劉冬梅，蔣亦秀，張優(yōu)拉，黃池清，付學峰

（浙江省金華市第五醫(yī)院，金華321000）

許多基礎和臨床研究表明HSP60的高表達或異位表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和生物學行為有密切的關系[1]，而國內(nèi)外關于其在皮膚腫瘤中的表達及意義尚未見報道。我們采用免疫組化EnVision兩步法，觀察近年來在我科保存的鱗狀細胞癌（SCC）,鮑溫丘疹?。˙P），日光性角化?。ˋK）的病理標本中HSP60的陽性率。并比較其陽性率，以探討其在SCC、BP、AK中的臨床意義。以發(fā)現(xiàn)HSP60在SCC、BP、AK病中的臨床意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機收集2002年—2009年我科門診病人SCC、BP、AK病各50例，其中的脫片和折片的標本被排除在外。結果SCC40例，男20例，女20例，低分化3例，中高分化37例，平均年齡70.59歲；BP 47例，其中男27例，女20例，平均年齡39.43歲；AK 47例，其中男25例，女22例，平均年齡68.23歲。腫瘤手術邊緣正常組織為對照。所有病例均經(jīng)病理診斷證實。標本經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚5μm，常規(guī)HE染色。

1.2 方法 采用免疫組織化學Envision兩步法。切片常規(guī)脫蠟、水化；加入按1∶100稀釋的一抗兔抗HSP60多克隆抗體（武漢市博士得），4℃過夜；加入二抗（福州邁新生物技術開發(fā)有限公司），室溫孵育30 min；DAB顯色，蘇木素復染，光鏡觀察。用已知陽性的切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷 HSP60陽性結果判斷：細胞漿出現(xiàn)棕黃色染色為陽性細胞，計數(shù)20個高倍視野的陽性細胞。根據(jù)陽性細胞百分率分為：陰性（-）為陽性細胞數(shù)<5%；陽性(+)為陽性細胞數(shù)6%～30%；中等強度陽性(++)為陽性細胞數(shù)31%～60%；強陽性(+++)為陽性細胞數(shù)>60%。以中等強度陽性和強陽性為過表達的病例。

1.4 統(tǒng)計學處理 把課題組成員讀片的結果取平均值。由于資料不能滿足正態(tài)性與方差齊性的要求，用秩和檢驗分析各組間的統(tǒng)計學差別（計算Z值），兩兩之間比較用秩變換分析，即先排秩后，再用方差分析中的SNK分析。統(tǒng)計運算在SPSS13.0 for windows軟件上進行，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義標準。

2 結果

2.1 病理組織形態(tài) 選取組織完整的標本進行觀察和分析，經(jīng)篩除后的標本例數(shù)詳見表1。光鏡下把皮膚SCC分為：高分化SCC、低分化SCC。

2.2 HSP60在SCC、BP、AK病表達強度與臨床病理特征 HSP60在正常皮膚和三種皮膚腫瘤中的陽性表達產(chǎn)物均位于細胞質(zhì)，為淺黃色至棕色均質(zhì)粉狀或顆粒狀物質(zhì)，陽性細胞呈點狀、灶性以至彌漫性分布，在皮膚SCC和AK、BP中HSP60的表達從角質(zhì)層到基底層成逐漸增強的趨勢，基底細胞呈強陽性表達，在SCC中分化較好的細胞、靠近角珠和角質(zhì)層的部分不表達HSP60，異形程度越高的細胞HSP60表達越多。見圖1～4。

2.3 HSP60在SCC、BP、AK病中表達強度比較 HSP60在AK、BP、SCC，組間兩兩比較用秩變換分析，即排秩后用方差分析結果為AK=SCC=BP（P>0.05），即HSP60在AK組與SCC組、BP組與SCC組和AK組、BP組間比較沒有統(tǒng)計學意義。SCC低分化和高分化組間Z值為0.929，P=0.372>0.05，因此HSP60在低分化的SCC組和高分化組的陽性表達比較沒有統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 HSP60在SCC、BP、AK病中表達強度

2.4 HSP60在SCC、BP、AK中表達陽性率與正常對照組比較 HSP60在AK、BP、SCC組的陽性表達率均高于正常組，其Z值分別為：-2.78，-4.549，-2.90；其 P 值分別為：0.005，0.000，0.003，P≤0.005有統(tǒng)計學意義。見表2。

表2 HSP60在SCC、BP、AK及其正常對照組中陽性率的比較

3 討論

熱休克蛋白（heat shoek protein，HSP），又稱應激蛋白（stess protein，SP）有高度保守的氨基酸序列及其編碼基因的蛋白質(zhì)。在正常生理條件下，如細胞的增生和分化，胚胎的生長和發(fā)育、激素的刺激等，HPS即呈基礎表達，于應激狀態(tài)下在細胞內(nèi)合成顯著增加。已發(fā)現(xiàn)HSP60在癌的發(fā)生機制上起重要作用，還與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移相關，細胞表達增強，且在癌的越早期陽性表達率越高[2，3]。本研究顯示HSP60在SCC、BP、AK病表達強度均高于正常組。說明HSP60可能與此三種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關系。已知HSP60與惡性腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和預后有關[3-5]，本實驗也可以看出異形程度越高的細胞HSP60表達越多，而在SCC中分化較好的細胞，靠近角化珠和角質(zhì)層的部分不表達HSP60，由于標本中低分化的數(shù)目比較少，沒有統(tǒng)計學意義，因此HSP60在皮膚SCC中是否與角質(zhì)形成細胞的分化程度有關還有待進一步研究。

（鳴謝：中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所病理科曾學思教授給予的幫助和指導！）

[1]王少彬，陳俊輝，陳理明.食管SCC中熱休克蛋白10和60的表達及其意義[J].國際腫瘤學雜志,2006,33（2）：156.

[2]Cappello F.60kDa Chaperonin (hsp60)is overexpressed during colorectal carcinogenesis[J].Eur J Histochem,2003,47：105-109.

[3]Cappello F，Bellafiore M，Palma A，et al.Expression of 60 kd heat shock protein increases during carcinogenesis in the uterine exocervix[J].Pathobiology,2002-2003,70：83-88.

[4]Cappello F，DiStefano A，D'Anna SE,et al.Immunopositivity of heat shock protein 60 as a biomarker of bronchial carcinogenesis[J].Lancet Oncol，2005，6：816.

[5]曹智，馬駿，袁文俊，等.熱休克蛋白60與細胞凋亡[J].生理科學進展，2008，39(3):267-270.