姜麗紅，溫琦（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林長春130021）

·實(shí)驗(yàn)研究·

補(bǔ)腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織中5-HT含量及Na、K-ATPase活性的影響

姜麗紅，溫琦
（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林長春130021）

目的通過實(shí)驗(yàn)觀察補(bǔ)腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織5-HT及Na、K-ATPase活性的影響，探討補(bǔ)腎寧心顆粒對心臟神經(jīng)癥的作用機(jī)理。方法雄性Wistar大鼠60只隨機(jī)分為正?？瞻捉M，模型組（模型空白組，模型安定對照組，模型藥物高、中、低劑量組），每組10只，采用高架十字迷宮模型（EPM）法造焦慮模型，灌胃，用分光光度法檢測Na、K-ATPase含量以及用ELISE法檢測5-HT的含量。結(jié)果補(bǔ)腎寧心顆?？山档徒箲]性大鼠腦組織中5-HT濃度，提高焦慮性大鼠腦組織Na、K-ATPase活性。結(jié)論心臟神經(jīng)癥的發(fā)生與焦慮有關(guān)，中醫(yī)通過調(diào)整肝腎之法能改善其癥狀，可緩解焦慮。

補(bǔ)腎寧心顆粒；大鼠；腦組織；5-HT；Na、K-ATPase

補(bǔ)腎寧心顆粒是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，本著調(diào)整肝腎以治心的原則組方研制而成，臨床應(yīng)用療效確切。本研究旨在通過實(shí)驗(yàn)觀察補(bǔ)腎寧心顆粒對焦慮大鼠腦組織中5-HT的含量及Na、K-ATPase的活性變化，探討補(bǔ)腎寧心顆粒對心臟神經(jīng)癥的治療作用機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只，雄性，體質(zhì)量（180 ±10）g。由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔動(dòng)物合格證號：SCXK-（吉）2008-0005〕。

1.2 飼料及飼養(yǎng)環(huán)境將大鼠置于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，室溫控制在20℃～30℃，濕度50%～70%，通風(fēng)2～3次／d，1 h／次。大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠5只?？刂茣円构庹眨苊膺^多噪聲及其它干擾。給予通用鼠料喂養(yǎng)，投料量每只大鼠30 g／d，根據(jù)大鼠體質(zhì)量增長情況調(diào)整。自由飲水，常規(guī)飼養(yǎng)，飲水采用自來水，不限飲水。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥品補(bǔ)腎寧心顆粒：吉林省中醫(yī)中藥研究院植化實(shí)驗(yàn)室提供，批號：20080110，規(guī)格：8 g／袋。分別配制30%，15%，7.5%的混懸液備用（分別稱取補(bǔ)腎寧心顆粒30，15，7.5 g加蒸餾水至100 mL）；地西泮片（Diazepam，DZP）：國藥準(zhǔn)字H11020898，北京益民藥業(yè)有限公司出品。

1.4 實(shí)驗(yàn)試劑大鼠5-HT酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）試劑盒：上海朗頓生物科技有限公司提供；超微量ATP酶測試盒：南京建成生物工程研究所。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組將全部大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，為正?？瞻捉M，模型組（模型空白組，模型安定對照組，模型藥物高、中、低劑量組），每組10只。適應(yīng)環(huán)境1周，活動(dòng)、糞便等均未見異常后進(jìn)行試驗(yàn)，給藥前用電子秤稱量并記錄各大鼠的體質(zhì)量，之后用苦味酸按頭、四肢等部位做好標(biāo)記。

2.2 給藥劑量及途徑6組動(dòng)物每日上午灌胃1次（連續(xù)灌胃7 d）。補(bǔ)腎寧心顆粒高劑量組：6 g／kg體質(zhì)量（補(bǔ)腎寧心顆粒30%混懸液×20 mL／kg體質(zhì)量）；補(bǔ)腎寧心顆粒中劑量組：3 g／kg體質(zhì)量（補(bǔ)腎寧心顆粒15%混懸液×20 mL／kg體質(zhì)量）；補(bǔ)腎寧心顆粒低劑量組：1.5 g／kg體質(zhì)量（補(bǔ)腎寧心顆粒7.5%混懸液×20mL／kg體質(zhì)量）；DZP組給予1mg／kg（5%× 20 mL／kg體質(zhì)量）體質(zhì)量灌胃；模型空白組及正常空白對照組20mL／kg體質(zhì)量蒸餾水灌胃。以上用藥量按人／鼠公斤體質(zhì)量的等效劑量折算。

2.3 實(shí)驗(yàn)周期實(shí)驗(yàn)前期（觀察期）1周，試驗(yàn)期（給藥期）1周，實(shí)驗(yàn)后期（指標(biāo)檢測期）1周。

2.4 觀察指標(biāo)（1）一般觀察：包括進(jìn)食、水量、體質(zhì)量、二便、外觀毛色、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況等。（2）實(shí)驗(yàn)指標(biāo)：檢測腦組織中5-HT的含量及Na、K-ATPase活性。

2.5 造模方法采取大鼠高架十字迷宮（elevated plus-maze，EPM）法造焦慮模型［1］。

2.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取材各組連續(xù)灌胃7 d。補(bǔ)腎寧心顆粒各組于末次給藥后1.5 h、DZP組末次灌胃0.5 h［2］、模型空白組末次灌胃0.5 h后做行為學(xué)測試；正?？瞻讓φ战M不做行為學(xué)測試，所有動(dòng)物提前進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。行為學(xué)測試結(jié)束后，快速斷頭處死大鼠，迅速放在冰盤上（0.9%NaCl注射液凍制）。

剪開顱蓋和腦膜，分離下丘腦用鹽水沖洗，除去血污，剔除脂肪等組織，用濾紙吸去水分，取下丘腦部分腦組織100mg，加0.9mL冰生理鹽水，玻璃勻漿器制成10%的腦組織勻漿，低溫離心機(jī)離心（3 000 r／min）10min，取上清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELAISA）檢測5-HT含量；用分光光度法測量Na、K-ATPase的活性［1］。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，采用SPSS11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 5組大鼠走迷宮結(jié)果比較見表1。

表1 5組大鼠走迷宮結(jié)果比較（ˉx±s，n＝10）

3.2 對焦慮模型動(dòng)物腦組織中腦內(nèi)活性物質(zhì)5-HT含量的影響見表2。

表2 對焦慮模型動(dòng)物腦組織中腦內(nèi)活性物質(zhì)5-HT的影響±s，n＝10）

表2 對焦慮模型動(dòng)物腦組織中腦內(nèi)活性物質(zhì)5-HT的影響±s，n＝10）

注：與正?？瞻讓φ战M比較，＃P＜0.05；與模型空白組比較，▲P＜0.01，▲▲P＜0.001；與DZP對照組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01。

組別給藥劑量／（g／kg）5-HT／（mg／mL）正常空白對照組—258.17±10.75模型空白組—296.42±17.16□DZP對照組1mg 256.23±9.53▲▲補(bǔ)腎寧心高劑量組6 260.89±14.60▲補(bǔ)腎寧心中劑量組3 267.20±9.31▲★補(bǔ)腎寧心低劑量組1.5 286.66±15.92＃★★

3.3 對焦慮模型動(dòng)物腦組織中腦內(nèi)Na、K-ATPase活性的影響見表3。

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，心血管神經(jīng)癥的病因不清，可能與體質(zhì)、神經(jīng)、行為、外周環(huán)境、遺傳因素有關(guān)?；颊呱窠?jīng)類型常為弱型，較抑郁和焦慮憂愁，發(fā)病大多有明確的誘發(fā)因素，在精神上受到刺激或工作較緊張時(shí)，往往不能使自己適應(yīng)這種環(huán)境而易發(fā)病或使癥狀加重［3-4］。補(bǔ)腎寧心顆粒本著調(diào)整肝腎以治心的原則，治以補(bǔ)腎滋陰，鎮(zhèn)逆降沖，寧心除煩，理氣化瘀，選熟地黃、山茱萸、龜板、代赭石、珍珠母、磁石、丹參、淫羊藿、生百合、青皮、遠(yuǎn)志、酸棗仁12味中藥，按現(xiàn)代工藝，制成無糖顆粒。

表3 對焦慮模型動(dòng)物腦組織中Na、K-ATPase活性的影響（s，n＝10）

表3 對焦慮模型動(dòng)物腦組織中Na、K-ATPase活性的影響（s，n＝10）

注：與正?？瞻讓φ战M比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型空白組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與DZP對照組比較，★P＜0.05。

組別給藥劑量／（g／kg）Na、K-ATPase（μmol／mg）正?？瞻讓φ战M—72.42±5.73模型空白組—55.40±8.31＃＃DZP對照組1mg 70.13±6.07▲▲補(bǔ)腎寧心高劑量組6 71.08±6.29▲▲補(bǔ)腎寧心中劑量組3 67.14±6.14▲補(bǔ)腎寧心低劑量組1.5 61.39±5.24?！?/p>

5-HT是機(jī)體重要的神經(jīng)介質(zhì)之一，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為焦慮的發(fā)病機(jī)理與5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)含量的增多有關(guān)，Na、K-ATPase是一種調(diào)節(jié)酶，在調(diào)節(jié)心肌收縮力、維持中樞神經(jīng)興奮性方面起著重要作用。以Na、KATP酶為分子基礎(chǔ)的鈉泵，是細(xì)胞膜最重要的鈉鉀轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)［5］。腦組織中的ATP酶對腦組織的能量代謝能產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用。當(dāng)Na、K-ATPase活性降低時(shí)，腦中產(chǎn)生能量相應(yīng)減少，不能滿足腦內(nèi)組織的代謝需求而產(chǎn)生焦慮情緒。反之當(dāng)Na、K-ATPase活性增高時(shí)，可緩解焦慮［6］。本實(shí)驗(yàn)研究證明，補(bǔ)腎寧心顆粒可降低焦慮性大鼠腦組織中5-HT濃度，提高焦慮性大鼠腦組織Na、K-ATPase活性，可緩解焦慮。補(bǔ)腎寧心顆粒高劑量作用尤其明顯，作用優(yōu)于DZP且不改變大鼠的飲食及其活動(dòng)度。

以上結(jié)論得出，心臟神經(jīng)癥的發(fā)生與焦慮與關(guān)，中醫(yī)通過調(diào)整肝腎之法治療可以改善其癥狀。

［1］H.G.沃格爾，W.H.沃格爾.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南：新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學(xué)評價(jià)［M］.北京：科學(xué)技術(shù)出版社，2001：327.

［2］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：817.

［3］李志堅(jiān).心臟神經(jīng)癥患者的精神心理特征［J］.中國臨床康復(fù)，2004，8（21）：4165.

［4］陳國偉，鄭宗鍔，王新房，等.現(xiàn)代心臟內(nèi)科學(xué)［M］.長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1994：1135.

［5］Friedman W.Panic disorder and pathologic anxiety［J］.Ps ychia Clin North Am，1998，10（6）：375-377.

［6］David Nutt DM.Psych FRCManagement of patients with depression associated with anxiety symptoms［J］.Clin Ps ychiatry，1997，58（suppl8）：11-13.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0815－02

2010－09－03）

吉林省教育廳資助課題［吉教科合字（2005）第57號］

姜麗紅（1965－），女，碩士，教授，主任醫(yī)師。研究方向：內(nèi)科臨床。