陳博

（廣東醫(yī)學(xué)院東莞校區(qū)生理科學(xué)實(shí)驗(yàn)室，廣東東莞 523808）

重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是一種既有胰腺本身病變，又極易并發(fā)遠(yuǎn)隔臟器損害的急腹癥，其中肺損傷是SAP早期常見(jiàn)的并發(fā)癥和死亡原因，其死亡率高達(dá)50%，但其預(yù)防和治療缺少有效的藥物，因而一直是臨床重點(diǎn)難題之一[1]。葛根素對(duì)大鼠SAP有保護(hù)作用[2]，對(duì)大鼠急性肺損傷也有保護(hù)作用[3]，但對(duì)SAP所致的肺損傷有無(wú)作用報(bào)道較少。本研究旨在觀察葛根素對(duì)SAP肺損傷大鼠的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

健康Wistar大鼠，由廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；?；悄懰徕c、卵磷脂為Sigma公司產(chǎn)品；葛根素注射液（Puerarin Injection，PI）為浙江康恩貝制藥股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格 2 ml/0.1 g，批號(hào) 051201；腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）的 ELISA 試劑盒為 TPI公司產(chǎn)品；Anthos 2010型酶標(biāo)儀。

1.2 大鼠SAP模型的建立

大鼠術(shù)前12 h禁食、禁水，以20%氨基甲酸乙酯1 mg/kg腹腔注射麻醉，無(wú)菌條件下經(jīng)腹壁正中切口入腹，除假手術(shù)組只翻動(dòng)胰腺后關(guān)腹外，其余兩組均在主胰管內(nèi)逆行插管，注入5%?；悄懰徕c10 ml/g后結(jié)扎主胰管，縫合腹壁。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（10只）、模型組（10只）、葛根素組（10只）。假手術(shù)組和模型組于造模前3 h分別經(jīng)股靜脈注入生理鹽水10 ml/kg，葛根素組在造模前3 h經(jīng)股靜脈注射葛根素10 ml/kg，于術(shù)后4 h頸動(dòng)脈取血，處死大鼠，測(cè)血清磷脂酶 A2（PLA2）、TNF-α、IL-1、IL-6；取左肺，一部分勻漿，測(cè) PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6；一部分經(jīng) 10%甲醛固定做病理組織學(xué)檢查。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

PLA2的測(cè)定采用酸滴定法[4-5]。TNF-α、IL-1、IL-6 測(cè)定采用ELISA法，酶標(biāo)儀檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組血清指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

模型組大鼠血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 水平均顯著升高，與假手術(shù)組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；而應(yīng)用葛根素后可顯著降低血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 水平，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結(jié)果（±s）Tab.1 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in serum of each group(±s)

表1 各組血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結(jié)果（±s）Tab.1 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in serum of each group(±s)

與假手術(shù)組比較，※P<0.01；與模型組比較，△P<0.05Compared with sham-operation group,※P<0.01;compared with model group,△P<0.05

假手術(shù)組模型組葛根素組組別 PLA2（U）55.4±14.7104.2±17.5※64.7±19.4△TNF-α（pg/ml）31.4±6.7134.7±15.1※67.3±18.7△IL-1（μg/L）0.28±0.070.92±0.13※0.54±0.18△IL-6（pg/ml）92.2±17.8285.4±46.8※147.6±34.8△

2.2 各組肺組織中血清指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

模型組大鼠肺組織中 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 水平均顯著升高，與假手術(shù)組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；而應(yīng)用葛根素后可顯著降低血清 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6水平，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組肺組織中 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結(jié)果（±s）Tab.2 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in lung tissues of each group(±s)

表2 各組肺組織中 PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6 結(jié)果（±s）Tab.2 The results of PLA2,TNF-α,IL-1,IL-6 in lung tissues of each group(±s)

與假手術(shù)組比較，※P<0.01；與模型組比較，△P<0.05Compared with sham-operation group,※P<0.01;compared with model group,△P<0.05

假手術(shù)組模型組葛根素組組別 PLA2（U/g）37.5±7.658.7±11.4※42.4±15.2△TNF-α（pg/mg）37.5±7.658.7±11.4※42.4±15.2△IL-1（μg/g）0.18±0.090.72±0.17※0.52±0.24△IL-6（pg/mg）67.8±16.8269.4±22.8※158.6±27.3△

2.3 光鏡觀察結(jié)果

胰腺:模型組胰腺可見(jiàn)明顯出血，大量中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤(rùn)，大片壞死，壞死較為徹底，腺泡小葉結(jié)構(gòu)消失。葛根素組胰小葉壞死輕微，小葉結(jié)構(gòu)完整，病變以腺泡細(xì)胞變性、白細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)水腫為主。假手術(shù)組胰腺結(jié)構(gòu)清晰，腺泡細(xì)胞無(wú)水腫，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)壞死及出血灶。

肺組織:模型組肺組織病變以廣泛肺泡出血、肺間隔增寬、肺間質(zhì)淤血、大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、支氣管腔內(nèi)有滲出物、水腫明顯為主。葛根素組肺組織肺泡出血輕微，肺間質(zhì)無(wú)明顯淤血，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減輕。假手術(shù)組肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔內(nèi)未見(jiàn)水腫液，間質(zhì)血管無(wú)擴(kuò)張，無(wú)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。

3 討論

雖然SAP肺損傷的機(jī)制至今尚未完全清楚，但胰腺酶原的異位激活引發(fā)肺損傷的學(xué)說(shuō)已得到公認(rèn)。在眾多胰酶中，PLA2與SAP胰腺的自身消化、休克、多臟器功能不全綜合征（MODS）等密切相關(guān)[5]。SAP時(shí)，血中PLA2活性升高最為明顯，其活性升高越顯著，肺損傷發(fā)生率越高[6]。肺組織中存在PLA2的多種靶細(xì)胞，如Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞等，這些細(xì)胞在PLA2的激活下，大量產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，而細(xì)胞因子在SAP肺損傷的發(fā)病中起著關(guān)鍵性的作用，主要的細(xì)胞因子有TNF-α、IL-1、IL-6等，其中TNF-α產(chǎn)生較早[7]。TNF-α主要產(chǎn)生于被激活的巨噬細(xì)胞，是SAP發(fā)病后較早產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子，起核心作用[8]。TNF-α可激活中性粒細(xì)胞，促進(jìn)多種炎癥介質(zhì)的釋放，在SAP的發(fā)病及其并發(fā)癥如肺損傷中起重要作用，其升高的程度與胰腺炎癥損傷程度直接相關(guān)[9]。TNF-α還能進(jìn)一步誘導(dǎo)SAP肺損傷的重要指標(biāo)IL-6的產(chǎn)生，從而產(chǎn)生強(qiáng)大的網(wǎng)絡(luò)級(jí)聯(lián)式反應(yīng)，影響SAP肺損傷的進(jìn)程[10]。IL-6的特點(diǎn)是調(diào)節(jié)急性期蛋白的產(chǎn)生，能直接反映各類(lèi)損害的嚴(yán)重程度。SAP時(shí)血清IL-6水平明顯升高，其升高水平與胰腺炎的嚴(yán)重程度和并發(fā)癥的發(fā)生呈正相關(guān)[11]。

本實(shí)驗(yàn)中，模型組血清和肺組織中的PLA2、TNF-α、IL-1、IL-6均顯著升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），證明造模成功。

葛根素注射液是從豆科植物野葛的根中提取有效成分制成的注射液，主要成分為葛根異黃酮，具有改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、清除氧自由基等功能，主要用于心腦血管疾病的治療[12]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用PI對(duì)SAP肺損傷大鼠進(jìn)行治療，結(jié)果顯示，肺組織病理形態(tài)改善，血清和肺組織中PLA2活性下降，TNF-α、IL-1、IL-6水平顯著下降，因而認(rèn)為葛根素對(duì)SAP肺損傷有確切的保護(hù)作用。

綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果及葛根素的藥理作用可以認(rèn)為，葛根素通過(guò)抗氧化、抑制炎癥、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、抑制細(xì)胞凋亡、清除自由基、拮抗Ca2+通道、改善胰腺微循環(huán)等作用，使SAP肺損傷大鼠血清及肺組織TNF-α、IL-1、IL-6水平顯著降低，進(jìn)而減少相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)，減輕對(duì)肺組織的損傷。由此可見(jiàn)，葛根素是一種有效的保護(hù)SAP肺損傷的藥物，具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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