王亞平，周麗雅（.德惠市中醫(yī)院，吉林德惠33000；.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春307）

二參湯對大鼠心肌缺血興奮性氨基酸損傷的保護(hù)作用

王亞平1，周麗雅2
（1.德惠市中醫(yī)院，吉林德惠133000；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春130117）

目的利用垂體后葉素腹腔注射造成大鼠心肌缺血模型，觀察二參湯對大鼠心肌缺血的保護(hù)作用。方法將60只Wistar大鼠分為正常對照組，模型組，二參湯低、中、高劑量組，腸溶阿斯匹林組，觀察二參湯對各組大鼠心電圖、血清及心肌組織興奮性氨基酸的影響及心肌組織病理變化。結(jié)果二參湯可以對抗垂體后葉素腹腔注射造成大鼠心肌缺血損傷，使心肌缺血大鼠的心電圖ST段異常升高數(shù)減少，二參湯可使血漿和心肌組織Glu、Asp含量降低，表明二參湯可防止EAA的升高。結(jié)論二參湯對大鼠心肌缺血有保護(hù)作用，其機制可能與抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān)。

二參湯；心肌缺血；興奮性氨基酸；大鼠

本實驗通過中藥二參湯對大鼠心肌缺血抗脂質(zhì)過氧化損傷的保護(hù)作用的研究，觀察二參湯對各組大鼠心電圖、血清及心肌組織谷氨酸（GLU）及天冬氨酸（Asp）的影響及心肌組織病理變化以驗證二參湯對大鼠心肌缺血的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與藥物Wistar大白鼠60只，體質(zhì)量（250～300）g，8～10周齡，雄性，購自長春開發(fā)區(qū)實驗動物中心。二參湯（黃芪、黨參、丹參、川芎、降香、麥冬、五味子、木香、薤白、三七、水蛭、甘草）、垂體后葉素、谷氨酸（GLU）、天冬氨酸（Asp）測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 實驗方法將大鼠隨機分為6組，每組10只：正常對照組，用10 mL／kg蒸餾水灌胃；模型組，用10 mL／kg蒸餾水灌胃；二參湯低、中、高劑量組，用濃度分別為50，200，400 g／L的二參湯10 mL／kg灌胃；腸溶阿斯匹林組，用濃度為3.33 g／L的腸溶阿斯匹林10mL／kg灌胃。連續(xù)灌胃14 d后，除正常對照組外，其余5組大鼠用垂體后葉素（Pit）20 U／kg腹腔注射造成心肌缺血模型。各組在給與垂體后葉素前后均描記心電圖。24 h后全部大鼠用20%烏拉坦10mL／kg腹腔注射麻醉，進(jìn)行指標(biāo)測定。

1.3 指標(biāo)測定（1）麻醉后，將大鼠仰臥位固定，四肢皮下插入針狀電極及胸前電極，每只大鼠先做心電圖。各組動物均記錄正常Ⅱ?qū)?lián)，測定用垂體后葉素ST段異常偏移總毫伏數(shù)（∑ST）、每組出現(xiàn)ST段異常的動物數(shù)及ST偏移的平均值，作為判斷心肌缺血程度和藥物療效的指標(biāo)。（2）模型成功后，剖腹，自腹主動脈無菌取血，在4℃條件下3 000 r／min離心10min，分離血清置于－70℃冰箱待測。（3）模型成功后，大鼠于腹主動脈取血后立即冰面上快速取心肌組織，平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫斷成5份，取其2份放入2mL預(yù)冷4℃的生理鹽水中，用玻璃勻漿器制備心肌組織勻漿，鏡下觀察到細(xì)胞磨破，取10%勻漿上清加生理鹽水，按1∶9制成10%勻漿液，3 500 r／min離心15 min，取上清－70℃凍存作相關(guān)檢測。（4）大鼠處死后，取其余心肌組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)經(jīng)SAS軟件包處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，所得數(shù)據(jù)作方差齊性試驗后作配對t檢驗，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 對心肌缺血大鼠心電圖ST段偏移的影響見表1。

表1 對心肌缺血大鼠Ⅱ?qū)?lián)ST偏移的影響（±s，n＝10）

表1 對心肌缺血大鼠Ⅱ?qū)?lián)ST偏移的影響（±s，n＝10）

注：與正常對照組比較，△P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別∑ST／mV ST 段異常偏移n mV正常對照組0.08 6 0.013±0.020模型組1.75 10 0.228±0.150△腸溶阿斯匹林組1.67 9 0.216±0.140二參湯大劑量組0.15 4 0.021±0.012＃＃二參湯中劑量組0.28 5 0.056±0.080＃二參湯小劑量組0.37 7 0.078±0.040＃

2.2 對心肌缺血大鼠血清及心肌組織興奮性氨基酸的影響見表2。

表2 對心肌缺血大鼠血清及心肌組織興奮性氨基酸的影響（ˉx±s，n＝10）（μmol／g）

2.3 心肌組織病理學(xué)觀察心肌組織切片經(jīng)HE染色，參照Rona等［1］方法對心肌病理損傷程度進(jìn)行分級分析。正常對照組心肌細(xì)胞未見明顯變性與壞死，為0度；模型組見心肌組織呈灶性壞死，偶見灶間相互連接，部分心肌細(xì)胞收縮帶形成，組織病理損傷程度為Ⅱ～Ⅲ度，病理改變多位于心尖部心內(nèi)膜下層；二參湯各組也可見心肌壞死灶的形成，但多為點片狀壞死，病理損傷程度多為Ⅰ度。

3 討論

興奮性氨基酸主要是指谷氨酸（Glutamate，Glu）和天冬氨酸（Asparate，Asp）。心肌缺血時大量釋放的EAA尤其是Glu對心肌的損傷起關(guān)鍵作用。因缺血后ATP降解，依賴能量而重吸收Glu的機制衰竭，影響Glu攝取功能，甚至出現(xiàn)Glu向細(xì)胞外液轉(zhuǎn)移，如此惡性循環(huán)，突觸間隙持續(xù)高濃度的Glu就引起興奮性神經(jīng)毒性［2］。

本研究表明，模型組Glu和Asp含量明顯增加，表明EAA的興奮毒性參與了心肌缺血細(xì)胞損傷和遲發(fā)性神經(jīng)損傷的發(fā)生過程。在研究中，給予二參湯可使血漿和心肌組織Glu、Asp含量降低，表明二參湯可防止EAA的升高［3-4］。

［1］Rosa G.An infact-likemyocardial lesion and other toxicmanifestations produced by isoproterend in the rat［J］.Arch Pathol LabMed，1959，67：43.

［2］陳維洲，芮耀誠.腦血管疾病基礎(chǔ)與臨床研究［M］.濟南：山東科技出版社，1993：12-25.

［3］Muir KW，Lees KR.Clinica experience with excitatory aMino acid antagonist drugs［J］.Stroke，1995，26（3）：5026.

［4］Rogawski MA.The NMDA receptor，NMDA antagonists and epilepsy therapy［J］.Drugs，1992，44（3）：279.

R285.5

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