陳燕超，胡巖，王詩涵，王永生*（.長春中醫(yī)藥大學，吉林長春307；.遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧沈陽003）

GC-MS法對哈蟆油中甾體類化合物的分析

陳燕超1，胡巖1，王詩涵2，王永生1*
（1.長春中醫(yī)藥大學，吉林長春130117；2.遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧沈陽110032）

目的測定哈蟆油中甾體類化合物的成分及含量。方法將粉碎后的藥材用皂化法預處理，以乙醚萃取未皂化物——甾體類成分，水浴蒸干，利用氣質(zhì)聯(lián)用色譜法對甾體類化合物進行鑒別及含量測定。結(jié)果哈蟆油中共鑒定出8個化合物，即膽固醇（32.236%）、膽甾-3-酮（0.925%）、膽甾-3，5二烯-7-酮（2.811%）、菜油甾醇（0.611%）、膽甾-4-烯-3-酮（7.657%）、膽甾-4，6-二烯-3-酮（1.395%）、豆甾醇-22，23-二氫（0.316%）、膽甾-8-烯-7-酮（0.768%）。結(jié)論本法可用于哈蟆油中甾體類化合物的成分與含量的測定研究。

哈蟆油；甾體類；氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

哈蟆油（Oviductus Ranae）是蛙科動物中國林蛙（Rana temporaria chensinesis David）雌蛙的干燥輸卵管。始載于明代《本草綱目》，其性平，味甘、咸，入肺、腎經(jīng)，具有補腎益精、養(yǎng)陰潤肺之功效。臨床用于身體虛弱、病后失調(diào)、精神不足、心悸失眠、盜汗不止、癆嗽咳血等癥。哈蟆油為名貴的滋補品，主產(chǎn)于東北三省，尤以吉林省為主，目前，哈蟆油已發(fā)展成為我國東北長白山區(qū)域特產(chǎn)的一味道地藥材，因其具有極高的經(jīng)濟價值，作為國家北藥基地的吉林省已將其列為中藥材規(guī)范化生產(chǎn)基地（GAP）首批的10個品種之一。近年來，哈蟆油中甾體類化合物已被試驗證實為哈蟆油中具有獨特藥理作用的一類化合物，因此開展對哈蟆油中甾體類化合物的研究具有重大意義［1－3］。本文利用氣相色譜-質(zhì)譜法對哈蟆油中甾類化合物進行初步研究，報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑安捷倫7890／5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫科技有限公司），JJ600型精密電子天平（美國雙杰兄弟有限公司），高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

哈蟆油藥材經(jīng)本校中藥鑒定教研室姜大成教授鑒定為蛙科動物中國林蛙Rana temporaria chensinensis David.雌蛙的輸卵管，經(jīng)采制干燥而得，符合《中國藥典》2005年版一部哈蟆油項下規(guī)定。

1.2 皂化樣品的制備將哈蟆油藥材粉碎，過60目篩，精密稱取10 g樣品，加氫氧化鉀7 g（適量蒸餾水溶解），90%乙醇40 mL振搖混勻，皂化2 h。皂化液放冷后加蒸餾水50 mL稀釋，用乙醚萃取4次，收集乙醚層于水浴鍋上揮干，用甲醇定容，備用。

1.3 氣相色譜和質(zhì)譜條件色譜條件：采用程序升溫：初始溫度60℃，保留1 min，以18℃／min升至250℃，保留5 min，再以2℃／min升至280℃，保留20 min；DB25石英毛細管柱（30 m×0.25 mm），進樣口溫度為280℃，氣化室的溫度為270℃，載氣為氦氣，分流比為5∶1。

質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度：250℃，轟擊電子能量70 eV，質(zhì)量掃描范圍35～500amu。

2 結(jié)果與分析

將皂化后的供試品溶液按照上述色譜條件進行試驗，結(jié)果從哈蟆油藥材中共分離鑒定出8個化合物（化合物編號見圖1），通過NIST譜庫檢索，對該8種化合物進行鑒別并利用面積歸一法對其進行含量測定研究。氣相色譜結(jié)果見圖1，分析結(jié)果見表1。

圖1 哈蟆油藥材皂化后的氣相色譜圖

表1 皂化后的哈蟆油藥材化學成分及相對含量分析表

3 討論

本研究通過對哈蟆油藥材進行皂化處理，利用氣相色譜-質(zhì)譜法對處理后的哈蟆油藥材進行分析，從中共分離鑒定出8種甾體類化合物。其中，膽甾-3-酮（峰號2）、膽甾-3，5二烯-7-酮（峰號3）、菜油甾醇（峰號4）、膽甾-4-烯-3-酮（峰號5）、膽甾-4，6-二烯-3-酮（峰號6）、豆甾醇-22，23-二氫（峰號7）、膽甾-8-烯-7-酮（峰號8）為首次從哈蟆油藥材中分離得到。

本實驗采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)分析了哈蟆油中甾體類的成分及其含量，操作簡單方便，可信度高，為日后對哈蟆油藥材中甾體類化合物的分離鑒定提供了新的方法和手段。

［1］范玉林.蛤士蟆油成分研究的進展［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學學報，1996，18（3）：105.

［2］譚任祥.甾體化學［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2009：98.

［3］郭澄.超臨界萃取螻蛄脂肪酸成分及其氣相色譜-質(zhì)譜分析［J］.分析化學研究報告，2006，9（34）：15-18.

R966

A

1007－4813（2010）05－0660－02

2010－07－07）

吉林省科技發(fā)展計劃項目（課題編號：20080915）。

陳彥超（1985－），碩士研究生。研究方向：中藥有效成分與應用開發(fā)研究。

*通信作者：王永生，博士，教授。Tel：0431-86172298 E-mail：mikewangwys＠163.com。