陳淑圻，李悅山

廣州醫(yī)學院藥理教研室，廣東廣州 510182

他汀類藥自20世紀70年代問世以來，在降脂治療中起了重大的作用。至今市場已出現(xiàn)8種他汀類藥物，分別是洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、羅蘇伐他汀、匹伐他汀和2001年退市的西立伐他汀[1]。洛伐他汀因能顯著降低膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平，具有良好的降血脂作用而較廣泛地被用于臨床。

有相關報道[2-4]顯示，目前洛伐他汀在臨床應用的主要劑型有：普通片劑、膠囊劑、顆粒劑，緩釋片、分散片和滴丸。由于洛伐他汀難溶于水，其普通片劑服藥次數(shù)多，服用不方便，血藥濃度起伏大，生物利用度低，不利于臨床用藥的安全性[5]。為了提高藥物的生物利用度，減少不良反應的發(fā)生率，并解決普通緩釋片不易分割的問題，研制洛伐他汀微丸型片劑具有重要的意義。本文進行了洛伐他汀緩釋微丸型片劑新劑型的處方前研究，為進一步研究工作打下基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

KQ-400型超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司），高效液相色譜儀（Agilent 1200），電子天平（BA110S，Sartorius），Hp-8452A型紫外-可見分光光度計（HEWLETT PACKARD），PHS-25型pH計（上海精密科學儀器有限公司雷磁儀器廠），電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠），THZ-82水浴恒溫振蕩器 （江蘇省金壇市宏華儀器廠），SZ-93自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 材料

洛伐他?。兾魃ド锛夹g有限公司），磷酸二氫鉀、十二烷基硫酸鈉、鹽酸、磷酸二氫鈣、正辛醇、磷酸、乙醇（分析純，廣州化學試劑廠），甲醇、乙腈（色譜純，依能色譜有限公司），微晶纖維素 PH101、HPMC E5（湖州展望藥業(yè)有限公司），羧甲基淀粉鈉（法國羅蓋特），Eudragit NE 30D（德國羅姆公司），滑石粉Talc（1 000目）（中美合資廣西龍勝華美滑石開發(fā)有限公司），磷酸二氫鈣（分析純，廣州化學試劑廠），硬脂酸（上海倍特化工有限公司），硬脂酸鎂、乳糖（上海運宏化工制劑輔料技術有限公司）。

2 方法與結果

2.1 洛伐他汀溶解度的測定

2.1.1 吸收波長的選擇

洛伐他汀為水難溶性藥物，根據(jù)文獻報道[6]，其在甲醇、十二烷基硫酸鈉（SDS）等溶液中有一定的溶解度。分別測定洛伐他汀在0.1 mol/L HCl、水、甲醇、乙醇、0.5%SDS和pH=6.8磷酸鹽緩沖液（內(nèi)含0.5%SDS，下同）溶液中的溶解度。以相應溶劑作為空白對照，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，測定最大吸收波長。由掃描結果可知，洛伐他汀在上述介質(zhì)中的最大吸收波長均為238 nm。

2.1.2 測定洛伐他汀在不同介質(zhì)中的溶解度

稱取六份適量的洛伐他汀，分別置于25 ml具塞錐形瓶中，分別加入 0.1 mol/L HCl、水、甲醇、乙醇、0.5%SDS和 pH=6.8磷酸鹽緩沖液各20 ml，將錐形瓶置于恒溫振蕩器中振蕩，溫度為（37±1）℃，100 r/min 振蕩 24 h 后取樣，用 0.45 μm的微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液經(jīng)適當稀釋后，按紫外分光光度法分別在238 nm處測定吸收度，計算藥物在各種介質(zhì)中的溶解度，見表1。

表1 洛伐他汀在不同介質(zhì)中的溶解度[（37±1）℃]

2.2 油水分配系數(shù)的測定

用不同pH的緩沖液配制適宜濃度的洛伐他汀溶液，取該溶液10 ml與正辛醇10 ml混合，置于錐形瓶中。（25±1）℃，100 r/min恒溫振蕩24 h，離心分離兩相，取水相經(jīng)適當稀釋后，按紫外分光光度法分別在238 nm處測定吸收度，計算平衡前后水相中的藥物濃度，計算表觀油水分配系數(shù)。繪制洛伐他汀表觀油水分配系數(shù)與溶出介質(zhì)pH的關系圖。見圖1。

由結果可知，當pH在1.0～6.8之間時，洛伐他汀的Papp值較??；當pH＞7.0時，Papp值隨著pH增大而急劇上升，表明藥物隨著pH的增大水溶性逐步降低，在堿性環(huán)境下，親脂性大大增強。

2.3 體外分析方法的建立

2.3.1 含量測定方法

2.3.1.1 色譜條件 參考《美國藥典》（30版）中洛伐他汀片含量測定的方法，具體色譜條件為：①緩沖液：取3.45 g磷酸二氫鈉溶于900ml水中，加磷酸調(diào)pH值至4.0，加水稀釋至1000ml。②流動相：乙腈∶緩沖液∶甲醇=5∶3∶1。③柱溫：45℃。④色譜柱：C18柱[7]，柱型號為 Dionexacclaim120C18（4.6mm×150mm，5 μm）。⑤測定波長：238 nm。 ⑥流速：1 ml/min。 ⑦進樣量：10 μl。 制備每1 ml中約含洛伐他汀10 μg的溶液，作為對照品溶液；取樣品按通用方法制備供試品溶液；取輔料按同樣方法制備空白輔料溶液。將上述樣品分別進樣，結果表明洛伐他汀甲醇溶液在波長為238 nm時，出峰時間為10 min左右，且所用輔料在保留時間處無干擾。

2.3.1.2 標準曲線 精密稱取洛伐他汀對照品20 mg置于100 ml容量瓶中，加入適量甲醇，超聲溶解，加甲醇定容至刻度。精密移取對照品母液 0.1、0.4、0.8、1.6、3.2 ml置于 10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻即得。分別按“2.3.1.1”色譜條件操作，記錄色譜圖。以濃度（C）為橫坐標，以峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，得到線性方程為：A=29 567C+9 095.7（r=0.999 9）。 結果，洛伐他汀在 1.98～63.52 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好。

2.3.1.3 回收率 精密稱取洛伐他汀及模擬緩釋微丸片處方比例的適量輔料，加入甲醇配制成10、30、60 μg/ml的樣品溶液各3份。高效液相色譜法測定其峰面積，根據(jù)標準曲線計算含量，以測得量與加入量比較，計算回收率。由表2的數(shù)據(jù)可以看出，各濃度回收率均接近100%，平均RSD均小于2%，說明該方法準確度良好。

表2 洛伐他汀含量回收率

2.3.1.4 樣品溶液穩(wěn)定性試驗 將上述繪制標準曲線的第3號溶液（15.88 μg/ml），避光放置 12 h，分別于 0、3、6、9、12 h 測定峰面積，本品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。RSD為0.04%。

2.3.1.5 精密度測定 稱取洛伐他汀適量，分別配制濃度為10、30、60 μg/ml的樣品甲醇溶液，按高效液相測定法測定，每個樣品平行測3次，記錄色譜圖，測定結果見表3。

表3 洛伐他汀含量精密度

2.3.1.6含量測定方法 取緩釋微丸片10片，精密稱定，研細。精密稱取細粉適量（約相當于洛伐他汀40 mg），置于50 ml容量瓶中，加適量甲醇，超聲15 min，放冷后加甲醇稀釋至刻度。搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1 ml至10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。用上述的高效液相方法測定溶液在238 nm波長的峰面積，與對照品的峰面積對照，按外標一點法計算樣品含量。

2.3.2 釋放度測定方法

根據(jù)洛伐他汀的溶解特性，本緩釋片制成12 h緩釋釋藥較合適，按照《中國藥典》（2005年版）緩控釋制劑指導原則，累計百分釋放度應滿足：2 h約30%、6 h約50%、12 h＞80%。

2.3.2.1 釋放介質(zhì)的選擇 按照《中國藥典》（2005年版）附錄XIX D緩控釋制劑指導原則，釋放介質(zhì)以去空氣的新鮮純水為最佳，或根據(jù)藥物的溶解特性、處方要求、吸收部位，使用稀鹽酸（0.001～0.1 mol/L）或 pH 為 3～8的磷酸鹽緩沖液，對難溶性藥物不宜采用有機溶劑，可加少量表面活性劑（如十二烷基硫酸鈉等）。由“2.1.2”項下測定結果可知，洛伐他汀在水中溶解度極小，只有0.7 μg/ml左右，以水為釋放介質(zhì)達不到漏槽條件，而用人工胃液（0.1 mol/L HCl）和人工腸液（pH=6.8磷酸鹽緩沖液）作釋放介質(zhì)可達到漏槽條件。

2.3.2.2 釋放度測定方法 參照《中國藥典》（2005年版）二部附錄溶出度測定第一法轉(zhuǎn)籃法裝置，釋放前2 h以0.1 mol/L HCl模擬人工胃液為釋放介質(zhì)900 ml，2 h之后以pH=6.8磷酸鹽緩沖液900 ml為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，溫度（37.0±0.5）℃，依法操作，定時取樣5 ml（同時補加等量同溫釋放介質(zhì)），過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液進高效液相，測定溶液峰面積，計算藥物不同時間點的累積釋放率。

2.3.2.3 釋放度數(shù)據(jù)分析方法 體外釋放度試驗是篩選緩控釋制劑處方和控制其質(zhì)量的重要手段。國外學者在比較兩種制劑的釋放度曲線時，常帶入適宜的數(shù)學模型加以評價。f2方程[8-9]為美國FDA推薦，用以比較兩條釋放曲線等價性的方法[10]，該方法的優(yōu)點在于可直接對釋藥數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，無需擬合各種釋藥速率。其公式為：

Rt為參比樣品t時釋放度；Tt為試驗樣品t時釋放度。完全相同的兩條釋放曲線，其f2=100；釋放差異增大，f2值減?。籪2＞50，均認為有相同的釋放行為。

3 討論

3.1 藥物的溶解度

藥物的溶解度直接影響藥物的吸收與藥物在體內(nèi)的生物利用度，是制備藥物制劑首先應掌握的信息。通過測定藥物溶解度，表明洛伐他汀在水中不溶，在甲醇、乙醇中有較好的溶解性，加入表面活性劑十二烷基硫酸鈉可增加藥物的水溶性，藥物在0.1 mol/L HCl溶液和pH=6.8的磷酸緩沖液中有一定的溶解性，用作釋放介質(zhì)均能達到漏槽條件。

3.2 藥物的油水分配系數(shù)

藥物要進入體內(nèi)，必須要穿過細胞的生物膜。由于細胞膜具有脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，因此藥物的親脂性程度與藥物的油/水分配系數(shù)有關。油水分配系數(shù)試驗表明洛伐他汀在pH為1.0～6.8的介質(zhì)中表觀油水分配系數(shù)較小，但當pH＞7時表觀油水分配系數(shù)急劇增大，表觀油水分配系數(shù)過大將使藥物蓄積于生物膜，難以進入體循環(huán)，所以將洛伐他汀制備成12 h釋藥較宜。

3.3 含量測定方法

本文采用高效液相色譜法測定樣品含量，流動相參考《美國藥典》（30 版）使用乙腈∶磷酸緩沖液∶甲醇=5∶3∶1，柱溫45℃，經(jīng)試驗藥物于10 min左右出峰。經(jīng)方法學驗證，線性范圍良好，回收率好，日內(nèi)精密度平均RSD＜2%，方法準確可靠。

3.4 釋放度測定方法

由于釋放介質(zhì)不宜用有機溶劑，從溶解度試驗可知，藥物在0.1 mol/L HCl溶液和pH=6.8的磷酸緩沖液中有一定的溶解度，作為釋放介質(zhì)可達到漏槽條件，且藥物在介質(zhì)中穩(wěn)定。釋放度數(shù)據(jù)分析方法采用美國FDA推薦的f2方程進行評價。

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