吳強(qiáng)，孫昕，馮桂梅（吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春130033）

三黃湯對(duì)慢性腎功能不全大鼠血肌苷尿素氮影響的實(shí)驗(yàn)研究

吳強(qiáng)，孫昕，馮桂梅
（吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春130033）

目的通過(guò)觀察慢性腎功能不全大鼠血肌苷（Scr）尿素氮（BUN）的變化，探討三黃湯治療腎功能不全的機(jī)理。方法用三黃湯0.5 g／次加自來(lái)水灌注。每日1次，連用21 d。檢測(cè)Scr、BUN變化。結(jié)果與包全氧化淀粉對(duì)照組相比，治療組血Scr、BUN明顯降低，有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論三黃湯治療慢性腎功能不全有明顯的效果。

三黃湯；慢性腎功能不全；血肌苷；尿素氮；大鼠

三黃湯由大黃、黃芪、銀黃等15味中藥組成，具有清熱解毒、活血化瘀之功能，臨床用于治療慢性腎功能不全。本研究通過(guò)觀察其對(duì)腎功不全大鼠Scr、BUN的變化，探討其治療腎功能不全的機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康Wistar大鼠60只雌雄各半，體重180～200 g。由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥三黃湯每克約相當(dāng)于生藥6.4 g，配方為銀黃15 g，三七粉5 g，黃芪20 g（吉林大藥房供應(yīng)）。腺嘌呤（Adenine）：造模用藥，分子式C5H5N5，分子量135.14，（欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20060078）。包醛氧淀粉（coated aldehyde oxystarch）：天津太平洋化學(xué)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H12021136。

1.3 試劑與儀器肌醉試劑盒：上海綠谷有限公司，批號(hào)：040522。尿素氮試劑盒：上海綠谷有限公司，批號(hào)：040827。日本島津CL-770型生化分析儀。成都儀器廠生產(chǎn)錐板黏度計(jì)。代謝籠；離心機(jī)；恒溫箱。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與制作模型將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（正常組）、預(yù)防組、中藥組（治療組）、包醛氧淀粉組（包醛組）和病理組，動(dòng)物自由攝食。參考Takako Yokozawa的方法［4］制作慢性腎功能不全大鼠模型，預(yù)防組、治療組、包醛組和病理組每只大鼠按150 mg／（kg／d）的劑量將腺嘌呤加自來(lái)水灌胃，1次／d，連用21 d。

2.2 防治方法預(yù)防組大鼠除每日灌服腺嘌呤外，還以三黃湯0.5 g／次加自來(lái)水灌胃，每日2次，連用21 d。治療組大鼠灌服腺嘌呤21 d后，以三黃湯0.5 g／次加自來(lái)水灌胃，正常組和病理組則以等量自來(lái)水灌胃，每日2次，連續(xù)30 d。包醛組大鼠灌服腺嘌呤21 d后，給予包醛氧淀粉混懸液（0.25 g／mL），每只大鼠每日2 mL灌胃，連續(xù)30 d。

2.3 檢驗(yàn)項(xiàng)目與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用代謝籠收集大鼠24 h尿液，考馬斯亮法測(cè)定24 h尿蛋白定量（UPQ），酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA法）測(cè)定24h尿視黃醇結(jié)合蛋白定量（RBP），大鼠眼眶后靜脈叢穿刺取2 mL血液，離心取血清送檢檢驗(yàn)，血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、血漿纖維蛋白原（FI）水平用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，血黏度用黏度計(jì)測(cè)定。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有計(jì)量資料都以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，數(shù)據(jù)用SPSS 7.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料用四格表確切概率法分析。

3 結(jié)果

3.1 各組一般情況正常組大鼠毛色光澤，雙目有神，反應(yīng)靈敏，食欲旺盛，體重增加，大便正常，小便約每日15～20mL，色淡黃。其他組大鼠灌服腺嘌呤3周后，病理組、包醛組、治療組大鼠倦怠少動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，攝食較少，體重增加較慢，甚至體重下降。預(yù)防組大鼠較前述3組大鼠活躍，精神狀態(tài)良好，毛色光澤，攝食量較好。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到51 d時(shí)，病理組大鼠日漸衰弱、消瘦，雙目呆滯，精神萎靡，嗜臥，喜扎堆，反應(yīng)遲鈍加重，皮毛蓬松，無(wú)光澤，有嚴(yán)重脫毛現(xiàn)象，食欲極差。預(yù)防組與治療組大鼠較包醛組表現(xiàn)稍活躍，反應(yīng)較靈活，易動(dòng)，毛色光澤，體重增加較快。病理組、包醛組、治療組大鼠飲水量與排尿量較預(yù)防組與正常組多，尤以病理組多飲、多尿等腎小管功能異常表現(xiàn)為重。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組死亡大鼠數(shù)為：包醛組2只，病理組4只，治療組1只。

3.2 各組對(duì)損傷的腎小管-間質(zhì)及腎功能的影響見(jiàn)表1。

3.3 各組對(duì)血脂和血流動(dòng)力學(xué)的影響見(jiàn)表2。

表1 三黃湯對(duì)腎小管-間質(zhì)病變及腎功能的影響（±s）

表1 三黃湯對(duì)腎小管-間質(zhì)病變及腎功能的影響（±s）

注：各組與正常組比較，1）P＜0.01；預(yù)防組與包醛組比較，2）P＜0.01；治療組與病理組比較，3）P＜0.01；包醛組與病理組比較，4）P＜0.01；預(yù)防組與治療組比較，5）P＜0.01；治療組與包醛組比較，6）P＜0.05。

組別24 h RBP／g 24 h UPQ／g BUN（mmol／L）Scr／（μmol／L）正常組0.078±0.012 13.8±2.11 5.77±0.25 45.01±6.09包醛組7.72±0.861）106.18±11.51）16.54±4.351）114.18±8.541）病理組8.96±1.131）4）1.57±15.521）4）28.12±1.011）4）185.3±24.091）4）預(yù)防組4.87±1.231）2）5）43.37±5.881）2）5）9.7±2.21）2）5）76.75±9.541）2）5）治療組7.01±1.681）3）6）88.3±14.451）3）6）14.02±0.761）3）6）103.65±19.321）3）6）

表2 三黃湯對(duì)各組血黏度和血脂的影響（ˉ±s）

表2 三黃湯對(duì)各組血黏度和血脂的影響（ˉ±s）

注：各組與正常組比較，1）P＜0.01；預(yù)防組與包醛組比較，2）P＜0.01，8）P＜0.05；治療組與病理組比較：3）P＜0.01；包醛組與病理組比較，4）P＜0.01；預(yù)防組與治療組比較，5）P＜0.01；治療組與包醛組比較，6）P＜0.05，7）P＜0.01。

組別全血黏度／（mPa／s）高切低切血漿粘度／（mPa／s）紅細(xì)胞壓積／%FI／（g／L）TH／（mmol／L）TC／（mmol／L）正常組3.856±0.29 6.932±0.56 2.704±0.367 42.87±2.85 3.57±0.25 1.331±0.237 4.286±0.489包醛組6.32±0.531）10.731±0.7321）3.535±0.4191）40.15±3.03 6.1±1.011）1.764±0.2861）6.123±0.2581）病理組7.576±0.5871）4）11.35±0.7561）4）4.158±0.4011）4）36.32±9.791）7.61±1.031）4）1.854±0.4031）7.009±0.4771）4）預(yù)防組4.574±0.3071）2）9.304±0.6431）3.051±0.2982）8）41.02±1.81 3.7±0.642）1.5±0.195 4.876±0.3871）2）治療組5.13±0.4361）3）5）6）9.35±0.491）3）5）6）3.46±0.4391）3）5）6）40.4±2.08 4.79±0.821）3）7）1.72±0.1571）5.56±0.6191）3）5）7）

3.4 結(jié)果分析由表1可以看出，治療后，各組大鼠的24 h尿視黃醇結(jié)合蛋白定量、24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐等指標(biāo)與正常組比較均有顯著差異（P＜0.01），預(yù)防組、包醛組和中藥組大鼠上述指標(biāo)較病理組有下降，預(yù)防組降低最明顯，治療組大鼠指標(biāo)較包醛組降低明顯，提示包醛氧淀粉雖能改善大鼠腎功能，但不如三黃湯療效顯著。

由表2可以看出，治療后大鼠的全血黏度與正常組比較均有顯著差異（P＜0.01），預(yù)防組、包醛組和中藥組大鼠上述指標(biāo)較病理組有下降，預(yù)防組降低最明顯。纖維蛋白原（FI）是影響全血黏度的重要因素，治療后預(yù)防組與正常組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05），包醛組與治療組較病理組指標(biāo)下降明顯（P＜0.05或0.01），治療組優(yōu)于包醛組。提示三黃湯能改善慢性腎功能不全大鼠的血黏度。正常情況下，血黏度指標(biāo)越高，紅細(xì)胞壓積相應(yīng)增加，在治療后，各組與正常組比較紅細(xì)胞壓積變小，病理組下降明顯（P＜0.01），其余各組間差異不大（P＞0.05），分析與腎功能不全大鼠貧血有關(guān)。三酰甘油和膽固醇在治療后各組之間兩兩比較，除三酰甘油在預(yù)防組和正常組比較無(wú)明顯差異外（P＞0.05），各組與正常組比較均有顯著差異（P＜0.05或0.01），提示三黃湯能顯著改善大鼠的高脂血癥。

4 討論

4.1 腎功能不全動(dòng)物模型的建立大鼠被灌服腺嘌呤后，在體內(nèi)經(jīng)消化道吸收入血，在肝內(nèi)經(jīng)黃嘌呤氧化酶的作用轉(zhuǎn)變2，8～二經(jīng)基腺嘌呤，從腎小球?yàn)V過(guò)后，在腎小管內(nèi)形成針狀結(jié)晶物沉積，阻塞、壓迫腎小管，引起腎小管上皮細(xì)胞損傷及腎間質(zhì)肉芽腫性炎癥反應(yīng)，間質(zhì)中出現(xiàn)異物肉芽腫、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)以及纖維化增生［1-2］，出現(xiàn)腎小管間質(zhì)纖維化，使腎功能受到損害。同時(shí)引起高脂血癥、蛋白尿等病理改變。目前研究認(rèn)為慢性腎小管-間質(zhì)病變，中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在間質(zhì)中浸潤(rùn)，并分泌大量的細(xì)胞因子，刺激成纖維細(xì)胞的增殖和膠原的合成，使腎間質(zhì)纖維化，使小管間毛細(xì)血管狹窄，血管阻力增加，腎血流量減少，導(dǎo)致進(jìn)行性腎功能損害［3-4］。而損傷和再生的腎小管上皮細(xì)胞也能合成并分泌大量的腫瘤壞死因子（TNFa），促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)間質(zhì)纖維化［5］。此外，腺嘌呤會(huì)引起黃嘌呤氧化酶介導(dǎo)的自由基增加，使生物膜受到攻擊，也導(dǎo)致腎實(shí)質(zhì)損害。近年研究表明，高脂血癥與高黏血癥相關(guān)，也是引起腎功能持續(xù)惡化的重要因素，降低過(guò)高血脂與血黏度，可改善腎內(nèi)微循環(huán)，有助于延緩腎間質(zhì)纖維化。

本實(shí)驗(yàn)大鼠給予腺嘌呤后，大鼠倦怠少動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，日漸衰弱、消瘦，雙目呆滯，精神萎靡，嗜臥，喜扎堆，皮毛蓬松，無(wú)光澤，有嚴(yán)重脫毛現(xiàn)象，食欲極差。有多飲、多尿等腎小管功能異常表現(xiàn)。

4.2 三黃湯方劑療效評(píng)價(jià)中醫(yī)理論治療慢性腎功能不全主要以補(bǔ)氣活血，健脾益腎為治療原則，因此本實(shí)驗(yàn)選用黃芪、三七、銀黃組成方劑，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果表明治療組大鼠一般情況優(yōu)于包醛組，血尿素氮、肌酐含量也低于包醛組，預(yù)防組的腎功能指標(biāo)低于治療組與包醛組，并有顯著性差異（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)完成時(shí)，治療組上述指標(biāo)均低于病理組（P＜0.01）。包醛組上述指標(biāo)低于病理組（P＜0.01）。預(yù)防組明顯低于治療組（P＜0.01）。血液流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，病理組較包醛組為高，病理組和包醛組均較預(yù)防組和治療組為高（P＜0.05或0.01）。治療組較預(yù)防組高（P＜0.01）。

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R285.5

A

1007－4813（2010）05－0646－02

2010－07－09）

吉林省科技廳基金項(xiàng)目（2007科技字0781號(hào)）。

吳強(qiáng)（1959－），男，醫(yī)學(xué)碩士，副主任醫(yī)師。研究方向：內(nèi)科臨床。