潘 磊，韓永鵬(北京中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，北京 100039)

丹紅注射液為中藥丹參、紅花按科學(xué)配方提取的復(fù)方制劑，能夠明顯緩解心絞痛癥狀，改善心肌缺血。丹酚酸B作為公認(rèn)的對心腦血管疾病有較好治療作用的有效成分，在丹紅注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中并未涉及。本文采用高效液相色譜法測定丹紅注射液中丹酚酸B的含量，供作參考。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀(美國 Agilent科技公司)、丹酚酸 B對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:111562-200706)、丹紅注射液(菏澤步長制藥有限公司，批號:091203)、乙腈(色譜純)、甲酸(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:ZORBAX SB-C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37);檢測波長:286 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:35℃ ;進(jìn)樣量:10 μL;理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對照品和供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸 B對照品12.50 mg，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。再精密量取對照品儲備液2 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg·mL-1的對照品溶液，0.45 μm 濾膜過濾，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備:精密量取丹紅注射液 5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系:分別精密吸取對照品儲備液 0.5、1、2、4、8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，按“2.1項”下色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，丹酚酸B含量(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:A=110 901.106 C+17.220(r=0.999 9)。表明丹酚酸B含量在0.025～0.400 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，見圖1(A)。

2.3.2 儀器精密度試驗:取供試品溶液，按以上色譜條件，復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測得丹酚酸 B峰面積的 RSD為1.51%，見圖1(B)。

2.3.3 樣品溶液穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液，按以上色譜條件每隔1 h進(jìn)樣1針，共進(jìn)6針，記錄峰面積，結(jié)果在6 h內(nèi)供試品溶液峰面積的RSD為1.95%，表明供試品溶液在6 h內(nèi)基本無變化，穩(wěn)定性較好。

2.3.4 專屬性試驗:按處方組成，取紅花藥材按制備工藝要求，制成不含丹參藥材的陰性對照樣品，按“2.2.2項”下要求制備供試品溶液，進(jìn)樣，測定。結(jié)果陰性對照溶液在與丹酚酸B相同位置處無色譜峰，表明陰性對照無干擾，見圖1(C)。

2.3.5 重復(fù)性試驗:取同一批號樣品6份，按“2.2.2項”下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計算丹酚酸B含量(mg·mL-1)，結(jié)果樣品中丹酚酸 B平均含量為0.391 mg·mL-1，RSD 為 1.85%(n=6)。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram

2.3.6 加樣回收率試驗:精密吸取已知含量樣品6份，每份1 mL，精密加入丹酚酸B對照品溶液適量，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，制備供試品溶液，記錄峰面積并計算含量，平均回收率為97.43%，RSD為0.56%，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果Tab 1 Results of recovery test

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1項”下色譜條件測定3批樣品含量，結(jié)果見表2。

3 討論

經(jīng)不同品牌的C18色譜柱對多批樣品進(jìn)行反復(fù)試驗，證明本法的重現(xiàn)性好，可用于丹紅注射液中丹酚酸B的含量測定。曾采用乙酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37)、甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37)、乙酸-水-乙腈(1∶50∶49)為流動相，結(jié)果甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37)的分離效果最佳，保留時間適中，故選用為流動相?，F(xiàn)行的丹紅注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有丹酚酸B的定量方法，本實驗選擇公認(rèn)的有效成分丹酚酸B作為指標(biāo)成分，初步建立了HPLC法測定其含量，為該藥質(zhì)量控制提供參考。

表2 丹紅注射液中丹酚酸B含量測定結(jié)果(mg·mL－1)Tab 2 Determination results of content of salvianolic acid B in Danhong injection(mg·mL －1)

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