郝勝菊 張慶華 閆有圣 鄭 雷 胡秀琴 石 堅(jiān) 紀(jì)維立

熒光原位雜交技術(shù) (fluorescence in situ hybridization,FISH)是細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)染色體疾病的新技術(shù)[1],可對(duì)絨毛、羊水、臍血細(xì)胞中期染色體和不經(jīng)培養(yǎng)的間期細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),能夠準(zhǔn)確、快速做出產(chǎn)前診斷。隨著產(chǎn)前篩查的廣泛實(shí)施,越來(lái)越多的產(chǎn)前篩查 (血清學(xué)和超聲學(xué))高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦進(jìn)入了產(chǎn)前診斷的程序,應(yīng)用 FISH技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷可以有效降低出生缺陷發(fā)生率。我們對(duì)甘肅省 150例高風(fēng)險(xiǎn)孕婦進(jìn)行 FISH檢測(cè),現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下:

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 2008年 12月—2009年 10月,在我院行產(chǎn)前診斷的 150例孕婦,年齡 22～43歲,孕齡 18～38 W。產(chǎn)前診斷指征包括:孕婦年齡≥35歲 15例,孕婦血清學(xué)唐氏篩查風(fēng)險(xiǎn)值增高者 57例,不良孕產(chǎn)史 21例,21三體兒分娩史 9例,B型超聲異常 40例,其他 8例。其中羊水標(biāo)本 147例,各 25 mL;臍血標(biāo)本 3例,各 4 mL。

1.2 方法 將每份標(biāo)本分為 A組和 B組。A組按常規(guī)方法進(jìn)行羊水細(xì)胞、臍血細(xì)胞染色體培養(yǎng)及核型分析;B組使用北京金菩嘉技術(shù)有限公司提供的GLP 13/GLP 21和 CSP 18/CSP X/CSP Y熒光探針進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.1 A組染色體核型分析標(biāo)準(zhǔn) 在普通顯微鏡下進(jìn)行染色體核型分析,正常者計(jì)數(shù) 30個(gè)核型,分析 3-5個(gè)核型,異常者加大計(jì)數(shù) 50-100個(gè)核型以上。分析標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)際人類染色體名命系統(tǒng) (ISCN)確定染色體核型。

1.2.2 B組 FISH分析標(biāo)準(zhǔn) 在 Leica DM6000熒光顯微鏡的 DAPI/AQUA/GREEN/TEXAS RED/四色濾光鏡下,采用 CW4000 FISH分析軟件,進(jìn)行熒光信號(hào)的計(jì)數(shù)。每例標(biāo)本計(jì)數(shù)至少 50個(gè)細(xì)胞 ,以≥90%的細(xì)胞顯示 2個(gè)雜交信號(hào)為正常,三體的確認(rèn)以≥60%的細(xì)胞顯示 3個(gè)雜交信號(hào)為診斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

對(duì) 147例羊水細(xì)胞和 3例臍血細(xì)胞,對(duì) 147例羊水細(xì)胞和 3例臍血細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)及核型分析,羊水細(xì)胞培養(yǎng)失敗 2例,成功分析 148例。FISH檢測(cè)與染色體核型分析結(jié)果相一致,共檢出正常核型 142例 ,異常核型 6例 ,其中 21-三體 4例 ,18-三體 1例 ,13-三體 1例 (見(jiàn)圖 1)。

圖 1 A正常 13、21二倍體;B 21-三體;C 13-三體;D正常 18,XY;E 18-三體(+18,XY)

3 討 論

目前對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的產(chǎn)前診斷主要是通過(guò)取絨毛、羊水或臍血細(xì)胞培養(yǎng),對(duì)分裂中期細(xì)胞核進(jìn)行染色體核型分析。但該方法耗時(shí)長(zhǎng),且易受分裂相數(shù)量、質(zhì)量、顯帶技術(shù)及操作人員技能的影響,在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,可因污染等原因?qū)е屡囵B(yǎng)失敗[2]。FISH只需根據(jù)雜交位點(diǎn)的數(shù)目即可迅速確定染色體的數(shù)目,結(jié)果更客觀、準(zhǔn)確、可靠?？梢栽讷@取標(biāo)本后 24～48 h出結(jié)果,比傳統(tǒng)的核型分析所需時(shí)間明顯縮短 3周左右[3];且 FISH技術(shù)無(wú)需細(xì)胞培養(yǎng),可直接進(jìn)行未培養(yǎng)細(xì)胞的檢測(cè),尤其是對(duì)臍血、羊水細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)不良或中期染色體分析有困難者更顯優(yōu)越。國(guó)外已廣泛地用于產(chǎn)前、產(chǎn)后遺傳性疾病的診斷[4]。

我們用 13、21、18、X、Y染色體探針對(duì)甘肅省150例高風(fēng)險(xiǎn)孕婦進(jìn)行檢測(cè),成功檢測(cè) 148例,檢測(cè)成功率為 98.7%,未達(dá)到 100%檢測(cè)成功的原因主要與可能是由于羊水中混有母血的污染,致使 FISH檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確,無(wú)法進(jìn)行分析。共檢出異常核型6例 ,其中:21-三體 4例 ,18-三體 1例 ,13-三體 1例 ,均在相應(yīng)的 24小時(shí)-48小時(shí)內(nèi)得到結(jié)果,與傳統(tǒng)的染色體核型分析結(jié)果相一致,符合率達(dá) 100%,達(dá)到了快速、準(zhǔn)確檢測(cè)染色體數(shù)目異常的目的,顯示了FISH有良好的應(yīng)用前景和價(jià)值。

我們應(yīng)用 FISH技術(shù)在甘肅省首次檢出 1例 13三體綜合征 (Patau綜合征),其產(chǎn)前診斷指征為:孕婦,36歲,孕 28周,G1P0,超聲檢查示:腦積水、雙腎體積增大、心室有強(qiáng)回聲點(diǎn)。此病危害嚴(yán)重,且尚無(wú)有效的治療手段。其主要臨床表現(xiàn)為:中樞神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重發(fā)育缺陷,嚴(yán)重智力低下,新生兒發(fā)病率約為

1/25 000[5]。通過(guò) FISH技術(shù),我們?yōu)樵撛袐D的臨床處理提供了快速準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。

[1]Gremer T,Lundegen J,BrucknerA,et al.Detection of chromosome aberration in the human interfuase nucleus by visualization of specific targetDNAswith radioactive and nonradioactive in situ hybridisation techniques:diagnosis of trisomy18 with probe L184.HuMGenet,1986,74:346-352.

[2]吳韶清,廖 燦,易翠興.熒光原位雜交技術(shù)快速產(chǎn)前診斷胎兒血細(xì)胞非整倍體的價(jià)值.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志,2006,22(6).

[3]Moatter T,Khilji Z,Murad F,et al.Analysis of amniotic fluid specimens for common chromosome disorders using interphase fluorescence in situ hybridization.J Pak Med Assoc,2007,57(4):189-192.

[4]ChoolaniM,Ho SS,Razvi K,et al.Fast FISH:technique for ultrarapid fluorescence in situ hybridization on uncultured amniocytes yielding results within 2 h of amniocentesis.Mol Humrepord,2007,13:355-359.

[5]陳 竺,主編.醫(yī)學(xué)遺傳學(xué).人民衛(wèi)生出版社,2005,8:74.