鄭美娟（漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，福建漳州363000）

薄層色譜法在中藥蟲草顆粒質(zhì)量研究中的應(yīng)用

鄭美娟
（漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，福建漳州363000）

目的對(duì)中藥蟲草顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制研究，確保制劑質(zhì)量的可控性。方法利用薄層色譜法，對(duì)川貝母、人參、苦杏仁、陳皮等君藥進(jìn)行定性和蟲草主藥的定量控制，并通過方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果確定蟲草的含量限度為本品含發(fā)酵蟲草菌粉以腺苷（CloHl3N504）計(jì)算，每克不得少于0.10 mg，折算成每克蟲草菌粉含腺苷的量為1.85mg。結(jié)論本測(cè)定方法和含量限度的制定合理。

薄層色譜法；中藥；蟲草顆粒；質(zhì)量研究

本文利用薄層色譜法，對(duì)中藥蟲草顆粒中川貝母、人參、苦杏仁、陳皮等君藥進(jìn)行了定性和蟲草主藥的定量控制，并通過了方法學(xué)的驗(yàn)證，最終確定蟲草的含量限度為本品含發(fā)酵蟲草菌粉以腺苷（CloHl3N504）計(jì)算，每克不得少于0.10mg。通過定性和定量控制標(biāo)準(zhǔn)的制訂，確保了藥品質(zhì)量的可控性，從而為該制劑科學(xué)生產(chǎn)提供了充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù)［1-5］。

1 儀器與材料

1.1 儀器薄層色譜掃描儀，CS-9301日本島津；紫外可見分光光度計(jì)，751GD上海天普分析儀器廠；電子天平，1／10000上海天平儀器廠；電熱真空干燥箱，DZF-1B蘇通州銳鋒制藥機(jī)械有限公司。

1.2 材料與試劑橙皮苷、人參皂苷、西貝堿、腺苷、苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品，均由中國(guó)藥品生物制檢所生產(chǎn)；層析用硅GF254分析純，青島硅創(chuàng)精細(xì)化工有限公司；氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、異丙醇、正丁醇、乙醚分析純均由廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。樣品：090601、090602、090603，漳州市藥品檢驗(yàn)所。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 川貝母鑒別（1）川貝母供試液的制備：取樣品10 g，置50 mL錐形瓶中，加濃氨試液5 mL、氯仿20mL，密塞浸泡過夜，超聲提取30 min，分取氯仿層，藥渣及堿液再加氯仿15mL，超聲提取30min，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)勇确?mL溶解，作為供試品溶液。（2）對(duì)照溶液的制備：取西貝堿對(duì)照品，加氯仿制成每1mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。（3）薄層層析：照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB）［6］試驗(yàn)，吸取供試品溶液30μL，對(duì)照品溶液3μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯-甲醇-濃氨水（10∶10∶2∶1）的上層溶液為展開劑，置氨蒸氣充分飽和的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干。噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 人參的鑒別（1）供試液的制備：取樣品10 g，加水飽和的正丁醇20 mL，超聲處理30 min，然后置分液漏斗中，加3倍量的氨試液，振搖提取，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)蛹捉?mL使溶解，作為供試品溶液。（2）對(duì)照溶液的制備：取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。（3）薄層層析：照薄層色譜法［6］試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10μL，對(duì)照品溶液3μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（26∶16∶6）100℃以下放置的下層溶液為展開劑，展距15 cm，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈（365 nm）下顯相同的熒光斑點(diǎn)。

2.3 陳皮的鑒別（1）供試液的制備：取樣品3 g，加甲醇10mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL，作為供試品溶液。（2）對(duì)照溶液的制備：取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。（3）薄層層析照薄層色譜法［6］試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.4 苦杏仁的鑒別（1）供試液的制備：取本品1 g，加乙醚回流2次，每次30 mL，1 h，棄去乙醚液，殘?jiān)蛹状?0 mL，置水浴上加熱回流30 min，放置至室溫，濾過，濾液加活性碳2.5 g，攪拌，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?0 mL提取，棄去醋酸乙酯溶液，殘?jiān)鼡]干，加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。（2）對(duì)照溶液的制備：取苦杏仁苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。（3）薄層層析：照薄層色譜法［6］試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液15μL，對(duì)照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）5～10℃放置12 h下層溶液為展開劑，展開，取出，立即噴以磷鉬酸硫酸溶液（磷鉬酸29，加水20 mL使溶解，再緩緩加入30 mL硫酸，混勻），在105℃烘約10 min，供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的藍(lán)色斑點(diǎn)。

2.5 蟲草的含量測(cè)定

2.5.1 色譜條件（1）薄層板制備：用4%Na2HPO4·12H2O的0.5%CMC-Na溶液-硅膠GF254（3∶1）濕法輔板，厚度為0.5 mm，晾干，于105℃活化1 h備用。（2）展開、顯色條件：氯仿-醋酸乙酯-異丙醇-水-濃氮試液（8∶2∶6∶0.5∶0.3），在紫外光燈（254 nm）下確定斑點(diǎn)的位置。（3）掃描方式：反射法鋸齒掃描：SX＝3，光束：0.4 mm×0.4 mm。（4）掃描波長(zhǎng)：腺苷在264 nm處有最大吸收，參比波長(zhǎng)為365 nm。（5）供試液的制備：取樣品5 g，研細(xì)，精密稱定，加90%甲醇60mL回流提取1 h，放冷濾過，藥渣再加90%甲醇50mL回流提取30min，放冷濾過，藥渣用90%甲醇洗滌3次，每次10mL，濾過，合并90%的甲醇液，水浴蒸干，殘?jiān)铀?5 mL溫?zé)崾谷芙猓靡颐烟崛?次，每次20mL，棄去乙醚液，水溶液水浴加熱蒸去乙醚后，用水飽和正丁醇提取5次（30 mL×2次，15 mL×3次），合并正丁醇提取液，水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，用90%甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。（6）對(duì)照溶液的制備：取腺苷對(duì)照品加90%甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液。

2.5.2 樣品測(cè)定方法照薄層色譜法［6］試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液8μL，對(duì)照品溶液3μL和5μL，交叉點(diǎn)于同一4%磷酸氫二鈉制備的硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-異丙醇-水-濃氨試液（8∶2∶6∶0.5∶0.3）為展開劑展開，展距12 cm，取出晾干，置紫外光燈（254 nm）下定位，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝264 nm，λR＝365 nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。

3 結(jié)果

3.1 檢測(cè)方法正確性

3.1.1 專屬性腺苷測(cè)定中無干擾物質(zhì)存在，說明該方法專屬性良好。

3.1.2 線性關(guān)系考察用定量毛細(xì)管吸取2.0，3.0，4.0，5.0，6.0μL對(duì)照品溶液（0.246 mg／mL）點(diǎn)于同一4%Na2HPH2O的0.5%CMC-Na為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，按上述展開條件展開，展距12 cm，紫外光燈（254 nm）下定位，按上述條件掃描測(cè)定，回歸方程為Y＝129 3.2X+59.637，r＝0.999 7，說明腺苷在0.492～1.476μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)用定量毛細(xì)管吸取對(duì)照品溶液4μL、供試品溶液8μL，同標(biāo)準(zhǔn)曲線方法點(diǎn)樣、展開、定位，在相同條件下于不同時(shí)間連續(xù)掃描測(cè)定吸收度積分值，試驗(yàn)表明，腺苷斑點(diǎn)在4 h內(nèi)吸收度積分值基本不變。

3.1.4 精密度試驗(yàn)用定量毛細(xì)管吸取對(duì)照品溶液4 μL、供試品溶液8μL，分別點(diǎn)于同一4%Na2HPO4· 12H2O的0.5%CMC-Na為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，各5個(gè)點(diǎn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法展開、定位，掃描測(cè)定，結(jié)果對(duì)照品RSD為1.43%，供試品RSD為1.68%。

3.1.5 加樣回收試驗(yàn)取本品（批號(hào)090602）約5 g，研細(xì)，精密稱定，精密加入腺苷對(duì)照品約0.6mg，供試品點(diǎn)樣量為4μL，對(duì)照品點(diǎn)樣量為3μL和5μL，平均回收率為99.41%，RSD為1.22%。

3.2 腺苷含量測(cè)定結(jié)果

3.2.1 發(fā)酵蟲草菌粉含量測(cè)定結(jié)果取發(fā)酵蟲草菌粉約0.3 g，精密稱定，測(cè)得腺苷含量，結(jié)果表1。

表1 發(fā)酵蟲草菌粉含量測(cè)定結(jié)果

3.2.2 樣品測(cè)定結(jié)果取樣品約5 g，研細(xì)、精密稱定，測(cè)得3批樣品的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

4 討論

蟲草顆粒是由13味中藥組成的復(fù)方，其蟲草菌粉占總處方的5.4%，腺苷是水溶性較強(qiáng)的化合物；由于蟲草顆粒處方中的方藥富含水溶性成分，采用高效液相色譜法測(cè)定蟲草顆粒中的腺苷成分水溶性成分干擾太多，結(jié)果不能運(yùn)行腺苷的含量測(cè)定。采用薄層色譜法測(cè)定蟲草顆粒的腺苷含量，陰性無干擾，因此改用了薄層掃描方法測(cè)定腺苷含量。含量限度定為本品含發(fā)酵蟲草菌粉以腺苷（CloHl3N504）計(jì)算，每克不得少于0.10mg，折算成每克蟲草菌粉含腺苷的量為1.85mg，與單味蟲草菌粉組成的中成藥“金水寶膠囊”的含量限度相比略低些，因?yàn)橄x草菌粉在處方成品中的含量測(cè)定是有一定的轉(zhuǎn)移率的［7］。因此筆者認(rèn)為，本測(cè)定方法和含量限度的制定合理。

［1］馮孝章.發(fā)酵蟲草菌絲體的質(zhì)量分析［M］.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)年鑒，1990：201-210.

［2］衛(wèi)生部.中藥材［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1992：25-27.

［3］梁生旺.中藥制劑定量分析［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1997：110-115.

［4］張力.冬蟲夏草的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.藥學(xué)通報(bào)，1988，23（5）：520-522.

［5］孫文基.天然藥物有效成分提取與分離［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1999：145-148.

［6］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：附錄，170-180.

［7］傅杰，李英華，呂秀陽.樣品預(yù)處理方法對(duì)蟲草頭孢菌粉中腺苷含量測(cè)定的影響［J］.江南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008（1）：28-30.

R284.2

A

1007－4813（2010）06－0952－03

2010－08－26）

鄭美娟（1975－），女，大學(xué)本科，講師。研究方向：中藥學(xué)。