吳茜玉

廣東省中山市阜沙鎮(zhèn)人民醫(yī)院（528434）

肝纖維化是指肝臟內(nèi)部彌漫的、細(xì)胞外基質(zhì)沉淀，是細(xì)胞外基質(zhì)合成過多或降解不足的直接后果。肝纖維化是一切慢性肝病的病理學(xué)基礎(chǔ)，是形成肝硬化的必經(jīng)階段。大量研究表明，早期肝纖維化是可以逆轉(zhuǎn)的[1]。阻止肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展，是防止慢性肝臟疾病向肝硬化和肝功能衰竭過渡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年來西醫(yī)藥針對(duì)肝纖維化發(fā)展的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行的抗纖維化治療取得了一定的進(jìn)展，但是這些藥物由于療效不穩(wěn)定或不良反應(yīng)大，臨床應(yīng)用少。因此，從天然藥物中提取抗纖維化的藥物已成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。中藥的多成分、多途徑、多層次、多靶點(diǎn)的獨(dú)特藥理作用，使其在抗纖維化治療中發(fā)揮越來越重要的作用[2]。眾多研究表明，肝纖維化治療中，中藥能有效改善患者的癥狀、體征及肝功能。降低肝纖維化的血清學(xué)指標(biāo)，具有很好的保肝，抗纖維化作用[3]。中藥雞骨草藥用干燥全株，有清熱利濕、解毒止痛的功效，對(duì)急慢性肝炎，肝硬化腹水，胃痛等療效顯著。本研究意在觀察復(fù)方雞骨草膠囊對(duì)大鼠肝纖維化的治療效果，提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物

SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，清潔級(jí)，由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，飼料由廣西醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品

雞骨草膠囊（玉林制藥廠生產(chǎn)，每粒0.5g，每克藥粉相當(dāng)于8.64g原藥材，批號(hào)625110），實(shí)驗(yàn)時(shí)，膠囊內(nèi)容物用蒸餾水分別將其配成高、中、低3個(gè)濃度的混懸液，用于大鼠灌胃；秋水仙堿（西雙版納股份有限責(zé)任公司提供，批號(hào)060717）。

1.3 試劑

門冬氨基酸轉(zhuǎn)移酶（AST，長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2006029）；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT，四川邁克科技有限公司出品，批號(hào)0903031）；白蛋白（ALB，四川邁克科技有限公司出品，批號(hào)1006141）；總蛋白（TP，四川邁克科技有限公司出品，批號(hào)1106161）；丙二醛試劑（MDA，南京建成生物工程研究所第一分所提供，批號(hào)20070122）；超氧化歧化酶（SOD，南京建成生物工程研究所第一分所提供，批號(hào)20070327）。

1.4 儀器

漩渦混合器XW-80A（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠生產(chǎn)）；722分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；生產(chǎn)離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

1.6 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)用大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、秋水仙堿對(duì)照組（0.4mL/kg）、雞骨草膠囊高劑量（2g/kg）、中劑量（1g/kg）、低劑量（0.5g/kg）組。除了正常對(duì)照組外，其余各組每只大鼠腹腔注射經(jīng)過濾、滅菌處理的新鮮豬血清0.5mL，每周2次。以由79.5%單純玉米粉加20%豬油，0.5%膽固醇混合飼料和30%乙醇為飲料，飼養(yǎng)動(dòng)物。正常對(duì)照組飼以正常飼料和普通飲用水。第4周在正常組和模型組中隨機(jī)取5只作肝病理學(xué)檢測(cè)，判斷肝纖維化模型是否成立。如模型成立則開始給藥治療。1次/d，連續(xù)4周，每周稱體質(zhì)量1次，給藥期間繼續(xù)給予豬血清，飼料和30%乙醇并觀察有無(wú)死亡情況。末次給藥結(jié)束后稱體質(zhì)量，眼球取血分離血清，觀察指標(biāo)有：①大鼠肝纖維化的病理學(xué)改變情況；病理改變?cè)u(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：肝細(xì)胞正常，肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，評(píng)為1分；肝細(xì)胞水變性，評(píng)為2分；中度脂肪變性，評(píng)為3分；早期肝纖維化，評(píng)為4分；晚期肝纖維化，評(píng)為5分；肝硬化，評(píng)為6分；②血清學(xué)指標(biāo)：AST、ALT；③蛋白質(zhì)及其他指標(biāo)：ALB、TP、MDA、SOD。

2 結(jié) 果

共有56只大鼠完成實(shí)驗(yàn)周期。大鼠腹腔注射豬血清，4周后，在正常對(duì)照組和模型對(duì)照組中隨機(jī)取5只大鼠作肝病理學(xué)檢測(cè)，結(jié)果表明模型對(duì)照組大鼠已出現(xiàn)肝纖維化。

2.1 對(duì)豬血清所致肝纖維化大鼠肝臟病理學(xué)改變的影響

給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠肝臟出現(xiàn)纖維化改變，見圖1。雞骨草高劑量組對(duì)豬血清引起的肝臟組織病理學(xué)改變有明顯的保護(hù)作用，見表1。

2.2 對(duì)豬血清所致肝纖維化大鼠血清學(xué)中AST、ALT的影響

結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鼠血清中的AST、ALT明顯升高，雞骨草高劑量和中劑量組可使大鼠血清升高的AST，ALT明顯降低。而雞骨草低劑量組大鼠血清AST，ALT改善不明顯，見表2。

2.3 對(duì)豬血清所致肝纖維化大鼠蛋白質(zhì)及MDA、SOD的影響

發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組大鼠血清中的TP、ALB降低，雞骨草高劑量組、中劑量組、低劑量組可使TP、ALB有所提高。模型對(duì)照組大鼠的MDA含量增加，SOD含量減少，雞骨草高劑量和中劑量組均可使其MDA水平降低，SOD水平升高。與模型對(duì)照組比較有顯著性意義，見表3。

圖1 不同組肝臟組織病理學(xué)改變

表1 雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠肝臟組織病理學(xué)的影響

表2 雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠血清AST、ALT的影響

表3 雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠血清TP、ALB以及MDA、SOD的影響

3 討 論

豬血清以其中的白蛋白作為異種抗原物質(zhì)[4]血清，通過免疫反應(yīng)活化庫(kù)普弗細(xì)胞而引發(fā)肝纖維化[5]，豬血清誘導(dǎo)的免疫性肝纖維化與人類肝纖維化的形成原因有一定的相似之處，且較四氯化碳所致肝纖維化持久[6,7]。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，慢性肝病患者部分血清生化指標(biāo)與肝臟病理分期有顯著相關(guān)性[8-11]。AST、ALT是用來診斷肝實(shí)質(zhì)損害的主要酶類，正常血清中此兩酶活力很低，其活性的高低變化與肝細(xì)胞受損的程度相一致，則血清中AST、ALT的活力測(cè)定可靈敏的反映肝功能的變化情況，因此AST、ALT常作為肝功能檢測(cè)的靈敏指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)表明，雞骨草膠囊高劑量，中劑量可明顯降低肝纖維化大鼠血清AST、ALT的活力，說明雞骨草膠囊可保護(hù)肝細(xì)胞，減輕肝損傷。

肝臟是合成蛋白質(zhì)的場(chǎng)所，肝功能異常時(shí)，白蛋白含量降低，總蛋白含量不變、降低或升高。因此，蛋白質(zhì)的含量在一定程度上反應(yīng)了肝功能的變化情況。實(shí)驗(yàn)表明，模型組的總蛋白下降，雞骨草膠囊高劑量組，中劑量能提高總蛋白的含量，改善肝功能。

MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量可反應(yīng)脂質(zhì)過氧化的損傷程度。SOD是自由基清除劑，可抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，近年來研究表明，超氧陰離子、MDA等可刺激成纖維細(xì)胞膠原mRNA的表達(dá)和膠原的產(chǎn)生，氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化是引起肝細(xì)胞損傷與肝星狀細(xì)胞活化的重要機(jī)制[12]。本實(shí)驗(yàn)表明，模型組的MDA明顯增高，SOD明顯降低，與正常對(duì)照組比較有明顯的差異，證實(shí)了脂質(zhì)過氧化在肝纖維化形成過程中的重要作用。其中，雞骨草膠囊高劑量明顯降低MDA含量，雞骨草中劑量能有效的降低MDA的含量；雞骨草膠囊的高、中、低劑量組都能顯著提高SOD含量，且無(wú)劑量上的差別。表明雞骨草膠囊能很好的降低MDA含量，提高SOD的含量，減輕脂質(zhì)過氧化的損傷，保護(hù)肝臟。同時(shí)，雞骨草全草主要含相思子堿、甾醇、化合物、皂苷、黃酮類、大黃酚、大黃素、甲醚、氨基酸、膽堿、蒽醌類、糖類等化合物[13,14]。其主要有效活性成分為黃酮類和生物堿類物質(zhì)[15]。毛雞骨草主要成分為脂肪酸、三萜皂苷、甾體和異黃酮類化合物[16]。以上大部分化學(xué)成分具有抗氧合作用，穩(wěn)定細(xì)胞膜，從而維護(hù)肝細(xì)胞免受氧化損傷所造成肝纖維化。實(shí)驗(yàn)也證明，雞骨草膠囊能改善肝功能，對(duì)肝損傷具有明顯的保護(hù)作用，能顯著減輕肝纖維化程度。

[1]Taub R.Liver regeneration:from myth to mechanism [J].Nat rev Mol Cell Biol,2004,5(10):836-847.

[2]劉平.中醫(yī)藥在抗腫瘤纖維化治療中的優(yōu)勢(shì)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2002,22(6):328.

[3]衣蕾,楊俊生.中藥治療肝纖維化研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2006,13(7):90-93.

[4]Wu J,Norton PA..Animal model of liver fibrosis[J].Scand J Gastroenterol,1996,31(12):1137-1143.

[5]Bhunchet E,Eishi Y,Wake K.Contribution of immune response to the hepatic fibrosis induced by porcine serum[J].Herpetology,1996,23(4):811-817.

[6]Koziel MJ.The immunopathogenesis of HBV infection[J].Antivir Ther,1998,3(Suppl 3):13-24.

[7]王寶恩,王志富,殷蔚荑等.實(shí)驗(yàn)性免疫性肝纖維化模型的研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,1989,69(9):503-505.

[8]Chen YP,Zhu YE,Feng XR,et al. Analyses of histology associated non-traumatic indexes of chronic hepatitis B[J]. J First Military Med Univ,2004,24(10):1181-1183.

[9]池曉霞,陳劍雄,熊鷹.血清PAB,CHE,TBA和ALT的含量變化與肝炎病理分級(jí)的關(guān)系探探討[J].放射免疫學(xué)雜志,2005,18(3):223-225.

[10]Chi XX,Chen JX,Xiong Y,et a1.Relationship of serum PAB,CHE,TBA and ALT level with pathological grading of hepatitis[J].J Radioimmunol,2005,80(8):223-225.

[11]Mei XP,Jing XM,Li J,et al.To probe reaction between different damages of liver tissue in patients and quantities of IL-6,IL-8,TNF-2 in serum with hepatitis B[J].Chin J Modem Med,2006,16(3):395-397.

[12]Baroni G,Ambrosio L,Ferretic G,et al.Fibrogenic effect of oxidative stress on rat hepatic satellite cells [J].J Hepatol,1998,2(2):720-726.

[13]黃榮韶,羅永明,胡彥等.毛雞骨草總皂甙含量的積累規(guī)律研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,37(4):391.

[14]史海明,溫晶,屠鵬飛.雞骨草的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2006,37(11):1610.

[15]程瑛琨,陳勇,于璐等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選雞骨草總黃酮和總生物堿的提取工藝[J].西北藥學(xué)雜志,2007,22(2):61.

[16]溫晶,史海明,屠鵬飛.毛雞骨草的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2006,37(5):658.