張群燕,蔡 輝,董曉蕾,郭郡浩,商 瑋,張永文

左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)是長期壓力負(fù)荷增加的結(jié)果,近年來研究表明,高血壓合并左室肥厚者其猝死的發(fā)生率明顯增高,心肌缺血、心律失常、心力衰竭的發(fā)生率也相應(yīng)增加,左室肥厚現(xiàn)已作為一項(xiàng)獨(dú)立的心血管病危險(xiǎn)因子,它與心腦血管病的發(fā)生率和死亡率密切相關(guān),嚴(yán)重影響預(yù)后[1]。因此,如何逆轉(zhuǎn)或減輕左室肥厚對充血性心力衰竭的防治具有重要的臨床價(jià)值。本研究在長期進(jìn)行中藥對左室肥厚干預(yù)的基礎(chǔ)上,以卡托普利為對照研究,現(xiàn)主要從左室重量指數(shù)(LVMI)、左室心肌病理形態(tài) HE染色、左室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等指標(biāo)角度,將對照組卡托普利對壓力負(fù)荷增加大鼠致左室肥厚的干預(yù)作用報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 動物：雄性 SD大鼠 36只,體重180 ～ 200 g。藥物：卡托普利,12.5 mg/片 ,中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn),批號 9912031J。

1.2 造模方法 參考 Doering等[2]的方法,2%戊巴比妥鈉 40 mg/kg腹腔注射麻醉,固定,剃毛,常規(guī)消毒,分層打開腹腔,在左腎上緣分開后腹膜等軟組織,暴露腹主動脈,并在雙腎動脈上方分離腹主動脈,用銀夾造成腹主動脈狹窄(銀夾內(nèi)徑 0.7 mm),分層關(guān)閉腹腔。

1.3 分組處理 隨機(jī)分為 3組,所有動物均常規(guī)喂養(yǎng)。假手術(shù)組(12只)：手術(shù)時(shí)只分離腹主動脈,不用銀夾縮窄,手術(shù) 4周后,雙蒸水灌胃 1.5 ml/100 g體重,1次 /日,連續(xù) 4周。模型組(12只)：造模 4周后,雙蒸水灌胃 1.5 ml/100 g體重,1次 /日,連續(xù)4周?？ㄍ衅绽M(12只)：造模 4周后,卡托普利灌胃 100mg/kg(相當(dāng)于成人 80～160倍),1次 /日,雙蒸水稀釋,連續(xù) 4周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 左室重量指數(shù) 斷頭處死所有動物,迅速取出心臟,沿房室交界處去除左右心房及大血管,去除右心室游離壁,將左心室加室間隔準(zhǔn)確稱重作為左室重量,并計(jì)算按照左室重量(mg)/體重(g)公式即左室重量指數(shù)(‰)作為左室肥厚的指標(biāo)[3]。

1.4.2 左室心肌病理形態(tài) HE染色 常規(guī)石蠟切片采用 HE染色,經(jīng)過脫蠟、染色、脫水、二甲苯透明及中性樹膠封固等步驟,在光鏡下觀察[4]。

1.4.3 左室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu) 將大鼠迅速處死后,取左室心肌固定于 pH 7.4二甲砷酸鈉配置的2%戊二醛溶液內(nèi),取材經(jīng)心肌緩沖液沖洗后再固定于 10%鋨酸溶液中,按電鏡常規(guī)技術(shù)脫水、包埋、切片,經(jīng)醋酸鈉與枸櫞酸鉛雙重染色,在日本電子1200EX透射電鏡下觀察并照像。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用 SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,計(jì)量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。實(shí)驗(yàn)組和對照組之間比較采用兩獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn),以P≤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 共有 8只死亡,死后均尸體解剖。假手術(shù)組 1只因腸梗阻死于術(shù)后第 4天。模型組有3只死于術(shù)后 2天之內(nèi),經(jīng)證實(shí)均系死于急性心功能衰竭?？ㄍ衅绽M 2只因腸梗阻死于術(shù)后 3天;2只死于術(shù)后 2周內(nèi),經(jīng)證實(shí)系死于慢性心功能衰竭。

2.2 左室重量指數(shù) 模型組 LVMI為(2.98±0.36),明顯高于假手術(shù)組(2.11±0.14)(P＜0.01),卡托普利組 LVM為(2.32±0.35),明顯低于模型組(2.98±0.36)(P＜0.01)。

2.3 左室心肌病理形態(tài) HE染色 光鏡下假手術(shù)組心肌纖維排列整齊,心肌細(xì)胞大小正常。模型組心肌纖維排列紊亂,細(xì)胞橫徑稍大。卡托普利組的改變接近假手術(shù)組。(圖 1)

2.4 左室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu) 假手術(shù)組心肌細(xì)胞為正常超微結(jié)構(gòu),細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、線粒體、肌漿網(wǎng)、肌原纖維形態(tài)正常。模型組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的主要改變?yōu)椋壕€粒體變性,表現(xiàn)為線粒體嵴減少、斷裂,基質(zhì)密度變淺;肌漿網(wǎng)擴(kuò)張;肌原纖維變性,表現(xiàn)為肌原纖維斷裂及排列紊亂;細(xì)胞核邊緣不規(guī)則,染色質(zhì)邊移?？ㄍ衅绽M心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)基本接近正常。(圖2)

3 討 論

自 20世紀(jì) 90年代初Packer提出心力衰竭的神經(jīng)內(nèi)分泌假說以來,越來越多的證據(jù)證實(shí)：心力衰竭是神經(jīng)內(nèi)分泌介導(dǎo)的慢性全身性適應(yīng)反應(yīng),其病理生理主要有兩大因素,即心室重構(gòu)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)的激活[5-6]。腎素-血管緊張素-醛固酮(RAAS)的各個組成部分作為一個相互關(guān)聯(lián)的整體,是心室重構(gòu)時(shí)機(jī)體運(yùn)用其代償機(jī)制的一個至關(guān)重要的方面。

研究心肌肥厚動物模型建立的方法有多種,如壓力超負(fù)荷造模、容量超負(fù)荷造模和冠狀動脈結(jié)扎[7]。而主動脈狹窄致左室肥厚動物模型是較常用的實(shí)驗(yàn)方法,可很好地模擬從代償期向衰竭心肌演變過程中的形態(tài)、代謝等改變及還原壓力負(fù)荷增加導(dǎo)致心肌肥大的病理生理過程。根據(jù)這一突出特點(diǎn),結(jié)合臨床需要,參考 Doering等[2]方法,運(yùn)用腹主動脈銀夾狹窄所致壓力負(fù)荷增加的辦法建立大鼠左室肥厚模型,主要從左室重量指數(shù)、左室心肌病理形態(tài) HE染色、左室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等指標(biāo),觀察卡托普利對壓力負(fù)荷增加大鼠左室肥厚的逆轉(zhuǎn)作用。

結(jié)果發(fā)現(xiàn),模型組 LVMI明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01),卡托普利組 LVMI明顯低于模型組(P＜0.01)。光鏡下假手術(shù)組心肌纖維排列整齊,心肌細(xì)胞大小正常。模型組心肌纖維排列紊亂,細(xì)胞橫徑稍大?？ㄍ衅绽M的改變接近假手術(shù)組。假手術(shù)組心肌細(xì)胞為正常超微結(jié)構(gòu)。模型組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的主要改變?yōu)椋壕€粒體變性,肌漿網(wǎng)擴(kuò)張,肌原纖維變性,細(xì)胞核邊緣不規(guī)則,染色質(zhì)邊移?？ㄍ衅绽M心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)基本接近正常。

卡托普利逆轉(zhuǎn)左室肥厚的作用可能與降低血漿或局部血管緊張素Ⅱ水平有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),常規(guī)劑量(50mg/kg,1次/d,已知該劑量可完全抑制循環(huán)中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 ACE的活性)的卡托普利可以治療自發(fā)性高血壓大鼠,可預(yù)防 LVH、心肌纖維化的發(fā)生[8],進(jìn)一步證實(shí)左室肥厚與 RAAS活性之間可能有密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)卡托普利組(100 mg/kg,1次 /d,相當(dāng)于成人 80～160倍)在左室重量指數(shù)、左室心肌病理形態(tài) HE染色、左室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等反應(yīng)左室肥厚的指標(biāo)方面均有明顯的作用,與模型組比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明卡托普利具有逆轉(zhuǎn)左心室肥厚之作用。

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