楊佩濃 陳漢松 張曉婷

（浙江省臺州醫(yī)院病理科，浙江 臺州 317000）

在日常的工作中，婦科刮宮送檢的宮內(nèi)膜組織在制作HE切片時，經(jīng)常會出現(xiàn)掉片，染色腺體發(fā)白等情況。我們結(jié)合多年的工作經(jīng)驗，就宮內(nèi)膜組織的制片作一下分析。

1 材料與方法

1.1 材料

臺州醫(yī)院婦產(chǎn)科刮宮送檢的宮腔內(nèi)膜組織

1.2 操作步驟

1.2.1 取材

破碎的宮內(nèi)膜組織取材時應(yīng)把它包在擦鏡紙里，不能包得過多，過緊，否則影響脫水效果。取材的合格與否將直接影響組織的脫水，透明，浸蠟，切片，染色及診斷等一系列環(huán)節(jié)[1]。

1.2.2 固定

采用10%的中性福爾馬林固定液。常溫下固定時間為6～12h。在溫度降低的情況下適當(dāng)?shù)匮娱L固定時間，但不超過24h。

1.2.3 脫水、透明和浸蠟

一般來說，脫水的酒精應(yīng)該從低濃度的70%酒精再逐漸過度到無水酒精。透明時間應(yīng)控制在40～60min，過短，起不到透明作用，過長組織過硬，發(fā)脆，影響切片。浸蠟的溫度應(yīng)在58～60℃，如過高組織易收縮變硬，切不成片。浸蠟時間在3～4h。

1.2.4 包埋

破碎的宮內(nèi)膜組織在包埋時一定要將組織放在同一個平面上，否則易造成組織切不全。

1.2.5 切片和鋪片

切片刀要鋒利，切片時，要將蠟塊在切片機上固定好，各個角度調(diào)節(jié)好，以防切片厚薄不一，并且要作最大的切面。對于易碎的組織，可用干凈紗布沾點熱水，擦下組織面，一般這種情況就能解決了。但是這樣會造成組織厚度加大，需要適當(dāng)?shù)卣{(diào)小切片刻度。鋪片時水溫不能太高，也不能太低，一般在40℃左右。太高的話，組織容易破裂，結(jié)構(gòu)不完整。太低，片子不容易展平，易產(chǎn)生皺折，或是片子貼不牢，易掉片?？酒臏囟纫刂圃?5℃左右。

1.2.6 染色

染色時間與切片的厚度，以及室溫，染液的新舊有關(guān)，所以應(yīng)該隨著不同的情況分別的對待。最好能在顯微鏡下控制染色。過深，用鹽酸酒精適當(dāng)?shù)胤只?。伊紅不能太深，只作適當(dāng)?shù)匾r染。

1.2.7 封片

樹膠不能滴得太多，以免溢出，也不能太少，否則蓋不住切片。最后標(biāo)簽要端正，編號清晰，粘貼恰當(dāng)。

2 結(jié) 果

經(jīng)過上述的方法，切出來的破碎宮內(nèi)膜組織厚薄均勻，厚度3～4μm，無皺褶，無刀痕，核槳對比分明，染色鮮艷，封固美觀。

3 討 論

在制作宮內(nèi)膜組織切片時，由于組織內(nèi)含較多的血凝塊和水分，所以從取材開始，就應(yīng)該嚴格按照規(guī)范的操作規(guī)程。當(dāng)然，在制片過程中，稍有一個環(huán)節(jié)出了問題，就會影響整體效果，常見的現(xiàn)象和原因有以下幾點。

3.1 染色腺體發(fā)白，組織結(jié)構(gòu)不清的原因

3.1.1 固定不及時或固定量不足

組織離體后，應(yīng)盡早放入固定液中，固定液的量應(yīng)為組織的4～5倍。對于標(biāo)本較多的應(yīng)該將其分裝在幾個瓶子里以達到充分固定到組織中央。

3.1.2 染液陳舊或是室溫太低，導(dǎo)致染色不佳

對于量大的單位，染液的用量應(yīng)盡可能的量化，對于用量較小的單位，要以染液的使用時間來確定更換時間。在室溫較低時，尤其是冬天，染液的著色力就會降低，所以在不易著色時，應(yīng)把染液放在37℃的水浴箱里，以增加它的染色力。

3.1.3 脫水不良

脫水液陳舊，應(yīng)定期及早更換脫水液。或是組織包得太多而影響脫水效果。

3.1.4 組織脫蠟不徹底，造成染不上色或著色很淡，鏡檢時模糊不清。

3.1.5 染色后脫水，透明不徹底，而導(dǎo)致切片模糊。

3.2 切片破碎，切片不完整的原因

3.2.1 組織脫水過度，由于宮內(nèi)膜組織中含有較多的水分，充分脫水后，可造成組織過脆，導(dǎo)致切片時破碎。尤其對于新?lián)Q的脫水液，組織要減少脫水時間，等用了一段時間再重新調(diào)整。

3.2.2 由于是破碎組織不易平整地包在一個面上，所以包埋時盡可能地將組織靠攏。

3.2.3 切片刀不鋒利。刀口上有異物或有缺口時，容易造成破碎。應(yīng)該換把刀片或是清理刀片上的異物再切。

3.2.4 組織粗修后，沒經(jīng)過細修就直接切片。這樣的切片一般會成我們通常說得“開天窗”，所以一定要在粗修后，然后細修再切才可以避免。

3.3 切片污染。

3.3.1 包埋時，由于是破碎組織，鑷子上很容易沾上，而造成污染。所以，每次包埋完一個組織后應(yīng)該將鑷子清理干凈。

3.3.2 切片粗修時，粉末狀的廢蠟容易粘在壓片板而造成污染。粗修完后，一定要將壓片板清掃干凈后再細修切片。

3.3.3 展片時，殘留水中的組織碎屑易粘附在組織切片上。所以在片子放入水之前，要拿報紙等物撈一下水面，以防組織污染。

3.4 掉片

宮內(nèi)膜組織含較多血凝塊，在制片過程中更容易出現(xiàn)這種情況。所以在烤片時溫度不能太高，一般不超65℃，另外就是片子粘貼在玻片上后，不能馬上將其放入烤箱，應(yīng)該放在紗布上將水瀝干后再放入。

要制作出一張完美的HE切片，尤其是對于一些像宮內(nèi)膜類制片有一定難度的組織來說，需要我們平時不斷的摸索和總結(jié)經(jīng)驗，以努力提高我們的制片質(zhì)量。

[1]吳 ,吳鵬,潘曉蔚等.高質(zhì)量組織切片的制作要點與體會[J].沈陽醫(yī)學(xué)院報,2004,6(3)：164.