丘志春 羅文匯 李養(yǎng)學(xué)

大桑菊飲合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

丘志春 羅文匯 李養(yǎng)學(xué)

目的 建立大桑菊飲合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)方中桑葉、薄荷、連翹和浙貝母藥材進(jìn)行了色譜鑒別;采用高效液相法測(cè)定黃芩中黃芩苷的含量。結(jié)果 薄層鑒別的色譜斑點(diǎn)清晰,陰性對(duì)照無干擾,黃芩苷的含量測(cè)定平均回收率為97.71%,RSD(n=6)為0.69%,在104-1040ng范圍內(nèi)呈線性關(guān)系相關(guān)系數(shù)。結(jié)論 研究的方法可有效地控制大桑菊飲合劑的質(zhì)量。

大桑菊飲合劑;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);黃芩苷;高效液相色譜法

1 儀器與試藥

1.1 儀器 CAMAG Auto matic TLC Sampler 4全自動(dòng)薄層點(diǎn)樣儀(瑞士);CAMAG Reprostar薄層成像系統(tǒng)(瑞士);硅膠G薄層板(浙江);Agilent 1200高效液相色譜儀(美國);M ettler-Toledo XS205DU電子分析天平(瑞士);AgilentTC C18(4.6× 250mm,5μm)色譜柱;KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山)。

1.2 試藥 桑葉對(duì)照藥材(批號(hào):121123-200603)、薄荷腦對(duì)照品(批號(hào):110728-200506)、連翹對(duì)照藥材(批號(hào):120908-200613)、浙貝母對(duì)照藥材(批號(hào):120972-200404)、黃芩苷對(duì)照品(批號(hào):110715-200815),購于中國藥品生物制品檢定所。大桑菊飲合劑由廣東省第二中醫(yī)院制劑室提供。甲醇為進(jìn)口色譜純,水為雙蒸水,其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 桑葉的薄層色譜鑒別[1]取本品15m,l蒸干至稠膏狀,加適量硅藻土分散,再加乙醇30 m,l超聲處理20 min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状? m l使溶解,作為供試品溶液。另取桑葉對(duì)照藥材2 g,加乙醇30m,l同法制成對(duì)照藥材溶液。再按處方比例,取缺桑葉的其他各味藥,按制備工藝加工制成陰性樣品,按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各5 μ,l分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,使成條帶狀,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶1)的上層溶液為展開劑,置展開劑預(yù)飽和10 m in的展開缸內(nèi),展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜在與藥材對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見圖1)。

2.2 薄荷的薄層色譜鑒別[2]取本品20 m,l加石油醚(60～90℃)10 ml萃取,分取石油醚液,作為供試品溶液。另取薄荷腦對(duì)照品,加石油醚(60～90℃)制成每1 m l含2 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各15 μ,l分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯(4:0.1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以香草醛硫酸試液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)(見圖2)。

2.3 連翹的薄層色譜鑒別[3]取本品20m,l蒸干至稠膏狀,加適量硅藻土分散,再加甲醇30 m l加熱回流1 h,濾過,濾液,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?m l使溶解,作為供試品溶液。另取連翹對(duì)照藥材1 g,加甲醇30m,l同法制成對(duì)照藥材溶液。再按處方比例,取缺連翹的其他各味藥,按制備工藝加工制成陰性樣品,按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各4 μ,l分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸-水(4∶5∶6∶1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇試液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)(見圖3)。

2.4 浙貝母的薄層色譜鑒別[4]取本品20m,l加濃氨試液5m l與三氯甲烷20m,l萃取2次,分取三氯甲烷液,蒸干,殘?jiān)尤燃淄?m l使溶解,作為供試品溶液。另取浙貝母對(duì)照藥材2 g,加濃氨試液5 ml與三氯甲烷20m,l超聲處理15 min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)尤燃淄?m l使溶解,作為對(duì)照藥材溶液。再按處方比例,取缺浙貝母的其他各味藥,按制備工藝加工制成陰性樣品,按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄ⅥB)試驗(yàn),吸取上述溶液各5 μ,l分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(17:2:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)(見圖4)。

3 含量測(cè)定[5]

3.1 色譜條件 色譜柱:Agilent TC C18(4.6×250 mm, 5μm);流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸溶液(47:53);流速:1.0 m l/ m in;柱溫:35℃;檢測(cè)波長:280nm。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品6.50 mg,置25m l量瓶中,加甲醇使溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(每1m l中含芍藥苷0.26mg)。

3.3 供試品溶液的制備 取本品20m,l蒸至稠膏狀,加硅藻土分散,再水浴蒸干,加70%乙醇40m,l加熱加流3 h,放冷,濾過,濾液置100 ml量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。精密量取1 m,l置10m l量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。

3.4 供試品陰性對(duì)照溶液的制備 處方中除去黃芩按制劑工藝制備,制得供試品陰性對(duì)照品,按3.3項(xiàng)下供試品溶液制備的方法制得供試品陰性對(duì)照溶液。

3.5 線性范圍的考察 精密吸取對(duì)照品溶液(黃芩苷0.26 mg/ml)1、2、5、8、10m l于25 m l量瓶中,加甲醇至刻度,得濃度分別為10.4μg/m l、20.8 μg/m l、52.0 μg/m l、83.2 μg/m l、104.0μg/m l的芍藥苷對(duì)照品溶液,分別精密吸取上述各濃度的對(duì)照品溶液各10 μ l進(jìn)行色譜測(cè)定,按上述色譜條件測(cè)定峰面積,并以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Y=1892.32681X+432.53204,r=0.99994。

表明黃芩苷在104-1040ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(黃芩苷52.0 μg/ ml)10 μ l重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)得峰面積積分值。結(jié)果RSD為1.26%。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μ,l按上述色譜條件測(cè)定5次,每次間隔2 h,結(jié)果表明8 h內(nèi)穩(wěn)定,RSD為1.43%。

3.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 按擬定的含量測(cè)定方法,對(duì)同一供試品(批號(hào):20090701)制備供試品溶液,測(cè)得峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果RSD為1.15%。

3.9 回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品(批號(hào):20090701),分別精密加入一定量的黃芩苷對(duì)照品,按供試品制備與測(cè)定方法,按上述色譜條件,平行做6組。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷回收率測(cè)定結(jié)果

3.1 0樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ,l按上述色譜條件測(cè)定。對(duì)照品和供試品的色譜圖見圖5。結(jié)果見表2。的。本文在建立了桑葉、薄荷、連翹和浙貝母的TLC鑒別及主藥中黃芩苷的含量測(cè)定方法。從而更好地控制該藥品的質(zhì)量,保證臨床療效。

表2 供試品含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果,考慮到藥材的來源,以及制劑生產(chǎn)、貯藏等素,故暫定本品每ml大桑菊飲合劑含黃芩苷(C21H1811)計(jì),不得少于0.7mg。

4 討論

對(duì)于中藥復(fù)方制劑的鑒別,應(yīng)根據(jù)其特點(diǎn),尋找簡便、快速,并具有較強(qiáng)專屬性的方法,才能起到有效控制質(zhì)量的目

[1] 孫蓮,胡爾西丹,常軍民,等．薄層-紫外分光光度法測(cè)定桑葉中的綠原酸．時(shí)珍國醫(yī)國藥,2006,17(7):1199-1201．

[2] 梁威,劉元,文志云,等．TLC法定性鑒別清火片中3味中藥．中國民族民間醫(yī)藥,2009,(15):10-11．

[3] 王進(jìn)．銀連感冒合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)．中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育, 2009,7(10):209-210．

[4] 陳凌亞,周曉芳,翁琳,等．薄層色譜法鑒別中肺合劑的主要成分．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2005,24(10):945-946．

[5] 國家藥典委員會(huì)．中國藥典．北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:211．

Study on the Quality Specification ofDasangjuyinhejimixtue

QIU Zhi-chun,LUO Wen-hui,LI Yang-xue. Second ChineseM edicineH ospital of Guangdong Province,Guangzhou510095,China

Objective To establish the quality specification of Dasangjuyinhejimixture.M ethods The TLC technology wasused to identify Folium mor,i Herbamenthae,Fructus forsythiae andBulbus fritillariae thunbergii.The contetofBaicalinⅠinDasangjuyinhejim ixturewasdeter m ined byHPLC.Results TLC spots obtainedwere fairly clear and the blank test showed no interference.The calibration curveswere linear in the range of104-1040ng for BaicalinⅠ.The average recovery(n=6)was 97.71%andRSD was 0.69%.Conclusion This standard is effective for the quality control ofDasangjuyinhejimixture.

Dasangjuyinhejim ixture;Quality standard;BaicalinⅠ;HPLC

510095廣東省第二中醫(yī)院(丘志春);廣東省中醫(yī)研究所(羅文匯 李養(yǎng)學(xué))

大桑菊飲合劑是由桑葉、菊花、薄荷、連翹、浙貝母和黃芩等藥材組成;具有疏風(fēng)解表,清熱宣肺,化痰止咳等功效。用于風(fēng)熱感冒、咳嗽、肺炎喘嗽等初起見咳嗽、流涕、痰黃、咽痛、發(fā)熱等癥療效確切。

為了更好控制大桑菊飲合劑的質(zhì)量,本研究采用薄層色譜法對(duì)制劑中桑葉、薄荷、連翹和浙貝母進(jìn)行了定性鑒別;采用高效液相色譜法對(duì)制劑的黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定,方法簡便,重復(fù)性好,可作為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。