劉振華，李忠思，商春麗，米學敏

（1.承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥劑科，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學院中藥研究所；3.承德頸復康藥業(yè)集團有限公司）

復方石韋片處方由石韋、扁蓄、苦參、黃芪四味藥材組成，方由《證治匯補》中石韋散化裁而來，由承德頸復康藥業(yè)集團有限公司獨立開發(fā)研制，1991年收載于河北省藥品標準（1991年版），現(xiàn)收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十五冊，是國家中藥保護品種[1]。復方石韋片具有清熱燥濕、利尿通淋之功效，用于小便不利、尿頻、尿急、尿痛、下肢浮腫等癥；也可用于急慢性腎小球腎炎、腎盂腎炎、膀胱炎、尿道炎，療效顯著，臨床應用前景廣闊。復方石韋片原為半浸膏糖衣片，由于糖衣片存在包衣時間長、成品易吸潮褪色等缺陷，現(xiàn)已改為薄膜衣片；原質(zhì)量標準采用薄層掃描法測定苦參堿的含量，為更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實驗采用高效液相色譜法測定苦參堿的含量。

1 儀器與試藥

Agilent HP 1100高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；苦參堿標準品，中國藥品生物制品檢定所（110805-200306）；復方石韋薄膜衣片，承德頸復康藥業(yè)集團有限公司；甲醇、乙腈，色譜純；其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Kromasil KR100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；流動相：乙腈-0.025M磷酸（1:24）；流速：1ml/min；檢測波長：220nm；理論塔板數(shù)按苦參堿計算不低于2000。

2.2 供試品溶液的制備 取復方石韋薄膜衣片10片，研細、混勻，精密稱取粉末0.5g，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入氯仿40ml，濃氨水0.5ml，浸泡過夜后用脫脂棉濾過，精密吸取續(xù)濾液10ml，過中性氧化鋁柱（內(nèi)徑1.5cm，內(nèi)裝中性氧化鋁8g），用氯仿30ml洗脫，洗脫液40℃水浴蒸干，用甲醇定容至5ml，搖勻，即為供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備

2.3.1 對照樣品：精密稱取苦參堿對照品1.6mg至10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2.3.2 陰性對照：稱取復方石韋片處方中除去苦參以外的藥材，與樣品相同工藝制備空白樣片，依2.2的方法制備陰性對照液。取陰性對照液，按照2.1色譜條件進行HPLC分析。結(jié)果表明，陰性對照液在苦參堿相應的保留時間無吸收峰，因此認為空白無干擾。

2.4 標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0ml，分別置10ml容量瓶中，甲醇定容，分別取上述溶液5μl進樣，按2.1色譜條件進行HPLC分析。以苦參堿的峰面積Y為縱坐標，苦參堿的濃度X為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y=1.3851+2919.9X，r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明，苦參堿在16.01μg/ml-320.40μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 對照品的精密度 精密吸取苦參堿對照品溶液5μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.37%（n=6），對照品具有良好的精密度。2.6 供試品的精密度 精密吸取復方石韋片供試品溶液5μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.40%（n=6），供試品具有良好的精密度。2.7 對照品的穩(wěn)定性 精密吸取苦參堿對照品溶液5μl，每隔1h進樣一次，連續(xù)進樣8次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.85%（n=8），對照品在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 供試品的穩(wěn)定性 精密吸取復方石韋衣片供試品溶液5μl，每隔1h進樣一次，連續(xù)進樣8次，記錄峰面積。結(jié)果表明，苦參堿峰面積的RSD為0.76%，供試品在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 配制濃度為0.1490mg/ml的對照品溶液（精密稱取苦參堿對照品14.90mg至100ml容量瓶中，用氯仿溶解定容，搖勻）。精密稱取已知含量（每片含苦參堿1.73mg）的復方石韋薄膜衣片粉末9份，每份0.25g；1-3份，每份精密加入對照品溶液8ml；4-6份每份精密加對照品溶液10ml；7-9份，每份精密加入對照品溶液12ml；然后分別精密加入氯仿至40ml、再精密加入濃氨水0.5ml，按2.2的方法制成供試品液，進行HPLC分析，計算回收率。結(jié)果表明苦參堿的平均加樣回收率為100.64%，RSD為0.87%。

2.10 重復性試驗 精密稱取同一批復方石韋薄膜衣片粉末9份,1-3份每份0.4g，4-6份每份0.5g，7-9份每份0.6g，按2.2的方法制成供試品液，按2.1色譜條件進行HPLC分析，測定苦參堿峰面積，計算含量，RSD為0.54%。

2.11 苦參堿含量測定 取10批復方石韋薄膜衣片，按2.2的方法制成供試品液，進行HPLC分析，苦參堿含量分別為2.11、2.12、1.95、2.46、2.08、2.30、1.89、2.53、2.23、2.22mg/片，平均含量2.19mg/片，均符合成品質(zhì)量標準規(guī)定（苦參堿含量1mg/片）。

3 討論

復方石韋片原質(zhì)量標準中苦參堿的含量測定方法采用薄層掃描法[2]。此方法雖然具有快速、簡便的特點，但準確度、精密度不甚理想，測定誤差一般在±2-±5%的范圍內(nèi)。薄層掃描法的誤差主要由薄層性質(zhì)及操作方法引起，同時也與掃描定量方法的選擇、掃描參數(shù)的設(shè)定等因素有關(guān)。此外，苦參堿薄層掃描法的提取方法較繁瑣，薄層色譜斑點與顯色劑反應結(jié)果的重現(xiàn)性差。高效液相色譜法具有靈敏度高、分離性能好、適用范圍廣等特點，為更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，采用高效液相色譜法替代原薄層色譜掃描法測定復方石韋薄膜衣片中苦參堿的含量。本研究通過提取溶劑、不同流動相的選擇，得到了滿意的分離效果；通過加樣回收率、精密度實驗等方法學的考察，表明HPLC測定復方石韋薄膜衣片中苦參堿含量的方法簡便易行、結(jié)果準確、穩(wěn)定性好，可用于測定復方石韋薄膜衣片中苦參堿的含量。

[1]李云章.山莊牌復方石韋片[J].中草藥，1997，28（3）：190.

[2]董海榮，楊穎.薄層掃描法測定復方石韋片中苦參堿的含量[J].中草藥，1999，30（1）：22-23.