段玉雙 卜淑敏 楊少鋒 郝利科 王穎捷 陳永杰

首都體育學(xué)院（北京 100088）

絕經(jīng)后女性由于卵巢功能衰竭易發(fā)生肥胖，尤其是以腹部脂肪堆積為主。肥胖導(dǎo)致肝脂堆積，而脂肪肝是隱源性肝硬化的誘因，甚至可發(fā)展為肝癌［1］。目前防治絕經(jīng)性肥胖癥發(fā)生的主要方法有激素替代療法、限制飲食和運(yùn)動(dòng)，但激素替代療法可能增加患子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌等的風(fēng)險(xiǎn)［2］，限制飲食會(huì)影響肌肉等其它瘦組織的正常營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，甚至導(dǎo)致強(qiáng)烈饑餓感，不易堅(jiān)持。而運(yùn)動(dòng)因既能改善機(jī)體狀態(tài)，又無(wú)副作用而備受青睞。大鼠去卵巢后，進(jìn)食量增加而能量消耗減少，結(jié)果使體重、腹部脂肪和肝臟脂類(lèi)水平增加，是目前國(guó)內(nèi)外普遍使用的模擬絕經(jīng)性肥胖綜合癥的理想動(dòng)物模型［3，4］。有研究表明［5，6］，抗阻力運(yùn)動(dòng)和限制飲食聯(lián)合干預(yù)能顯著抑制去卵巢大鼠肝臟脂類(lèi)水平增加，但單獨(dú)運(yùn)動(dòng)能否抑制去卵巢大鼠肝臟脂肪堆積，目前尚無(wú)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用去卵巢肥胖大鼠模型［7］，觀(guān)察單獨(dú)進(jìn)行中等強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)對(duì)去卵巢大鼠肝臟甘油三酯（triglyeride，TG）和總膽固醇（total cholesterol，TC）含量的影響，為防治絕經(jīng)性肥胖癥及其相關(guān)疾病的發(fā)生提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器

17β-雌二醇，Sigma產(chǎn)品；水合氯醛注射液，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供；DSPT-202小動(dòng)物跑臺(tái)，杭州段氏制造廠(chǎng)生產(chǎn)；LG10-3A離心機(jī)，北京離心機(jī)廠(chǎng)；膽固醇、甘油三酯試劑盒，北京中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品；721分光光度計(jì)，上海光華光學(xué)儀器廠(chǎng)；JA2003天平，上品儀器公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)和分組

健康3月齡雌性SD大鼠 80只，體重230±10g。購(gòu)自并飼養(yǎng)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部［合格證號(hào)：SCKK（京）2006-0008］。適應(yīng)飼養(yǎng) 1周后，按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組（20只）和手術(shù)組（60只）。手術(shù)前兩組大鼠均禁食12～18h，腹腔注射水合氯醛（0.3m l/100g）麻醉，假手術(shù)組不切除卵巢，只將卵巢旁與卵巢等大的脂肪組織切除，手術(shù)組均從背部切除雙側(cè)卵巢?；謴?fù)1周后，按體重將手術(shù)組大鼠又隨機(jī)分為去卵巢靜止、去卵巢運(yùn)動(dòng)和雌激素3個(gè)組，每組20只。有12只大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中先后因手術(shù)感染而死亡，最后納入實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物數(shù)見(jiàn)表1。

1.3 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練安排和17β-雌二醇注射方案

跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練和17β-雌二醇配制及注射方案均參考我們前期研究并適當(dāng)調(diào)整［8］。手術(shù)后第2周，去卵巢運(yùn)動(dòng)組大鼠在小動(dòng)物跑臺(tái)上開(kāi)始適應(yīng)訓(xùn)練1周，跑速?gòu)牡?天的15min、0坡度逐漸增加到第5天的45min、5°坡度。正式運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案為跑速18m/min、時(shí)間45min、坡度5°，每周5次。雌激素組每周頸部皮下注射2次17β-雌二醇，每次注射劑量為25μg/kg體重。所有處理均在每天上午進(jìn)行。每周稱(chēng)體重1次，根據(jù)體重調(diào)整17β-雌二醇的注射劑量。假手術(shù)組和去卵巢靜止組每天只在籠中自由活動(dòng)。

1.4 標(biāo)本采集和處理

分別于去卵巢后7周和14周時(shí)各處死一半動(dòng)物。取材前大鼠均禁食12～14h，稱(chēng)體重后迅速剖開(kāi)腹腔，收集子宮和腹腔內(nèi)脂肪并稱(chēng)重。迅速將同一部位的一塊肝臟切成小塊分裝入Ependof離心管后－80℃冷凍保存。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

用精密天平稱(chēng)取適量的冷凍肝組織，加入0.9%生理鹽水勻漿制成10%的勻漿液。加入3.75倍體積的氯仿－甲醇混合液（2:1），混懸10min。再加入1.25倍的氯仿混合1min。離心（3000r/min）10min。棄上層液，收集下層液體，干燥。吹干后用甲醇定容，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)提供的實(shí)驗(yàn)步驟分別測(cè)定TG和TC含量，結(jié)果以每克肝組織中TC和TG的含量（mg/g）表示。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用One-Way ANOVA，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。

2 結(jié)果

2.1 體重和體脂

表1顯示，去卵巢后7周和14周時(shí)，去卵巢靜止組體重、體脂和體脂含量均顯著高于假手術(shù)組，而去卵巢運(yùn)動(dòng)組和雌激素組體重、體脂和體脂含量均顯著低于去卵巢靜止組。此外，去卵巢14周時(shí)，去卵巢運(yùn)動(dòng)組體重顯著高于雌激素組。

表1 各組大鼠體重和體脂含量比較

2.2 肝臟TC和TG

表2顯示，去卵巢后7周時(shí)，去卵巢靜止組TG含量顯著高于假手術(shù)組，TC含量無(wú)顯著變化，去卵巢運(yùn)動(dòng)組TC和TG含量顯著低于去卵巢靜止組，而雌激素組TG含量顯著低于去卵巢靜止組，TC含量無(wú)顯著變化。去卵巢后14周時(shí)，去卵巢靜止組TC和TG含量仍顯著高于假手術(shù)組，去卵巢運(yùn)動(dòng)組和雌激素組TC和TG含量均顯著低于去卵巢靜止組。

表2 各組大鼠肝臟TC和TG含量比較

3 討論

絕經(jīng)性肥胖是絕經(jīng)后婦女經(jīng)常面臨的一種代謝綜合癥，是由于體內(nèi)性激素水平減少，導(dǎo)致糖、脂肪代謝紊亂，使脂肪在體內(nèi)和肝臟堆積［1］。目前多采用去卵巢大鼠模型模擬絕經(jīng)后婦女肥胖的狀態(tài)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究［9，10］。本實(shí)驗(yàn)中，大鼠去卵巢7周時(shí)，肝臟TG顯著增加且一直持續(xù)到14周，此增加可被補(bǔ)充的外源性E2逆轉(zhuǎn)，此結(jié)果與Paquette等人［10］報(bào)道的結(jié)果相似，再次驗(yàn)證了去卵巢能誘導(dǎo)大鼠脂肪肝形成。

降低體重是目前治療肥胖患者肝脂紊亂和非酒精性脂肪肝疾病的常用方法。有氧運(yùn)動(dòng)能減肥這已是不爭(zhēng)的事實(shí)。本實(shí)驗(yàn)中，在跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)分別處理5周或12周時(shí)，去卵巢運(yùn)動(dòng)組體重和體脂含量均顯著低于去卵巢靜止組，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)能持續(xù)抑制由于E2減少而引起的體重增加和腹部脂肪堆積，這與我們先前報(bào)道的結(jié)果一致［7］。此外，雖然本實(shí)驗(yàn)中去卵巢運(yùn)動(dòng)組體重和體脂仍然顯著高于假手術(shù)組，但是體脂含量與假手術(shù)組相比沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明運(yùn)動(dòng)可以通過(guò)改善機(jī)體瘦組織和脂肪的比例，從而達(dá)到優(yōu)化機(jī)體體成分的效應(yīng)。相比之下，E2降低去卵巢大鼠體重的效果雖然大于運(yùn)動(dòng)，但其降低體脂含量的程度與運(yùn)動(dòng)相比沒(méi)有顯著差異，說(shuō)明E2在降低體脂含量的同時(shí)也降低了瘦體重量。可見(jiàn)，運(yùn)動(dòng)比E2能有效改善去卵巢大鼠的體成分。

肝臟是脂質(zhì)代謝的重要器官，而脂肪肝的發(fā)生與肝臟TC的輸出相對(duì)不足或絕對(duì)不足導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)大量堆積有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道，單獨(dú)限制飲食雖能降低去卵巢大鼠體重，但并不能降低去卵巢大鼠肝脂水平，而限制飲食與運(yùn)動(dòng)聯(lián)合處理則能顯著降低去卵巢大鼠肝臟TG含量［5］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)單獨(dú)干預(yù)5周就能顯著降低去卵巢大鼠肝臟TG水平并一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束（運(yùn)動(dòng)處理12周），而且其對(duì)TC的調(diào)節(jié)作用較E2快。提示單純運(yùn)動(dòng)處理就能顯著改善由E2缺乏所導(dǎo)致的肝脂代謝紊亂和肝脂蓄積，阻止去卵巢誘導(dǎo)的脂肪肝的形成，這與Johnson等人［11］在人體實(shí)驗(yàn)中得出的結(jié)果相似。此外Johnson等人甚至得出即使在不改變體重的情況下適當(dāng)運(yùn)動(dòng)仍能顯著減少肥胖患者肝脂水平的結(jié)論［11］。

4 總結(jié)

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，去卵巢能導(dǎo)致大鼠體脂和肝脂水平顯著增加，而中等強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)能顯著抑制去卵巢大鼠體脂和肝脂的增加。

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