李 睿,方洪壯,孫長(zhǎng)海,張 宇,劉利成,李百?gòu)?qiáng)

(1.黑龍江成功藥業(yè)有限公司,黑龍江 哈爾濱 150025;佳木斯大學(xué)藥學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007;2.哈藥集團(tuán)生物工程有限公司,黑龍江哈爾濱 150020;3.黑龍江省藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心,黑龍江哈爾濱 150076)

莪術(shù)油葡萄糖注射液是一種中藥抗病毒制劑,收載于2005版的中國(guó)藥典二部,用于治療小兒病毒性肺肺炎[1]。HPLC方法控制莪術(shù)油葡萄糖注射液的質(zhì)量,僅見部分有效成分的測(cè)定[2～4],缺少色譜指紋圖譜的研究?；?HPLC方法可免除由于大量的表面活性劑的存在而引起的相當(dāng)困難的前處理過(guò)程[5],高沸點(diǎn)倍半萜類含氧衍生物,能得到較短的分離時(shí)間以及較高的柱效,采用 HPLC建立莪術(shù)油葡萄糖注射液的指紋圖譜研究,結(jié)果表明,方法簡(jiǎn)便、可靠、重復(fù)性好,可作為莪術(shù)油葡萄糖注射液質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 樣品來(lái)源

提取莪術(shù)油用的藥材均購(gòu)于溫莪術(shù) GAP種植基地瑞安市陶山鎮(zhèn)沙洲村,經(jīng)佳木斯大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室宗希明老師鑒定為溫莪術(shù)。注射液10批,按照莪術(shù)油葡萄糖注射液制劑工藝要求制成。

1.2 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀(美國(guó) Agilent公司),吉馬酮對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)為10753-200212);莪術(shù)二酮對(duì)照品(上海滬云醫(yī)藥開發(fā)有限公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%);莪術(shù)醇對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)為0080-20050521);乙腈、甲醇為色譜純,磷酸為分析純。依地酸二鈉、吐溫-80(注射用)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Zorbax Eclipse XDB-C18分析柱 (250mm× 4.6mm ID,5μm),Eclipse XDB C18保護(hù)柱 (12.5mm× 4.6mm ID,5 μm),自動(dòng)進(jìn)樣器;檢測(cè)波長(zhǎng)210nm,柱溫為30℃,流動(dòng)相為乙腈(A)和1‰磷酸水溶液 (B)。A相濃度洗脫梯度：0min,55%;5min,55%;30min,75%;45min,90%;55min,90%,流速1mL/min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取莪術(shù)二酮、莪術(shù)醇、牛兒酮對(duì)照品適量,另精密吸取 β-欖香烯對(duì)照品適量 ,用甲醇制成4種對(duì)照品濃度分別為 0.2mg/mL、0.025mg/mL、0.1mg/mL、0.2μL/mL的混合溶液,作為對(duì)照品混合溶液。

2.3 空白溶液的制備

取 0.18g的吐溫80,再加入0.25mg依地酸二鈉,用葡萄糖溶液定容至50mL容量瓶中,作為空白溶液。

圖1 注射劑、對(duì)照品及空白溶液的指紋圖譜

2.4 測(cè)定方法

分別吸取空白溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各20 μL,用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見圖1?？瞻兹芤簩?duì)莪術(shù)油葡萄糖注射液的指紋圖譜的檢出無(wú)干擾。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度

同一供試液,連續(xù)進(jìn)樣 5次。所得到指紋圖譜的與其中位值的相關(guān)系數(shù)分別為 0.9972、0.9995、0.9981,0.9997和0.9955,相關(guān)系數(shù)均大于0.9970,各圖譜能夠很好的重合 ,表明儀器的精密度較好。

2.5.2 穩(wěn)定性

同一供試液 ,分別在0、4、8、12,18及 24h進(jìn)樣。不同時(shí)間測(cè)得的圖譜與其均值相關(guān)系數(shù)分別為 0.9989、0.9958、0.9981、0.9995,0.9940和 0.9904,均大于 0.9940,樣品在 24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.6 共有模式建立

取莪術(shù)油葡萄糖注射液7批,按上述色譜條件檢測(cè),確定了9個(gè)特征峰構(gòu)成莪術(shù)油葡萄糖注射液的指紋圖譜,共有模式圖見圖2。圖中,2號(hào)峰為莪術(shù)二酮,4號(hào)為莪術(shù)醇,6號(hào)為吉馬酮,8號(hào)為β-欖香烯。對(duì)所得到 HPLC指紋圖譜進(jìn)行共有圖譜擬合,中位數(shù)法共有模式的相關(guān)系數(shù)為0.9701,0.9456,0.9711,0.9388,0.9804,0.9959,0.99632。均值法共有模式的相關(guān)系數(shù)為0.9774,0.9593,0.9790,0.9515,0.9722,0.9881,0.9940。采用相似度對(duì)其余3批注射液進(jìn)行相似度評(píng)價(jià),中位數(shù)法相關(guān)系數(shù)為0.9464,0.9240,0.9661;均值法相關(guān)系數(shù)為0.9569,0.9212,0.9607。

圖2 注射液共有模式圖

3 討論

3.1 共有峰的確定

選用吉馬酮為參照物,選用超過(guò)其峰面積5%,保留時(shí)間和峰面積比較穩(wěn)定的色譜峰為共有峰。

3.2 流動(dòng)相 pH與檢測(cè)波長(zhǎng)

基于注射液中的主要成分,具有一定的酸性,為加強(qiáng)色譜分離效果,流動(dòng)相中添加磷酸。兼顧色譜中多種倍半萜類含氧衍生物成分的吸收特征,選擇210 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典 2005年版二部 [S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005,592

[2]謝永忠,夏泉.高效液相色譜法測(cè)定莪術(shù)中吉馬酮的含量 [J].中國(guó)藥房,2005,16(6)：461

[3]黃趙剛,李紹平,李俊,等.反相 HPLC法測(cè)定莪術(shù)油葡萄糖注射液中莪術(shù)醇和吉馬酮的含量 [J].中成藥,2005,27(10)：1141

[4]李成網(wǎng),王唯紅.高效液相色譜法測(cè)定莪術(shù)油中莪術(shù)二酮和牦牛兒酮的含量 [J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13(3)：12

[5]吳雨川,劉天揚(yáng),姜連閣,等.RP— HPLC法測(cè)定莪術(shù)油中莪術(shù)醇和吉馬酮含量[J].中醫(yī)藥信息,2004,21(4)：64