張婷婷 趙 飛 潘曉亮 崔艷霞 潘 奇

仔豬腹瀉、痢疾是一種由多種病原因素引起的疾病。較常見的癥狀有仔豬黃痢、仔豬白痢、早期斷奶腹瀉綜合征等，由于該病致病誘因較多，給該病的預(yù)防和治療帶來很大的困難。豬場(chǎng)在生產(chǎn)實(shí)踐中多用抗生素、磺胺等藥物治療，但常因用藥不當(dāng)，而使療效不佳。長期使用抗生素和抗菌藥物，造成諸如細(xì)菌抗藥性、耐藥基因轉(zhuǎn)移、水產(chǎn)品中藥物殘留等不良后果，直接或間接威脅人類健康，而且由于長期濫用抗生素引起水環(huán)境污染，導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境惡化，生態(tài)平衡失調(diào)。因此，研制新型的抗菌材料已迫在眉睫。

膨潤土含有硅、鉀、鈣、鈉、鐵、鎂、銅、鋁、錳、鋅、鈷、氯等，是畜禽所必需的常量和微量元素。已查明,膨潤土有些元素還是生命活動(dòng)中酶、激素和各種活性物質(zhì)的重要組成部分，它將會(huì)成為生產(chǎn)綠色肉食品的新型飼料添加劑。膨潤土不僅對(duì)畜禽的肉質(zhì)無污染、無藥殘，而且對(duì)人體無危害。

1 材料與設(shè)計(jì)

1.1 試驗(yàn)材料

載銅膨潤土：由浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所提供，銅含量為3.9%，CSN平均粒徑為41 nm。硫酸銅：由石河子大學(xué)飼料添加劑廠提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

由新疆克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開發(fā)有限責(zé)任公司養(yǎng)豬場(chǎng)提供。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物分組

選擇（35±2）日齡的杜洛克×大白豬和杜洛克×斯格豬斷奶仔豬共兩個(gè)品種48頭，每一品種24頭，按照體重相近、公母各半、同一圈中每頭仔豬盡可能來自不同母豬的原則，采用完全隨機(jī)化區(qū)組設(shè)計(jì)，分三組（每組8頭）。設(shè)Ⅰ對(duì)照組（基礎(chǔ)日糧，含Cu 10 mg/kg，以硫酸銅的形式添加）；Ⅱ載銅膨潤土組（基礎(chǔ)日糧+Cu 10 mg/kg，以載銅膨潤土的形式添加）；Ⅲ高銅組（BD+Cu 180 mg/kg，以硫酸銅的形式添加）。試驗(yàn)豬采用群飼，自由采食和飲水，試驗(yàn)前對(duì)豬舍進(jìn)行消毒，預(yù)試期6 d，正試期45 d。平均體重差異不顯著（P＞0.05）。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期：仔豬于克拉瑪依試驗(yàn)場(chǎng)代謝實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。試驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)室和代謝籠經(jīng)反復(fù)沖洗，用堿水和百毒殺消毒，最后對(duì)圈舍熏蒸消毒 (每立方米用25 ml甲醛和25 g高錳酸鉀加水12.5 ml，密閉門窗，熏蒸24 h)。仔豬35～40日齡采用母豬帶仔基礎(chǔ)料誘飼，仔豬于40日齡轉(zhuǎn)入代謝籠中，每個(gè)代謝籠飼喂8頭。自由飲水和自由采食。前兩周每天定時(shí)飼喂3次(10:00、14:00、20:00)，以后每天飼喂 2 次(10:00、20:00)，每次以吃飽后略有剩余為度。同時(shí)室溫應(yīng)保持在26～28℃，并保持豬舍內(nèi)清潔衛(wèi)生和空氣流通，定期消毒。

1.5 試驗(yàn)飼糧組成（見表1、表2）

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧組成和營養(yǎng)水平

表2 復(fù)合預(yù)混料（%）

2 試驗(yàn)器材與方法

2.1 試驗(yàn)器材

生物顯微鏡 OLYMPUS CX21，4℃冰箱，KW-1型控溫儀，電熱恒溫培養(yǎng)箱 64-5，電子天平JA3003N，手提式壓力蒸汽滅菌器YXQSG46.280，培養(yǎng)皿，載玻片，酒精燈，接種針，電熱套。

2.2 樣品采集

在正試期第15、30、45 d隨機(jī)采集各組健康的試驗(yàn)仔豬(每組6頭)的糞便，然后在4℃冰箱冷凍放置待測(cè)。在無菌操作臺(tái)上進(jìn)行糞便中微生物（大腸桿菌和沙門氏菌）檢測(cè)。

2.3 培養(yǎng)基

伊紅美藍(lán)瓊脂和S-S瓊脂自備（調(diào)制參考李健強(qiáng)等主編的獸醫(yī)微生物學(xué)試驗(yàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)，1999）。①伊紅美藍(lán)瓊脂配制如下：蛋白胨1 g；2%伊紅-Y水溶液2 ml；磷酸氫二鉀 2 g；乳糖 1 g；1%美藍(lán)水溶液 0.65 ml；瓊脂 1.8 g；蒸餾水 100 ml；pH 值 7.1～7.3。②S.S瓊脂配制如下：牛肉膏 0.5 g；蛋白胨 0.5 g；瓊脂 1.3 g；乳糖1 g；膽鹽 1 g；檸檬酸納 0.85 g；硫代硫酸納 0.85 g；檸檬酸鐵 0.1 g；1%中性紅水溶液 0.25 ml；0.1%煌綠水溶液 0.033 ml；蒸餾水 100 ml；pH=7.2。

2.4 方法與步驟

在超凈工作臺(tái)中分別迅速取糞便內(nèi)容物各1 g置一次性試管中，加入0.9%生理鹽水9 ml，在用玻璃棒攪拌5 min，連續(xù)兩次，使樣品充分搖勻，此液為10-1稀釋液，然后再吸取1 ml置于盛有9 ml的0.9%生理鹽水一次性試管中進(jìn)行10-2稀釋，攪拌5 min后，再依次進(jìn)行10-3倍稀釋。分別將不同稀釋度的稀釋液涂抹于各培養(yǎng)基上。需氧菌37℃有氧培養(yǎng)18～24 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，并換算成log10CFU/ml菌液。即用每毫升原菌液活菌數(shù)表示；各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù)。

公式：每毫升原菌液活菌液=同一稀釋液三個(gè)以上重復(fù)平皿菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×10（0.1 ml加入培養(yǎng)基中）

2.5 細(xì)菌的鑒定

根據(jù)菌群和細(xì)胞形態(tài)、革蘭氏染色、耗氧性來鑒定這兩種細(xì)菌。

細(xì)菌的鑒定：Ⅰ.大腸桿菌在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB)上呈黑色隆起帶金屬閃光的菌落，表面光滑，邊緣整齊，有光澤；革蘭氏染色為陰性；顯微鏡下呈兩端鈍圓的短桿狀；需氧。Ⅱ.沙門氏菌在志賀氏-沙門氏瓊脂培養(yǎng)基(S-S)上呈乳黃色隆起的中等大菌落，表面光滑，邊緣整齊；革蘭氏染色為陰性；顯微鏡下呈短桿狀，菌端多發(fā)尖；需氧。

同時(shí)將上述糞樣進(jìn)行pH值測(cè)定。糞便中內(nèi)容物pH值用精確pH試紙檢測(cè)。

2.6 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 11.5對(duì)各項(xiàng)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素分析，取LSD值對(duì)各組間平均數(shù)進(jìn)行多重比較，以P＜0.05(差異顯著)作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果與分析

3.1 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×大白豬糞便中大腸桿菌、沙門氏菌及菌液pH值的影響（見表3）

3.1.1 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×大白豬糞便中大腸桿菌的影響

載銅膨潤土組與對(duì)照組相比，大腸桿菌菌落數(shù)增加了1%，差異不顯著（P＞0.05）。高銅組與對(duì)照組相比，大腸桿菌菌落數(shù)降低了2.49%，差異顯著（P＜0.05）；與載銅膨潤土組相比，大腸桿菌菌落數(shù)降低了3.45%，差異顯著（P＜0.05）。

表3 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×大白豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌及其菌液中pH值的影響

3.1.2 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×大白豬糞便中沙門氏菌的影響

載銅膨潤土組與對(duì)照組相比，沙門氏菌菌落數(shù)增加了0.83%，差異不顯著（P＞0.05）。高銅組與對(duì)照組相比，沙門氏菌菌落數(shù)降低了2.67%，差異顯著（P＜0.05）；與載銅膨潤土組相比，沙門氏菌菌落數(shù)降低了3.48%，差異顯著（P＜0.05）。

3.1.3 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×大白豬糞便中菌液pH值的影響

載銅膨潤土組與對(duì)照組相比，菌液中pH值增加了3.03%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對(duì)照組和載銅膨潤土組相比，菌液中pH值分別增加了8.42%和5.23%，差異顯著（P＜0.05）。

3.2 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌、沙門氏菌及菌液pH值的影響（見表4）

表4 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌及其菌液中pH值的影響

3.2.1 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌的影響

載銅膨潤土組與對(duì)照組相比，大腸桿菌菌落數(shù)降低了8.02%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對(duì)照組相比，大腸桿菌菌落數(shù)降低了3.86%；與載銅膨潤土組相比，大腸桿菌菌落數(shù)增加了4.53%，差異顯著（P＜0.05）。

3.2.2 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×斯格豬糞便中沙門氏菌的影響

載銅膨潤土組與對(duì)照組相比，沙門氏菌菌落數(shù)降低了9.67%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對(duì)照組相比，沙門氏菌菌落數(shù)降低了4.37%，與載銅膨潤土組相比，沙門氏菌菌落數(shù)增加了5.87%，差異顯著（P＜0.05）。

3.2.3 載銅膨潤土對(duì)杜洛克×斯格豬糞便中菌液pH值的影響

載銅膨潤土組與對(duì)照組相比，菌液中pH值降低了5.30%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對(duì)照組相比，菌液中pH值降低了2.09%；與載銅膨潤土組相比，菌液中pH值增加了3.39%，差異顯著（P＜0.05）。

4 討論

膨潤土的可膨脹性層狀結(jié)構(gòu)和非均勻性的電性分布，可以對(duì)消化道內(nèi)的一些病毒、病菌和毒素產(chǎn)生較強(qiáng)的選擇性吸附作用，同時(shí)能加強(qiáng)腸胃粘膜屏障，保持腸道微生物生態(tài)平衡。由于膨潤土具有吸附性，所以它能夠吸附飼料中和進(jìn)入動(dòng)物腸胃中的有害元素、凈化動(dòng)物腸胃環(huán)境，對(duì)動(dòng)物排泄物起到干燥、吸附和除臭等作用。一定濃度的膨潤土（1%～3%）可以用作動(dòng)物腸胃的吸附劑，用于清除動(dòng)物體內(nèi)的重金屬和放射性同位素。

膨潤土是一種雙八面體層狀結(jié)構(gòu)的天然納米級(jí)鋁硅酸鹽礦物，具有良好的分散性與陽離子交換能力，十分適合于用作各種無機(jī)抗菌劑的載體。通過吸附、離子交換反應(yīng)把抗菌性銅離子植入蒙脫石晶格，制成載銅蒙脫石，并使蒙脫石在搭載銅離子后表面剩余正電荷，從而提高其吸附帶負(fù)電荷的細(xì)菌的能力；另一方面，利用蒙脫石巨大的比表面積及其緩釋效應(yīng)，通過抗菌性銅離子的溶出而具有很強(qiáng)的吸附、殺菌能力。

本試驗(yàn)的研究結(jié)果表明：①高銅對(duì)杜洛克×大白豬的影響效果沒有杜洛克×斯格豬好，這可能與豬的品種及其對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的利用程度有關(guān)，具體原因還有待進(jìn)一步研究。②載銅膨潤土組對(duì)杜洛克×斯格豬而言效果好于杜洛克×大白豬，主要原因是杜洛克×斯格豬吸收營養(yǎng)的水平及其對(duì)病原菌的抵抗力要好于杜洛克×大白豬，具體詳細(xì)的機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

載銅膨潤土的抗腹瀉作用在于其生物利用度的提高，以及能被粘膜很好吸收利用，保護(hù)粘膜，進(jìn)而使腸道內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，有益菌數(shù)量增加。此外，因菌液中的pH值處于中性偏酸，它相對(duì)于中性環(huán)境下細(xì)菌的生存能力較弱些。然后，因杜洛克×斯格豬較杜洛克×大白豬在生長性能方面有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，即生長發(fā)育快，飼料報(bào)酬高，發(fā)病率低，因而對(duì)病原菌的抵抗力較高。但是，對(duì)于杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌含量較少，不僅與豬的品種及其對(duì)營養(yǎng)價(jià)值的利用有關(guān)，而且還與豬所處的環(huán)境密不可分，具體確切的原因還有待進(jìn)一步研究。

14篇，刊略，需者可函索）