的MDR-TB有良好的效果[2]。研究表明結(jié)核病喹諾酮類藥物耐藥與MDR-TB高度相關(guān)，在美國和加拿大，4.1% MDR-MTB患者對喹諾酮藥物耐藥[3]，香港為19%[4]，新加坡則高達(dá)51.4%[5]。此外，Devasia等[6]對2002至2006年間640個結(jié)核病例研究發(fā)現(xiàn)喹諾酮類藥物耐藥多發(fā)生于接受過該類藥物治療的患者，連續(xù)使用10d以上，特別是超過60d的患者產(chǎn)生耐藥的危險性最高。還有研究表明結(jié)核分枝桿菌北京基因型較易產(chǎn)生喹諾酮耐藥[7]。

1.2 氨基苷類藥物

卡那霉素和阿米卡星是治療XDR-TB最重要的氨基苷類注射藥物?；颊邔敲顾?、阿米卡星的耐藥主要為獲得性耐藥。據(jù)報道，我國卡那霉素的耐藥率為10.5%[8]；而韓國只有1.4%[9]。

1.3 硫代酰胺類藥物

乙硫異煙胺與丙硫異煙胺為異煙酸的衍生物，是最常見的硫代酰胺類藥物，抑菌作用僅為異煙肼的 1/10～1/5。乙硫異煙胺和丙硫異煙胺是同一種活性物質(zhì)的兩種不同形式，與其他二線藥物相比，該類藥物在臨床治療使用后較易出現(xiàn)耐藥。de Kantor等發(fā)現(xiàn)未使用抗結(jié)核藥物治療患者對乙硫異煙胺、卷曲霉素、卡那霉素的耐藥率分別為13.2%、4.8%、4.2%，而經(jīng)過上述3種藥物治療3個月后，耐藥率分別為86%、40%、16.7%[10]。研究還發(fā)現(xiàn)，在MDR-TB患者中乙硫異煙胺耐藥尤為突出，目前認(rèn)為可能與異煙肼發(fā)生了交叉耐藥所導(dǎo)致[11]。因此，有學(xué)者建議既往接受乙硫異煙胺、丙硫異煙胺治療的結(jié)核病患者，必須進(jìn)行藥敏試驗，以免造成抗結(jié)核方案的藥物不足[12]。

1.4 環(huán)肽類藥物

卷曲霉素及其類似藥物紫霉素是治療XDR-TB較為理想的環(huán)肽類藥物，臨床中該類藥物一般協(xié)同其他藥物使用。卷曲霉素對靜止期的結(jié)核分枝桿菌最有效，且毒副作用較其他二線藥物小[13]。體外抗菌試驗顯示：卷曲霉素的最低抑菌濃度（MIC）為2.5μg/mL，有著極強(qiáng)的抑菌作用，依照＞10μg/mL為耐藥界限，其耐藥率在抗結(jié)核藥物中較低。WHO韓國參比實驗室對11939株結(jié)核分枝桿菌研究顯示：卷曲霉素的耐藥率僅為1.0%，卡那霉素和阿米卡星為1.9%，喹諾酮類為4.4%[14]。

1.5 對氨基水楊酸

該藥投入臨床較早，因其副作用較大被異煙肼所取代。近年來，由于對該藥進(jìn)行了改良，使其副作用減弱，被用于預(yù)防耐異煙肼菌群產(chǎn)生。目前，臨床上對氨基水楊酸的使用頻率不高，對氨基水楊酸耐藥發(fā)生率也較低，僅為2.8%[15]。

從上述數(shù)據(jù)分析，二線抗結(jié)核藥物耐性形勢不容樂觀，特別是治療MDR-TB、XDR-TB不可或缺的喹諾酮藥物，且復(fù)治結(jié)核患者耐藥率明顯高于新發(fā)病例。值得思考的一個問題是耐藥菌株是如何產(chǎn)生的？結(jié)核分枝桿菌耐藥突變株的自然變異率極低，異煙肼為3.5×10-6，利福平為3.1×10-8，病灶中出現(xiàn)耐兩種以上藥物的野生突變株概率僅為9×10-14。由此可見，MDR-TB、XDR-TB的產(chǎn)生最有可能是由于化療方案不合理、患者依從性差、藥物質(zhì)量欠佳等人為因素導(dǎo)致的獲得性耐藥。

2 結(jié)核分枝桿菌對二線藥物的耐藥分子機(jī)制

目前的研究認(rèn)為結(jié)核分枝桿菌耐藥性機(jī)制主要有：①染色體突變介導(dǎo)的耐藥，藥物靶點的編碼基因發(fā)生突變，改變了藥物作用靶位；②細(xì)胞膜通透性改變，藥物通透性降低，產(chǎn)生降解或滅活酶類。目前研究的熱點集中在藥物靶點的編碼基因突變或缺失導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌的耐藥。

2.1 氟喹諾酮類

DNA解旋酶是喹諾酮類藥物作用結(jié)核分枝桿菌的靶點。該酶是一種與DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄有關(guān)的Ⅱ型拓?fù)洚悩?gòu)酶，編碼基因為gyrA和gyrB，活性產(chǎn)物是由兩個A亞基和兩個B亞基組成的四聚體，A亞基可以切斷DNA雙鏈，使松弛狀態(tài)的DNA雙鏈進(jìn)入負(fù)超螺旋狀態(tài)，便于DNA進(jìn)一步復(fù)制；B亞基能夠水解ATP，為A亞基松解超螺旋提供能量。喹諾酮類藥物的水解產(chǎn)物能與DNA解旋酶和DNA形成三聯(lián)復(fù)合物，干擾細(xì)菌DNA解旋酶與DNA雙鏈的結(jié)合，從而抑制DNA復(fù)制、修復(fù)、重組，從而達(dá)到抗菌效果。

目前認(rèn)為，結(jié)核分枝桿菌對喹諾酮產(chǎn)生耐藥主要與gyrA發(fā)生突變有關(guān)。突變主要集中于74至113位核苷酸之間的保守序列，即喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)[16]。DNA序列分析顯示，gyrA基因突變的氨基酸位點有74、80、83、88、90、91、94、95、102、109，其中最常見的為94位點，其突變形式為Asp-Gly、Asp-Asn、Asp-Ala、Asp-Tyr；其次為90、91、102。而gyrB基因的突變相對較少，發(fā)生的位點有472、481、505、510、511和512，其中510位點的突變較為常見，突變形式為Asn-Asp[17]。

DNA解旋酶的突變位點與喹諾酮類藥物的耐藥程度密切相關(guān)。90位點Ala-Val突變，最低抑菌濃度（MIC）值上升16倍；94位點Asp-Asn或 His-Tyr突變，MIC值上升30倍，94位點Asp-Gly突變，MIC值上升60倍。此外，gyrA基因多位點的錯義突變或gyrA、gyrB同時發(fā)生點突變，MIC值上升32倍以上[18]。

有一些喹諾酮耐藥菌株并不存在DNA解旋酶突變，提示有其他的耐藥機(jī)制存在。如外排泵基因Rvl634，該基因的過度表達(dá)可引起細(xì)菌對氟喹諾酮藥物的敏感性降低[19]，呈現(xiàn)低度耐藥。

2.2 氨基苷類藥物

卡那霉素和阿米卡星主要作用于核蛋白體16S rRNA，其編碼基因為rrs。16S rRNA的序列高度保守，參與A位點tRNA核糖體的譯碼過程，在RNA轉(zhuǎn)譯中起重要作用，其立體構(gòu)象決定了校正的控制。如果rrs發(fā)生突變，將會降低藥物結(jié)合到核糖體上的能力，使之發(fā)生耐藥。目前發(fā)現(xiàn)，rrs基因的1401、1402、1408、1483位核酸突變與卡那霉素、阿米卡星的耐藥相關(guān)，其中第1401位A-G點突變可以作為高度耐藥的一個重要標(biāo)識[20]。

氨基苷類藥物間由于有相同的耐藥基因極易產(chǎn)生完全或部分交叉耐藥。一線藥物鏈霉素與卡那霉素和阿米卡星間沒有發(fā)現(xiàn)交叉耐藥，而阿米卡星與卡那霉素具有交叉耐藥。Kruuner等研究發(fā)現(xiàn)，有些結(jié)核分枝桿菌株對卡那霉素耐藥，對阿米卡星敏感；但對阿米卡星耐藥一定合并卡那霉素耐藥，這種現(xiàn)象可能與rrs基因的1401位點尚未突變有關(guān)[21]。

2.3 硫代酰胺類藥物

乙硫異煙胺、丙硫異煙胺是藥物的前體，它們進(jìn)入體內(nèi)需要經(jīng)過一系列生化反應(yīng)才能轉(zhuǎn)化成活性物質(zhì)，因此活化過程中關(guān)鍵酶的突變即可引起耐藥。硫代酰胺類藥物進(jìn)入體內(nèi)首先由單加氧酶激活，該酶的編碼基因為EthA，該基因突變會阻礙ETH-NAD結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥。Ndh基因編碼Ⅱ型NADH脫氫酶，該基因突變會影響NADH氧化為NAD+，也會影響ETH-NAD二者的結(jié)合。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)分枝菌酸的生物合成對硫代酰胺類藥物的敏感性至關(guān)重要[22]。InhA編碼依賴NADH烯?；d體蛋白還原酶，參與分枝菌酸合成系統(tǒng)。該基因突變引發(fā)細(xì)胞中NADH/NAD+比例增高，導(dǎo)致ETH-NAD+與InhA結(jié)合障礙。另外，編碼分枝菌酸的合成系統(tǒng)中第一個關(guān)鍵酶的編碼基因mshA突變會引起對異煙肼和乙硫異煙胺產(chǎn)生耐藥，二藥的MIC值分別增高2～16倍和4～8倍，并且突變與二藥交叉耐藥相關(guān)。

乙硫異煙胺和丙硫異煙胺與異煙肼也存在交叉耐藥，但是耐藥機(jī)制還沒有定論，目前主要有3種觀點：①inhA基因發(fā)生突變[22,23]；②inhA基因過度表達(dá)[22,24]；③NADH的濃度增高，導(dǎo)致NADH/ NAD+比值增大，抑制ETH-NAD+與InhA結(jié)合[25]。此外，硫脲類抗結(jié)核藥物如氨苯硫脲、戊氧苯硫脲等結(jié)構(gòu)與乙硫異煙胺相似，進(jìn)入體內(nèi)同樣也需要單加氧酶激活，二者存在交叉耐藥[26]。

2.4 卷曲霉素和紫霉素

卷曲霉素及其類似藥物紫霉素能夠阻斷tRNA從A位向P位的轉(zhuǎn)運(yùn)、引起mRNA翻譯起始的抑制及異常校讀。其耐藥的分子機(jī)制主要為甲基轉(zhuǎn)移酶的編碼基因tlyA發(fā)生突變。研究發(fā)現(xiàn)，tlyA能夠?qū)?6S rRNA 和23S rRNA進(jìn)行甲基化修飾，增強(qiáng)對卷曲霉素的敏感性[27]，一旦tlyA發(fā)生基因突變，卷曲霉素將會產(chǎn)生耐藥。目前，發(fā)現(xiàn)tlyA突變的核酸位點有7、26、40、52、64、200、205、218、272、708、712、75、67-69、673-674。

研究顯示，氨基糖苷類藥物與卷曲霉素、紫霉素之間存在交叉耐藥[28]。rrs基因的1401位核酸位點突變會引起結(jié)核分枝桿菌對卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星耐藥，但對紫霉素敏感；1402和1484位點突變與卡那霉素、卷曲霉素及紫霉素耐藥相關(guān)。由于氨基苷類藥物和環(huán)肽類藥物均可以干擾16S rRNA作用，WHO在XDR-TB給藥方案中指出，使用這兩類藥物治療前必須進(jìn)行藥敏試驗[8]。有學(xué)者也建議，上述兩類藥物在耐藥方面可視為同一類藥物：即對其中一類藥物耐藥時，不能使用另一類藥物[28]。

2.5 對氨基水楊酸

對氨基水楊酸的耐藥機(jī)制與磺胺類藥物相似，可以競爭性抑制對氨基苯甲酸，阻礙結(jié)核分枝桿菌的葉酸合成。胸腺嘧啶核苷酸合酶基因是細(xì)胞內(nèi)葉酸鹽水平的關(guān)鍵因子，其編碼基因為thyA，它能使甲基化dUMP轉(zhuǎn)變?yōu)閐TMP，耐藥菌中該酶的活性降低[29]。Mathys研究顯示[30]：在118株臨床標(biāo)本中，37%的耐藥株存在thyA突變，且突變與用藥劑量密切相關(guān)；63%的耐藥株中并沒有thyA基因發(fā)生突變，提示對氨基水楊酸的耐藥還可能有其他機(jī)制。

3 小結(jié)與展望

綜上所述，XDR-TB的出現(xiàn)為結(jié)核病的防控帶來極其嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，隨著二線抗結(jié)核藥物耐藥率不斷攀升，現(xiàn)有藥物已很難達(dá)到理想的效果，合并HIV感染后，XDR-TB的治療將更為困難。從目前的研究結(jié)果分析，結(jié)核分枝桿菌的耐藥機(jī)制主要為相關(guān)藥物的靶點基因缺失、突變進(jìn)而引起相應(yīng)酶的失活或過度表達(dá)，但是很多耐藥的發(fā)生還不能用現(xiàn)有理論解釋。

因此，進(jìn)一步探索結(jié)核桿菌的耐藥機(jī)制、了解基因與耐藥之間的關(guān)系，有助于研究新一代結(jié)核藥物及建立更為快速、簡便、可靠的耐藥性檢測方法，為指導(dǎo)XDR-TB的治療奠定堅實的分子基礎(chǔ)。

[1] World Health Organization.Multidrug and extensively drug-resistant TB (M/XDR-TB): 2010 global report on surveillance and response: WHO report 2010[R].2010.

[2] Berning SE.The role of fluoroquinolones in tuberculosis today[J]. Drugs,2001,61(1): 9-18.

[3] Bozeman L,Burman W,Metchock B,et al.Fluoroquinolone susceptibility among Mycobacterium tuberculosis isolates from the United States and Canada[J].Clin Infect Dis,2005,40(3): 386-391.

[4] Wang JY,Lee LN,Lai HC,et al.Fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates: associated genetic mutations and relationship to antimicrobial exposure[J].J Antimicrob Chemother, 2007,59(5):860-865.

[5] Grimaldo ER,Tupasi TE,Rivera AB,et al.Increased resistance to ciprofloxacin and ofloxacin in multidrug-resistant mycobacterium tuberculosis isolates from patients seen at a tertiary hospital in the Philippines[J].Int J Tuberc Lung Dis,2001,5(6): 546-550.

[6] Devasia RA,Blackman A,Gebretsadik T,et al.Fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis: the effect of duration and timing of fluoroquinolone exposure[J].Am J Respir Crit Care Med,2009,180(4): 365-370.

[7] Duong AD,Duyen NTH,Lan NTN,et al.Beijing genotype of Mycobacterium tuberculosis is significantly associated with highlevel fluoroquinolone resistance in Vietnam[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(11): 4835-4839.

[8] 王雷.4種氨基苷類抗生素對結(jié)核分枝桿菌(MTB)的體外抑菌作用的研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2009,27(4):367-368.

[9] Bai GH,Park YK,Choi YW,et al.Trend of anti-tuberculosis drug resistance in Korea,1994-2004[J].Int J Tuberc Lung Dis,2007,11 (5):571-576.

[10] De Kantor IN,Barrera L.Susceptibility tests to second line drugs and re-treatment of tuberculosis revisiting early experiences[J]. Medicina (B Aires),2007,67(3): 231-237.

[11] Vilcheze C,Weisbrod TR,Chen B,et al.Altered NADH/NAD+ ratio mediates coresistance to isoniazid and ethionamide in mycobacteria[J].Antimicrob Agents Chemother,2005,49(2): 708-720.

[12] 同重湘,顏曉霞,水永珍等.丙硫乙煙胺抗結(jié)核分枝桿菌臨床耐藥界限的研究[J].蘭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2005,31(4): 16-18.

[13] Heifets L,Simon J,Pham V.Capreomycin is active against nonreplicating M.tuberculosis[J].Ann Clin Microbiol Antimicrob, 2005,4:6.

[14] Shah NS,Wright A,Bai GH,et al.Worldwide emergence of extensively drug-resistant tuberculosis[J].Emerg Infect Dis,2007, 13(3): 380-387.

[15] 陳建.結(jié)核分枝桿菌基因分型及其耐藥性分析[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2008,3(1):10-15.

[16] Ginsburg AS,Grosset JH,Bishai WR.Fluoroquinolones,tuberculosis, and resistance[J].Lancet Infect Dis,2003,3(7): 432-442.

[17] Aubry A,Veziris N,Cambau E,et al.Novel gyrase mutations in quinolone-resistant and -hypersusceptible clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis: functional analysis of mutant enzymes[J]. Antimicrob Agents Chemother,2006,50(1): 104-112.

[18] Kocagoz T,Hackbarth CJ,Unsal I,et al.Gyrase mutations in laboratory-selected,fluoroquinolone-resistant mutants of Mycobacterium tuberculosis H37Ra[J].Antimicrob Agents Chemother, 1996,40(8): 1768-1774.

[19] De Rossi E, Aínsa JA, Riccardi G. Role of mycobacterial efflux transporters in drug resistance: an unresolved question[J].FEMS Microbiol Rev,2006,30(1): 36-52.

[20] Suzuki Y,Katsukawa C,Tamaru A,et al.Detection of kanamycinresistant Mycobacterium tuberculosis by identifying mutations in the 16S rRNA gene[J].J Clin Microbiol,1998,36(5): 1220-1225.

[21] Kruuner A,Jureen P,Levina K,et al.Discordant resistance to kanamycin and amikacin in drug-resistant Mycobacterium tuberculosis[J].Antimicrob Agents Chemother,2003,47(9): 2971-2973.

[22] Vilcheze C,Wang F,Arai M,et al.Transfer of a point mutation in Mycobacterium tuberculosis inhA resolves the target of isoniazid[J]. Nat Med,2006,12(9): 1027-1029.

[23] Banerjee A,Dubnau E,Quemard A,et al.inhA,a gene encoding a target for isoniazid and ethionamide in Mycobacterium tuberculosis[J].Science,1994,263(5144): 227-230.

[24] Larsen MH,Vilcheze C,Kremer L,et al.Overexpression of inhA, but not kasA,confers resistance to isoniazid and ethionamide in Mycobacterium smegmatis,M.bovis BCG and M.tuberculosis[J]. Mol Microbiol,2002,46(2): 453-466.

[25] Miesel L,D.A.Rozwarski,J.C.Sacchettini,et al.Mechanisms for isoniazid action and resistance[J].Novartis Found Symp,1998,217: 209-220.

[26] Alahari A,Alibaud L,Trivelli X.,et al.Mycolic acid methyltr ansferase,MmaA4,is necessary for thiacetazone susceptibility in Mycobacterium tuberculosis[J].Mol Microbiol,2009,71(5): 1263-1277.

[27] Johansen SK,Maus CE,Plikaytis BB,et al.Capreomycin binds across the ribosomal subunit interface using tlyA-encoded 2'-O-methylations in 16S and 23S rRNAs[J].Mol Cell,2006,23(2): 173-182.

[28] Maus CE,Plikaytis BB,Shinnick TM.Molecular analysis of crossresistance to capreomycin,kanamycin,amikacin,and viomycin in Mycobacterium tuberculosis[J].Antimicrob Agents Chemother, 2005,49(8): 3192-3197.

[29] Kunz BA,Kohalmi SE.Modulation of mutagenesis by deoxyribonucleotide levels[J].Annu Rev Genet,1991,25: 339-359.

[30] Mathys V,Wintjens R,Lefevre P,et al.Molecular genetics of paraaminosalicylic acid resistance in clinical isolates and spontaneous mutants of Mycobacterium tuberculosis[J].Antimicrob Agents Chemother,2009,53(5): 2100-2109.

R378.91+1

B

1671-8194（2011）05-0044-04

國家“十一五”重大傳染病防治科技重大專項“結(jié)核病傳播模式研究”（結(jié)核病分子流行病學(xué)研究）（2008ZX100/03-010-02）

*通訊作者：E-mail：wankanglin@icdc.cn