李金花，于文斌，趙麗茹，孟青青，白中文，秦玲（吉林省生物研究所，吉林長春130012）

紅景天靈芝膠囊增強(qiáng)免疫力及抗輻射功能研究

李金花，于文斌，趙麗茹，孟青青，白中文，秦玲
（吉林省生物研究所，吉林長春130012）

目的通過增強(qiáng)免疫功能及抗輻射功能實驗，研究紅景天靈芝膠囊的免疫功能及抗輻射功效。方法分別按增強(qiáng)免疫力實驗方法和抗輻射實驗方法進(jìn)行。結(jié)果樣品對小鼠DTH的影響在劑量組與對照組間比較（P＜0.05或P＜0.01），對抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響在高劑量組與對照組間比較（P＜0.05），對半數(shù)溶血值在高劑量組與對照組間比較（P＜0.05），碳廓清功能在高劑量組與對照組間比較（P＜0.05）；樣品能顯著增加輻射后小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量（P＜0.05或P＜0.01），并降低小鼠的骨髓細(xì)胞微核率（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論紅景天靈芝膠囊具有增強(qiáng)免疫力及抗輻射的雙重功效。

紅景天靈芝膠囊；免疫功能；抗輻射；小鼠

紅景天具有益氣活血、通脈平喘的功效，主治氣虛血瘀、胸痹心痛、腦卒中偏癱、倦怠氣喘等。現(xiàn)代藥理研究表明，紅景天及其提取物具有提高免疫力、抗輻射、抗缺氧、抗疲勞、抗衰老、抗抑郁癥的作用［1］，其主要成分為紅景天苷［2］。靈芝具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效，主治眩暈不眠、心悸氣短、虛勞咳喘等?，F(xiàn)代藥理研究表明，靈芝及其提取物具有免疫調(diào)節(jié)、抗輻射、抗衰老、抗腫瘤以及護(hù)肝解毒作用［3］，其主要成分為多糖類物質(zhì)［4］。以下實驗分別從增強(qiáng)免疫力功能、抗輻射功能兩方面進(jìn)行。

1 實驗材料

1.1 樣品紅景天靈芝膠囊，由長春茸源真菌技術(shù)開發(fā)公司提供。

1.2 實驗動物增強(qiáng)免疫力實驗小鼠：由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，ICR雄性，體質(zhì)量18～22 g；抗輻射實驗小鼠：昆明種小鼠，雌性，體質(zhì)量18～22 g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供。

2 增強(qiáng)免疫力功能實驗方法與結(jié)果

2.1 實驗方法選健康小鼠，每個檢測指標(biāo)設(shè)小鼠48只，分為4組，每組12只。設(shè)低、中、高3個劑量組和1個陰性對照組。劑量組動物采用成人推薦攝入量的1，10，30倍，即0.013 3，0.133，0.4 g／kg BW，以蒸餾水作陰性對照，各小組灌胃量均為0.2 mL／10 g BW，連續(xù)灌胃30 d后測各項免疫指標(biāo)。

2.1.1 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）采用足跖增厚法。

2.1.2 抗體生成細(xì)胞檢測采用Jerne改良玻片法。

2.1.3 半數(shù)溶血值（HC50）的測定取羊血，生理鹽水洗滌3次，每次離心（2 000 r／min）10 min，每只鼠經(jīng)腹腔注射2%壓積SRBC 0.2mL進(jìn)行免疫。4 d后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置約1 h，將凝固血與管壁剝離，使血清充分分析出，2 000 r／min離心10 min，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋。將稀釋后的血清1 mL置試管內(nèi)，依次加入10%（V／V）SRBC 0.5 mL，補(bǔ)體1 mL。另設(shè)不加血清的對照管（以SA緩沖液代替）。置37℃恒溫水浴中保溫25min后，冰浴終止反應(yīng)。2 000 r／min離心10 min，取上清1 mL，加都氏試劑3mL。同時取10%（V／V）SRBC 0.25mL，加都氏試劑至4 mL，充分混勻，放置10 min后，于540 nm處以對照管作空白，分別測各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值（HC50）表示。

2.1.4 小鼠碳廓清實驗小鼠尾靜脈注射1∶4倍稀釋的印度墨汁后立即計時，于2，10 min，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20μL立刻加到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，以Na2CO3溶液作陰性對照，722分光光度計于600 nm波長處測OD值。取小鼠肝臟和脾臟，用濾紙吸干臟器表面污血，分別稱重，計算吞噬指數(shù)。

2.2 實驗結(jié)果

2.2.1 對小鼠體質(zhì)量和DTH的影響見表1。

2.2.2 對小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)及小鼠HC50的影響見表2。

2.2.3 對小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響見表3。

表1 對小鼠體質(zhì)量和DTH的影響±s，n＝12）

表1 對小鼠體質(zhì)量和DTH的影響±s，n＝12）

注：與陰性對照組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別始重／g終重／g增重足跖腫脹度／mm陰性對照組19.3±1.0 36.4±1.1 17.0±1.3 0.47±0.08低劑量組19.3±1.0 36.5±1.5 17.3±1.9 0.49±0.07中劑量組19.6±0.8 36.7±1.4 17.1±1.3 0.55±0.09＃高劑量組19.6±1.0 36.5±1.4 16.9±1.4 0.57±0.09＃＃

表2對小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)及小鼠HC50的影響（±s，n＝12）

注：與陰性對照組比較，＃P＜0.05。

表3 對小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響±s）

表3 對小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清功能的影響±s）

注：與陰性對照組比較，＃P＜0.05。

組別n吞噬指數(shù)／a陰性對照組12 6.58±0.34低劑量組12 6.65±0.38中劑量組12 6.72±0.58高劑量組12 6.96±0.45＃

3 抗輻射功能實驗方法與結(jié)果

3.1 實驗方法選健康小鼠80只分兩批，一批做外周血白細(xì)胞計數(shù)實驗，另一批做小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗和骨髓細(xì)胞DNA實驗。每批4組，每組10只，設(shè)低、中、高3個劑量組和1個輻射模型對照組。劑量組動物取成人推薦攝入量的1，10，30倍，即0.013 3，0.133，0.4 g／kg BW，各組均按0.1 mL／10 g BW劑量經(jīng)口灌胃。

3.1.1 外周血細(xì)胞計數(shù)實驗各劑量組經(jīng)口灌胃40 d，輻射模型對照組每天以同樣方式給予同體積的去離子水。在實驗的第27天各組小鼠均以5 Gy Co60-γ射線全身照射1次。于照射前、照射后第3，14天取尾血測定WBC，分別比較照射前各組WBC總數(shù)、照射后第3天輻射模型對照組自身WBC總數(shù)、各時間點各劑量組與輻射模型對照組WBC總數(shù)的變化。各組均在實驗前、照射前、照射后3 d和照射后14 d稱重。

3.1.2 小鼠骨髓細(xì)胞微核實驗和骨髓細(xì)胞DNA實驗各劑量組均按0.1 mL／10 g BW經(jīng)口灌胃，1次／d，連續(xù)30 d，輻射模型對照組每天以同樣方式給予同體積的去離子水。在實驗的第27天各組小鼠均以5 Gy Co60-γ射線全身照射1次。于照射后第3天，頸椎脫臼處死動物，常規(guī)取胸骨制片、固定、染色，油鏡下對每只動物觀察1 000個嗜多染紅細(xì)胞，計算含微核細(xì)胞數(shù)及微核細(xì)胞率。剝離出股骨，取1 mL Hank's液，沖出股骨中的全部骨髓細(xì)胞，混勻后用酶聯(lián)免疫光譜分析儀Plus 384 260 nm處測定骨髓細(xì)胞DNA含量。各組在初始、照射前、照射后3 d稱重。

3.2 實驗結(jié)果

3.2.1 對小鼠外周血WBC計數(shù)的影響見表4。

表4 對小鼠外周血WBC計數(shù)的影響±s，n＝10）

表4 對小鼠外周血WBC計數(shù)的影響±s，n＝10）

注：與輻射模型對照組比較，＃P＜0.05；＃＃P＜0.01。

白細(xì)胞總數(shù)／（×109／L）14 d輻射模型對照組—8.15±2.90 1.53±0.32 2.03±0.36低劑量組13.3 7.86±2.63 1.65±0.42 2.14±0.43中劑量組133.0 7.80±2.40 1.87±0.28＃2.42±0.35＃高劑量組400.0 7.80±2.35 2.01±0.30＃＃2.51±0.34組別劑量／（mg／kg BW）照射前照射3 d照射＃＃

3.2.2 對小鼠骨髓細(xì)胞微核及骨髓有核細(xì)胞DNA含量的影響見表5。

注：與輻射模型對照組比較，＃P＜0.05；＃＃P＜0.01。

4 討論

經(jīng)口給予小鼠不同劑量的樣品能提高小鼠的半數(shù)溶血值，小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)，增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提高小鼠單核-巨噬細(xì)胞的碳廓清能力，表明紅景天靈芝膠囊具有增強(qiáng)免疫力之功能；抗輻射實驗結(jié)果顯示：樣品能夠顯著增加輻射后小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量，并抑制小鼠的骨髓細(xì)胞微核率，表明紅景天靈芝膠囊對輻射危害具有輔助保護(hù)功能。

［1］袁瑜.紅景天活性成分及藥理作用［J］.食品與藥品，2007，9（5）：55-57.

［2］張新勝.紅景天苷對骨髓抑制貧血小鼠骨髓細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響［J］.四川大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2005，36（6）：821-823.

［3］袁帶秀.靈芝活性成分、藥理作用及其應(yīng)用［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2006（2）：110-112.

［4］吳京燕.靈芝多糖合劑抗輻射保健功能的研究［J］.南京師大學(xué)報：自然科學(xué)版，2003，26（3）：80.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0817－02

2010－09－27）

吉林省科技發(fā)展計劃項目（20050215-3）

李金花（1973－），女，大學(xué)本科，助理研究員。研究方向：藥用真菌及保健食品的開發(fā)研究。