曾昭明,劉 杰,先雄斌,戴 穹,范光碧

(瀘州醫(yī)學(xué)院:1.解剖學(xué)教研室;2.公共衛(wèi)生系,四川 646000)

人直腸癌血管內(nèi)皮生長因子-C的表達(dá)及其意義*

曾昭明1,劉 杰2,先雄斌1,戴 穹1,范光碧1

(瀘州醫(yī)學(xué)院:1.解剖學(xué)教研室;2.公共衛(wèi)生系,四川 646000)

目的檢測血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)在人直腸癌組織和淋巴結(jié)中的表達(dá),探討VEGF-C在人直腸癌發(fā)生、發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用。方法選擇31例手術(shù)切除并經(jīng)病理切片檢查確診為直腸癌患者的癌組織及其中14例淋巴結(jié)石蠟標(biāo)本,采用免疫組織化學(xué)方法檢測VEGF-C在癌組織和淋巴結(jié)內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果在31例直腸癌組織的癌細(xì)胞質(zhì)中,VEGF-C顯色陽性17例,占54.8%;在14例淋巴結(jié)中,VEGF-C顯色陽性10例,占71.4%。結(jié)論VEGF-C在直腸癌組織和淋巴結(jié)中均有較高表達(dá),可能在促使淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移并形成新的淋巴管,導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。

血管內(nèi)皮生長因子-C;免疫組織化學(xué);直腸腺癌

直腸癌是常見的惡性腫瘤。近年來其發(fā)病率呈上升趨勢,嚴(yán)重危害人類健康。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)在人直腸癌組織及引流淋巴結(jié)中的表達(dá),探討VEGF-C在人直腸癌發(fā)生、發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用,以助于闡明直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制,為直腸癌的治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的直腸癌患者31例,其中男15例,女16例,年齡26～72歲,平均54.4歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者9例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例;分化Ⅰ級 10例,Ⅱ級12例,Ⅲ級9例。在31例患者手術(shù)取得的淋巴結(jié)中選取14例(包括9例Ⅲ級分化患者和5例Ⅱ級分化患者)。另取直腸癌患者遠(yuǎn)癌直腸組織(均距癌組織區(qū) 5 cm以上)5例作為對照。

1.2 試劑 兔抗人VEGF-C抗體、生物素化羊抗兔二抗、濃縮型SABC免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB顯色劑(棕黃色)均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 方法 采用SABC免疫組織化學(xué)法。將石蠟塊標(biāo)本制成5 μ m厚切片,常規(guī)脫蠟,室溫下3%雙氧水溶液處理20 min,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,于檸檬酸鹽緩沖液中抗原熱修復(fù)20 min,滴回正常山羊血清,室溫下作用20 min,阻斷非特異性反應(yīng),滴加兔抗人 VEGF-C抗體(濃度1∶100),濕盒中37℃孵育,4℃過夜,用0.01 mol/L PBS洗滌,生物素化羊抗兔二抗(濃度1∶100)孵育,滴加 SABC復(fù)合物,DAB顯色,鏡下觀察。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 用 SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF-C在直腸癌組織中的表達(dá) 在31例直腸癌癌組織中VEGF-C顯色陽性 17例,其中高、中、低分化(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級)腺癌分別為 2、7、8例,總陽性表達(dá)率為54.8%。VEGF-C免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)位于癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),為棕黃色顆粒,背景不著色,見封3圖1,遠(yuǎn)癌對照組織內(nèi)未見陽性物質(zhì)。

2.2 VEGF-C在淋巴結(jié)中的表達(dá) 在14例淋巴結(jié)中VEGFC顯色陽性10例,其中癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移陽性的9例患者中8例為陽性,轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)中的癌細(xì)胞VEGF-C免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)同樣位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),見封3圖2;癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移陰性的5例患者中2例為陽性,陽性物質(zhì)位于淋巴細(xì)胞內(nèi),見封 3圖3,總陽性表達(dá)率為71.4%。

2.3 VEGF-C與性別、年齡、腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 VEGF-C陽性表達(dá)與性別、年齡無關(guān)(P＞0.05),與腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05),見表1。

表1 VEGF-C與性別、年齡、腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(n)

3 討 論

本研究結(jié)果顯示VEGF-C在直腸癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)均有較高的表達(dá);其表達(dá)與患者的性別和年齡無關(guān),與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),提示病理情況下VEGF-C的表達(dá)較正常組織有所不同;VEGF-C高表達(dá)是直腸癌細(xì)胞的一種特性,且這種表達(dá)特性與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移相關(guān)。

本研究結(jié)果表明在直腸癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中VEGF-C表達(dá)于癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),與其他研究結(jié)論一致[1-5],但沒有觀察到Witte等[2]描述的VEGF-C在直腸癌組織的基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的陽性表達(dá),這可能與染色方法差異有關(guān);與綦曉龍等[5]得出的VEGF-C的表達(dá)與患者年齡相關(guān)的結(jié)論不同,本研究結(jié)果表明VEGF-C的表達(dá)與患者年齡無關(guān)。由此看來,影響 VEGF-C表達(dá)的因素比較復(fù)雜,要探明VEGF-C表達(dá)的相關(guān)因素及VEGF-C表達(dá)與直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其轉(zhuǎn)移機(jī)制尚需進(jìn)一步的實驗研究。

VEGF-C是重要的促淋巴管生成因子,能促進(jìn)淋巴管的生成,與癌淋巴管轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6-8]。VEGF-C通過與血管內(nèi)皮生長因子受體-3(VEGFR-3)結(jié)合,使受體產(chǎn)生自身磷酸化,經(jīng)胞質(zhì)內(nèi)信息傳遞,使DNA合成增強(qiáng),導(dǎo)致淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移,形成新的淋巴管,癌細(xì)胞隨新生淋巴管轉(zhuǎn)移[9]。本研究結(jié)果顯示VEGF-C也表達(dá)于有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)內(nèi),提示直腸癌的淋巴管轉(zhuǎn)移是其重要的轉(zhuǎn)移方式[10],盡管不同作者對新生成的淋巴管的功能等特性仍存在爭議[11-13]。作者推測VEGF-C/VEGFR-3信號通路異常可能是癌淋巴管生成或擴(kuò)張的主要機(jī)制,若能阻斷VEGF-C與VEGFR-3的結(jié)合則能抑制直腸癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。應(yīng)用VEGFR-3的中和抗體、可溶性細(xì)胞外片段或低相對分子質(zhì)量抑制物抑制VEGF-C/VEGFR-3信號通路,阻斷淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及形成新的淋巴管從而阻斷癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移途徑,可能為直腸癌的治療提供一種新方法[14-16]。

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Expression and significance of VEGF-C in rectal adenocarcinoma of human*

Zeng Zhaoming1,Liu Jie2,Xian Xiongbin1,Dai Qiong1,Fan Guangbi1
(1.Department of Anatomy;2.Department of Public Health,Luzhou Medical College,Sichuan 646000,China)

ObjectiveTo study the expression of vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C)in rectal adenocarcinoma tissue and lymph nodes,and to determine the function of VEGF-C in the process of occurrences,development and lymphatic metastasis of rectal adenocarcinoma.MethodsThe expression of VEGF-C was detected in 31 paraffin-embedded cases of rectal adenocarcinoma tissue and 14 paraffin-embedded cases of lymph nodes using immunohistochemistry method.ResultsIn plasma of cancer cell of 31 cases of rectal adenocarcinoma,VEGF-C positive expression was detected in 17 cases,the positive rate is 54.8%.In 14 cases of lymph nodes,VEGF-C positive expression was detected in 10 cases,the positive rate is 71.4%.ConclusionThe positive rate of VEGF-C are high both in rectal adenocarcinoma and in lymph nodes.VEGF-C can promote proliferation and migration of lymphatic endothelial cells and formation of new lymphatic vessels which plays an important role in metastasis of cancer cells.

vascular endothelial growth factor-C;immunohistochemistry;rectal adenocarcinoma

10.3969/j.issn.1671-8348.2011.05.004

A

1671-8348(2011)05-0425-02

瀘州醫(yī)學(xué)院青年基金資助項目(436)。

2010-01-25

2010-08-22)

·臨床研究·