謝靜 楊宏圖 常翠 張娓

玄冬顆粒澄清工藝的研究

謝靜 楊宏圖 常翠 張娓

目的澄清劑用于玄冬顆粒的澄清工藝。方法比較了澄清劑與乙醇對(duì)口服液的主要成分含量的差異。結(jié)果澄清劑用于中藥提取液的澄清在主要成分含量較乙醇有所提高。結(jié)論在中藥提取液的澄清工藝中可用澄清劑替代乙醇。

澄清劑;工藝;含量測(cè)定

玄冬顆粒由金銀花、玄參、麥冬、天冬、甘草等中藥組成，是在臨床應(yīng)用多年的醫(yī)院制劑。玄冬顆粒具有清熱養(yǎng)陰，解毒散結(jié)的功效。臨床主要用于慢性咽喉炎及咽喉干痛等癥。通常工藝采用水提醇沉工藝制備。本實(shí)驗(yàn)分別用ZTC1+1天然澄清劑、乙醇對(duì)其水提液作澄清處理，以處方中主藥金銀花所含成分綠原酸為指標(biāo)，進(jìn)行含量比較，并以正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選ZTC1+1天然澄清劑的最佳澄清工藝。

1 藥品、試劑和儀器

中藥材購(gòu)自深圳市藥材公司;綠原酸對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;ZTC1+1天然澄清劑購(gòu)于天津正天成澄清技術(shù)有限公司;所用試劑均為AR。

儀器:LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)，SPD-10AV紫外-可見光分光光度檢測(cè)器(日本島津)，色譜柱:Sperisorb C185 μm 4.6 mm×250 mm(大連化物所)，Kromasil C18柱(F4.6×200 mm，5 mm)。

2 綠原酸的含量測(cè)定方法［1］

2.1 色譜條件 色譜柱為WondasiC18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相:甲醇-水-冰醋酸(20:80:1);流速為1.0 ml/ min;柱溫:25℃;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):327 nm;進(jìn)樣量:20 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取綠原酸對(duì)照品9.25 mg置于100 ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，制成1 ml含92.5 μg的綠原酸貯備液，搖勻，精密量取上述溶液2～5 ml量瓶中用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液(2℃～8℃保存)。

2.2.2 供試品溶液 精密量取玄參藥液供試品2～25 ml容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按照玄參藥液的制備工藝制備不含金銀花的樣品，按2.2.2項(xiàng)下的方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密量取綠原酸對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0、2.0、4.0、8.0、16 ml分別至25 ml容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，再分別精密吸取該對(duì)照品溶液各20 μl，按2.1色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定綠原酸峰面積。以綠原酸進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y= 3045283X-15789，r=0.9993，線性范圍:0.074～1.184 μg。

2.4 精密度考察 取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值的RSD為0.4%(n=6)，表明精密度良好。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法取樣品6份，精密加入綠原酸對(duì)照品溶液適量，測(cè)定峰面積積分值的RSD為0.8%(n =6)，表明重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)同一供試品溶液分別在0、2.5、5、8、11、15、16 h進(jìn)樣測(cè)定，其峰面積積分值的RSD為0.4%。從結(jié)果可以看出，供試品溶液在室溫下放置16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 空白試驗(yàn) 以缺金銀花藥材的空白樣品按同樣條件提取及測(cè)定，結(jié)果在與綠原酸相同位置無(wú)色譜峰出現(xiàn)。表明陰性對(duì)照試驗(yàn)對(duì)本品的測(cè)定無(wú)干擾。

2.8 樣品含量測(cè)定 分別吸取樣品，按以“2.2.2”方法制備，分別吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20 μl注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。

3 不同澄清液澄清工藝的比較

取處方水提液10 ml(相當(dāng)含金銀花2 g)各3份，按下述方法分別處理:1號(hào)工藝:40%乙醇沉淀，過(guò)濾，濾液水浴揮干;2號(hào)工藝:加熱至60℃，按ZTC1+1天然澄清劑溶液5B: 3A的比例先加入組分B攪拌使其均勻分散再加入組分A沉淀，過(guò)濾，濾液水浴揮干;3號(hào)工藝:未經(jīng)任何澄清處理，直接水浴揮干。分別測(cè)定綠原酸含量，結(jié)果為1號(hào)為471.23 μg/ ml、2號(hào)為528.36 μg/ml、3號(hào)為563.25 μg/ml。

4 均勻設(shè)計(jì)優(yōu)選ZTC1+1天然澄清劑最佳澄清工藝

4.1 均勻設(shè)計(jì)因素和結(jié)果 根據(jù)ZTC1+1天然澄清劑本身的特點(diǎn)以及實(shí)際應(yīng)用的情況，確定影響澄清效果的相關(guān)因素: ZTC1+1天然澄清劑加入量(A)、藥液濃度(B)、藥液的pH值(C)、綠原酸含量(Y)，使用均勻設(shè)計(jì)表U7(76)，因素和結(jié)果見表1。4

表1 均勻試驗(yàn)因素和結(jié)果

.2 結(jié)果分析 在計(jì)算機(jī)上用均勻設(shè)計(jì)程序軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，引入或剔除自變量的F臨界值設(shè)定為0.1，可得如下逐步回歸方程:Y=316.34+59.50A+115.26B+23.82C-15.8A2-32.57B2(r=0.915，F(xiàn)=54.72，n=7)查表，得F1-0.01 (2，6)=10.9，F(xiàn)＞F1-0.01(2，6)，故回歸方程具有顯著意義，置信度達(dá)99%以上。

通過(guò)對(duì)ZTC1+1天然澄清劑加入量(A)、藥液濃度(B)、藥液的pH值(C)3個(gè)因素方差分析，表明天然澄清劑加入量(A)、藥液濃度(B)有顯著性差異(P＜0.05)、藥液的pH值(C)無(wú)顯著性差異(P＞0.1)。計(jì)算機(jī)處理所得各因素最優(yōu)化值為A=1.83，B=1.5。綜合上述分析并結(jié)合實(shí)際經(jīng)驗(yàn)，確定澄清工藝的最佳條件為:加入1.83 g ZTC1+1天然澄清劑量、藥液濃度為1.5 g/ml、藥液的pH值為5.0。

按優(yōu)化條件安排試驗(yàn)，所得質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果在理論預(yù)報(bào)范圍內(nèi)，說(shuō)明回歸方程是可信的，預(yù)測(cè)的結(jié)果是準(zhǔn)確的。

5 討論

5.1 ZTC1+1天然澄清劑是一種新型食品添加劑，它具有安全無(wú)毒、不殘留、不引入異味等優(yōu)點(diǎn)［2］。由A、B兩種組分組成，兩組分依次加入，先與藥液中的可溶性大分子形成復(fù)合物，進(jìn)而形成絮狀物沉淀下來(lái)，以達(dá)到去除雜質(zhì)的目的。

5.2 用ZTC1+1天然澄清劑除雜質(zhì)較乙醇法能夠提高有效成分的含量，從而提高了產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，使綠原酸含量提高了15%左右。

5.3 天然澄清劑的使用，可縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量，值得推廣。

［1］彭波．高效液相色譜法測(cè)定抗破傷風(fēng)合劑中綠原酸的含量．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(22):1970-1971．

［2］趙軍，沈季元，李獻(xiàn)林，等．芍丹乙肝口服液澄清工藝的研究．中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2004，21(5):411-413．

Study on Clearing Process in Jixueteng Penyan Keli

XIE Jing，YANG Hong-tu，CHANG Cui，et al．Depart- ment of Pharmacy，the Second Clinical Medicin College of Jinan University，and the People’s Hospital of Shenzhen City．Shenzhen 518020，China

ObjectiveTo use clarification agent in clearing process of Xuan Dong Keli．Methods To compare clarification agent with alcohol by measuring quantitative analyses of paeoniflorin．ResultsIt was shown that main components quantity of koufuye using calrification agent were higher than that alcohol did．Conclusion Clarification agent can be used to clear herbal extract instead of alcohol．

Clarificatin agent;Preparation technology;Content determination

518020 暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院/深圳市人民醫(yī)院藥學(xué)部