海華，蘭希，李光浩

（大連民族學(xué)院a.生命科學(xué)學(xué)院;b.現(xiàn)代教育中心，遼寧大連 116605）

固相萃取－氣相色譜法測定調(diào)味品中的9種防腐劑

海華a，蘭希a，李光浩b

（大連民族學(xué)院a.生命科學(xué)學(xué)院;b.現(xiàn)代教育中心，遼寧大連 116605）

建立了一種簡單、快速、準(zhǔn)確的固相萃?。瓪庀嗌V法，用于分離和測定調(diào)味品中常見的9種防腐劑（山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、6種尼泊金酯類），樣品經(jīng)C18固相萃取柱凈化，氣相色譜測定，外標(biāo)法定量。9種防腐劑在0.10×10－4～1.00×10－4g·mL－1范圍線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.991 6～0.998 7，回收率為90.72%～109.43%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.25%～4.10%。方法凈化效果好，可以滿足日常食品中多種防腐劑的檢驗(yàn)要求。

防腐劑;調(diào)味品;固相萃取;氣相色譜

防腐劑是在食品生產(chǎn)、加工和存儲過程中添加的，以達(dá)到延長食品保存期限的化合物。過量攝入會加重人的肝、腎負(fù)擔(dān)［1］，我國對這些防腐劑的使用量和殘留量都有嚴(yán)格的規(guī)定［2］。因此，建立一種簡單、快速，同時檢測多種防腐劑的方法，對實(shí)現(xiàn)行業(yè)監(jiān)管意義重大。目前，測定防腐劑的方法主要有高效液相色譜法［3－6］、毛細(xì)管電泳法［7］、氣相色譜法［8－13］等。氣相色譜法由于成本低、操作簡單，成為近年來迅速發(fā)展的檢測技術(shù)，也得到了越來越廣泛的應(yīng)用，但目前氣相色譜法測定的防腐劑種類少，分離時間過長，如有采用毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定食品中8種防腐劑的時間達(dá)20分鐘以上［14］。本研究采用毛細(xì)管氣相色譜，對實(shí)際樣品進(jìn)行超聲和固相萃取處理，利用色譜升溫程序能夠在8min內(nèi)分離和檢測出9種食品中常見的防腐劑（山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸和6種尼泊金酯類）。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器

GC－2010氣相色譜儀（日本島津）;GHL－300氫氣發(fā)生器、GNB－300氮?dú)獍l(fā)生器和GAX－2000空氣發(fā)生器（北京匯佳精儀公司）;12管固相萃取儀（迪馬公司）;Milli Q超純水儀;毛細(xì)管柱: Rtx－1型，柱型15 m×0.53 mm i.d.×1.5 μm。1.1.2試劑

山梨酸（99%）、苯甲酸（97%）、脫氫乙酸（98%）、對羥基苯甲酸甲酯（99%）、對羥基苯甲酸乙酯（99%）、對羥基苯甲酸丙酯（99%）標(biāo)準(zhǔn)品均為分析純（Aldrich Chemical Company.Inc.USA）;對羥基苯甲酸異丙酯（99%）、對羥基苯甲酸異丁酯（99%）、對羥基苯甲酸丁酯標(biāo)準(zhǔn)品（99%）均為分析純（Tokyo Kasei Kogyo Co.，Ltd.Japan）;乙醇為色譜純（Honeywell International Inc.USA）;實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 樣品的前處理與凈化

每種樣品稱取5 g，用鹽酸調(diào)節(jié)至樣液pH值為4，超聲30 min，用水定容至25 mL;取C18固相萃取小柱加3 mL甲醇活化，再加3 mL水平衡小柱，然后取經(jīng)上述步驟處理過的樣品清液10 mL，以1.0 mL·min－1流速通過萃取柱，用3 mL超純水清洗萃取柱，棄去清洗液。最后用3 mL乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，供氣相色譜分析。

1.3 氣相色譜條件

進(jìn)樣口溫度為220℃;檢測器溫度為290℃;載氣流速為10 mL·min－1;柱溫:起始100℃，以20℃·min－1升至150℃，保持1 min;再以10℃· min－1升至190℃，保持1 min;再以50℃·min－1升至280℃，保持1 min。不分流進(jìn)樣方式，進(jìn)樣量為1 μL。9種防腐劑的峰譜如圖1。

圖1 9種防腐劑標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 SPE柱的選擇和洗脫條件的優(yōu)化

對于醬油和陳醋樣品，用液液萃取容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，使用固相萃取技術(shù)可以防止乳化。選擇6種固相萃取小柱，分別測定其對9種防腐劑的回收率，通過比較發(fā)現(xiàn)，CleanertTM C18小柱總體回收率最高。

固相萃取中，使用的洗脫劑的pH值不同，樣品回收也會受到影響。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，pH值為4時回收最好。為了進(jìn)一步提高固相萃取的效果，還對上樣和洗脫時溶液的流速進(jìn)行了優(yōu)化，最后確定流速為1.0 mL·min－1，既可在較短時間內(nèi)將樣品溶液通過萃取柱，又可保證被分析組分不受損失。

2.2 定性與定量測定

對9種防腐劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和實(shí)際樣品進(jìn)行分析，通過對照保留時間，并經(jīng)過添加實(shí)驗(yàn)增加峰高的方法對9種防腐劑的色譜峰進(jìn)行定性。

氣相色譜定量分析采用外標(biāo)峰面積法，在確定的最優(yōu)氣相色譜條件下，對質(zhì)量濃度分別為100，80，60，40，20，10 μg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，經(jīng)多次測量后取平均值，得出幾種防腐劑的擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線見表1。

表1 9種防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)

2.3 精密度、回收率和檢測限

取5種食醋樣品，按每克添加100 μg標(biāo)準(zhǔn)品測定防腐劑的回收率，每個樣品測定5次。用相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD表示精密度，9種防腐劑分別小于4.10%、3.54%、3.24%、1.25%、3.20%、2.42%、1.87%、2.89%、3.20%。樣品的回收率結(jié)果見表2，介于90.72%～109.43%。以基線噪聲的3倍作為檢出限，9種防腐劑的質(zhì)量濃度分別為0.343，0.272，0.504，0.332，0.317，0.292，0.299，0.282，0.286 μg·mL－1。

表2 9種防腐劑的食醋添加回收率%

2.4 實(shí)際樣品測定

從超市中選購5種常見醬油進(jìn)行測定，每種樣品稱取5 g，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值為4，超聲30 min，用水定容至25 mL;C18柱3 mL甲醇活化，3 mL水平衡后，取處理過的樣液10 mL，以1.0 mL·min－1流速過柱，3 mL超純水清洗，最后用3 mL乙醇洗脫，對洗脫液進(jìn)行氣相色譜測定。其防腐劑的測定結(jié)果見表3，每種樣品中都含有多種防腐劑，但含量均未超過GB2760規(guī)定的國家標(biāo)準(zhǔn)。

表3 5種醬油樣品中防腐劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)μg·g－1

3 結(jié)論

研究表明，對于具有復(fù)雜基質(zhì)的調(diào)味品樣品，采用超聲、稀釋、調(diào)節(jié)pH值和固相萃取凈化，能更有效地富集待檢物。對于寬沸程樣品，采用程序升溫，可使不同沸點(diǎn)的組分在適當(dāng)?shù)臏囟认碌玫椒蛛x，提高柱效，縮短分離時間。本研究中9種防腐劑在8 min內(nèi)就得到了很好的分離。該方法快速、簡單，能夠很好地滿足日常食品中多種防腐劑的測定要求。

［1］劉秀梅，高鶴娟.食品中有害物質(zhì)及其防治［M］.2版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2004:142－144.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部、中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 2760－2007食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

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Determination of Nine kinds of Preservatives in Condiment by SPE－GC

HAI Huaa，LAN Xia，LI Guang－h(huán)aob
（a.Department of Life Sscience;b.Modern Educational Technology Center，Dalian Nationalities University，Dalian Liaoning 116605，China）

A simple，rapid，and accurate method was presented for the separation and determination of the 9 kinds of antiseptic（sorbic acid，benzoic acid，dehydroacetic acid and 6 kinds of p－h(huán)ydroxybenzoate）in the condiment by using a solid phase extraction following gas chromatography.The samples were purified with C18 solid phase extraction columns.Then we used the GC method for measurement and external standard method for quantitative.The 9 kinds of antiseptic show good linear at the range from 0.10×10－4to 1.00×10－4g·mL－1and the linear correlation coefficient is between 0.9916 and 0.9987.In the concentration 100μg·g－1，the recovery was 90.72%～109.43%and the relative standard deviation is 1.25%～4.10%.This simple，rapid method was suitable for the determination of preservatives in the condiment，thus it can meet inspection requirements of a variety of preservatives in food.

preservatives;condiment;SPE;GC

0657

A

1009－315X（2011）03－0253－03

2010－10－26;最后

2011－03－30

海華（1977－），女，遼寧營口人，講師，主要從事食品分析研究。

李光浩（1953－），男，遼寧鐵嶺人，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事環(huán)境檢測與評價研究，E－mail:lghao@dlnu.edu.cn。

（責(zé)任編輯 鄒永紅）