研究顯示，炎癥參與了動脈粥樣硬化病變的發(fā)生、發(fā)展以至最終血栓形成[1-2]。還有研究表明，細胞因子網(wǎng)絡與缺血性心臟病有關，炎癥標致物C-反應蛋白和其它細胞因子，如白介素(Interleukin，IL)-1和IL-6，被認為能增加動脈粥樣硬化的炎癥反應[1-2]，而IL-10，則被認為是細胞因子網(wǎng)絡中的負相調(diào)節(jié)細胞因子[3]。IL-10主要由Th2、巨噬細胞和活化B細胞產(chǎn)生，它抑制T細胞、單核-巨噬細胞產(chǎn)生炎癥因子，如：IL-1、IL-6、γ-干擾素和腫瘤壞死因子-α，并抑制抗原提呈和免疫激活過程中細胞表面的分子表達，在抑制細胞免疫的同時，增強體液免疫[4-5]。體外和動物試驗顯示，IL-10在動脈粥樣硬化病變的發(fā)生和發(fā)展中，有抗炎和抑制病變的作用[6-9]，但臨床上，有關冠心病患者IL-10水平的研究結果并不一致[10-13]。

巨細胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)、單純皰疹病毒-1型[14]、單純皰疹病毒-2型[15]、肺炎衣原體[16-17]等微生物感染可能參與心血管病的發(fā)生[18]，造成冠狀動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定，加速動脈粥樣硬化病變和增加心血管事件[18]。有研究表明，在冠心病患者，CMV感染參與上調(diào)局部和循環(huán)中的炎癥細胞因子，如：IL-1，IL-6和C反應蛋白[19], 但CMV感染對IL-10水平的影響知之甚少，因此，本研究意欲探討CMV感染對冠心病患者血清IL-10水平的影響。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇水利醫(yī)院住院患者188例，其中冠心病患者106例，對照組患者82例。所有10例冠心病患者均行冠狀動脈造影，證實有1支或1支以上的主要冠脈分支存在≥50% 的狹窄。對照組患者為或有不典型冠心病癥狀，或有冠心病傳統(tǒng)危險因素，而懷疑患有冠心病，但經(jīng)冠狀動脈造影證實冠脈壁光滑，而在臨床上排除患有冠心病。另外，57例冠狀動脈造影顯示有冠脈管壁有不規(guī)則病變者，被排除出本研究。

1.2 一般資料

188例患者的基本統(tǒng)計學資料見表1。在冠心病組，患者合并糖尿病、高血壓的比例顯著高于對照組(P<0.01)。 冠心病組與對照組相比，CMV IgG陽性率統(tǒng)計學差異無顯著性(38.9% vs.37.6%，P>0.05 )。冠心病組IL-10水平顯著高于對照組，7.3(3.0 -12.5) pg/ml vs. 5.9 (3.2 - 10.4) pg/ml(P= 0.043)。

1.3 方法

1.3.1 IL-10的相關因素 本研究分析了影響IL-10潛在的相關因素包括：年齡、性別、吸煙、糖尿病、血脂紊亂、高血壓、體重指數(shù)、體力活動少和血清CMV- IgG陽性。吸煙狀態(tài)分為目前吸煙、既往吸煙(停止吸煙>1個月至<40年)和不吸煙(從不吸煙或戒煙 ≥40年)。糖尿病患者指空腹血糖 ≥7.0 mmol/L (126 mg/dl) 或者已經(jīng)使用口服降糖藥物或胰島素治療者。高血壓指收縮壓 ≥140 mmHg和/或舒張壓 ≥90 mmHg或已經(jīng)應用降壓藥物治療的患者。血脂紊亂指空腹總膽固醇 ≥220 mg/dl (5.72 mmol/L), 或甘油三脂 ≥200 mg/dl (2.26 mmol/L), 或HDL-C<40 mg/dl (1.04 mmol/L), 或經(jīng)計算的LDL-C ≥140 mg/dl (3.64 mmol/L), 或者已接受調(diào)脂治療。從事較多腦力勞動者被認為體力活動少。

1.3.2 試驗技術 患者入院后，取過夜空腹血。標本采集后放置-80℃冰箱保存。使用美國BioSource International生產(chǎn)(雙單抗夾心法)的高靈敏度人IL-10 ELISA試劑，定量測量IL-10，檢測限度為 0.3 pg/ml，組間變異為 7.8%。CMV (AD 169)-IgG檢測試劑盒購于中國預防醫(yī)學科學院病毒研究所，其原理基于間接固相酶聯(lián)免疫吸附試驗，根據(jù)陰性和陽性對照，得出CMV IgG陽性界值，CMV IgG陽性表示既往CMV感染。

表1 研究對象的一般資料

注：括號內(nèi)為百分數(shù)；290例患者(83.3%)的吸煙資料可用

1.3.3 統(tǒng)計分析 記數(shù)資料采用Pearson χ2檢驗或Fisher檢驗進行分析。體重指數(shù)以均值±標準差表示，用t檢驗分析。IL-10為非正態(tài)分布，用中位數(shù)及(25%和75%)百分位數(shù)表示，兩組間比較采用非參數(shù)檢驗(Mann-Whitney U 檢驗)。所有個體(n=288)，據(jù)計算出的IL-10中位數(shù)值(6.84 pg/ml)，分高、低IL-10組[20]，以高IL-10作為應變量，其它可能的相關因素作為因變量，以Logistic回歸分析IL-10的影響因素，并用調(diào)整后的危險度比值比(OR)和95%的可信區(qū)間表示相關因素對IL-10的影響。P<0.05統(tǒng)計學差異具有顯著性。SPSS 10統(tǒng)計軟件進行分析。

2 結果

2.1 IL-10升高相關的單因素分析

如表2所示，高IL-10組的CMV IgG陽性率顯著高于低IL-10組的CMV IgG陽性率(46.8% vs. 30.4%,P<0.001)，而性別、年齡、吸煙、高血壓、糖尿病和血脂紊亂在高、低IL-10組間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2 在冠心病組，高IL-10 組中的CMV IgG陽性率顯著高于低IL-10組的CMV IgG陽性率(48.1% vs. 28.6 %，P<0.001)，但在對照組患者的高、低IL-10 組中，未見CMV IgG陽性率的顯著差異(40.4% vs. 35.6%，P=0.588)，見表3。

2.3 IL-10升高相關因素的多元Logistic回歸分析

表4為高IL-10的每個相關因素調(diào)整后的OR值和95%的可信區(qū)間。在冠心病組，只有CMV IgG陽性與高IL-10獨立相關，調(diào)整的OR值為2.3(1.6～3.4，P<0.001)。在對照組，CMV IgG陽性與高IL-10調(diào)整后的OR值為1.1(0.5～2.5，P=0.83)。調(diào)整變量包括年齡、性別、吸煙、高血壓、血脂紊亂、糖尿病及較少體力活動。

3 討論

本研究表明：在冠心病患者，CMV感染與血清IL-10水平升高獨立相關。

CMV感染與冠心病患者血清IL-10水平升高相關的機制，可能與CMV感染刺激體內(nèi)Th2細胞、巨噬細胞、B細胞產(chǎn)生IL-10有關[4-5]。盡管體外研究顯示單核細胞被CMV感染后不能產(chǎn)生IL-10[21]，但CMV感染后，腎移植患者血漿IL-10水平升高[22]，肺組織和支氣管肺泡灌洗出的細胞中IL-10mRNA 水平較高，支氣管肺泡灌洗液中的IL-10升高[23]。本研究也表明CMV感染與冠心病患者高IL-10水平相關。因此，CMV體內(nèi)感染可能與疾病相關因素協(xié)同作用于IL-10的產(chǎn)生。

表2 高IL-10相關因子的單因素分析

注：高、低IL-10組據(jù)所有個體的IL-10水平的中位數(shù)(6.84 pg/ml)界定;括號內(nèi)為百分數(shù)；290例患者(83.3%)的吸煙資料可用

表3 高、低IL-10組中的CMV IgG陽性率比較

注：高、低IL-10組據(jù)所有個體的IL-10水平的中位數(shù)(6.84 pg/ml)界定;括號內(nèi)為百分數(shù)

表4 高IL-10影響因素的多元Logistic回歸分析 [調(diào)整后的OR值(95% 可信區(qū)間)]

注：aP<0.001

本研究資料雖然未顯示冠心病和冠狀動脈壁光滑的CMV感染率有顯著差異，但CMV感染對IL-10水平的影響主要是在冠心病患者，而對冠狀動脈壁光滑者的影響不顯著。結合其它研究報道，有理由認為，在某些冠心病患者(IL-10產(chǎn)生與遺傳相關[24-25])，CMV感染不僅參與上調(diào)局部和循環(huán)中的致炎細胞因子，如：IL-1，IL-6和C反應蛋白[19]，也與抗炎細胞因子IL-10的水平增加有關。因此，冠心病時，體液循環(huán)中和動脈粥樣病變的局部，細胞因子網(wǎng)絡可能處于超敏狀態(tài)，致炎和抗炎細胞因子水平都增加，而這種有個體差異的細胞因子超敏狀態(tài)激活或維持，可能與CMV感染有關。換言之，冠心病與CMV感染使患者的細胞因子網(wǎng)絡處于超敏狀態(tài)有關，增高的細胞因子還可能參與免疫細胞的激活，由此產(chǎn)生炎癥反應?；诖?，將外源性IL-10用于CHD的治療值得商榷，也許將冠心病患者血中的細胞因子超敏狀態(tài)下調(diào)至正常，比給予患者外源性IL-10[20]，更有益于冠心病的預后。因為本研究還表明，冠狀動脈光滑者的IL-10水平比冠心病患者低。我們還認為，CMV感染誘導機體產(chǎn)生IL-10原因，也有可能使CMV更容易逃逸機體的免疫反應清除。無論如何，冠心病患者CMV感染與IL-10升高的意義，需要謹慎的解釋和進一步研究。

有報道高膽固醇血癥的IL-10水平較高[26]，血管緊張素轉換酶抑制劑[27]和β受體阻滯劑[28]可降低IL-10水平，而類固醇激素的應用則有上調(diào)IL-10水平的作用[29]。本研究中的所有個體均為住院患者，藥物治療對IL-10水平可能有一定的影響。盡管如此，本研究資料未顯示傳統(tǒng)的危險因素，如：高血壓、血脂紊亂、糖尿病、吸煙和體重指數(shù)對冠心病患者的血清IL-10水平有顯著影響。

本研究中有二方面局限性。首先，特異性的CMV IgG陽性或陰性，不是衡量CMV感染與否的金標準，但是，與CMV IgG陰性個體相比，CMV IgG陽性可認為是經(jīng)常性的、近期的、或較嚴重的CMV慢性感染。其次，本研究設計為橫斷面病例對照研究，因此，我們只能據(jù)此提出假設，而非因果關系的證明。

總之，本研究表明CMV感染與冠心病患者的IL-10升高相關，CMV感染可能增加冠心病患者IL-10產(chǎn)生。因此，我們認為，在冠心病患者，CMV感染的免疫應答可能是一個影響細胞因子網(wǎng)絡的復雜反應。

[1]Libby P, Ridker PM, Maseri A. Inflammation and Atherosclerosis[J]. Circulation, 2002, 105:1135-1143.

[2]Ross R. Atherosclerosis: an inflammatory disease[J]. N Eng J Med, 1999, 340:115-126.

[3]Moore KW, de Waal Malefgt, Coffman RL, et al. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor[J]. Annu Rev Immunol, 2001, 19:683-765.

[4]Moore KW, Vieira P, Fiorentino DF, et al. Homotology of cytokine synthesis inhibitory factor (IL-10) to the Epstein Barr Virus genes BCRFI[J]. Science, 1990, 248:1230.

[5]Fiorentino DF, Bond MW, Mosmann TR. Two types of mouse T helper cells iv. Th2 clones secret a factor that inhibits cytokine production by Th1 clones[J]. J Exp Med, 1989, 170:2081.

[6]Lacraz S, Nicod LP, Chicheportiche R, et al. IL-10 inhibits metalloproteinase and stimulants TIMP-1 production in human mononuclear phagocytes[J]. J Clin Invest, 1995, 95:2304-2310.

[7]Lindmark E, Tenno, T, Chen J, et al. IL-10 inhibits LPS-induced human monocyte tissue factor expression in whole blood[J]. Br J Haematol, 1998, 102:597-604.

[8]Geng Y, Shane RB, Berencsi K, et al. Chlamydia pneumoniae inhibits apoptosis in human peripheral blood mononuclear cells through induction of IL-10[J]. J Immunol, 2000, 164:5522-5529.

[9]Pinderski LJ, Fischbein MP, SubbanangounderG, et al. Overexpression of interleukin-10 by activated T lymphocyte and macrophage phenotypes[J]. Circ Res, 2002, 90:1064-1071.

[10]Smith DA, Irving SD, Sheldon A, et al. Serum levels of the antiinflammatory cytokine interleukin-10 are decreased in patients with unstable angina[J]. Circulation, 2001, 104:746-749.

[11]Mizia-Stec K, Gasior Z, Zahorska-Markiewicz B, et al. Serum tumor necrosis factor-alpha, interleukin-2 and interleukin-10 activation in stable angina and acute coronary syndromes[J]. Coron Artery Dis, 2003, 14(6):431-438.

[12]Yamashita H, Shimada K, Seki E, et al. Concentrations of interleukins, interferon, and C-reactive protein in stable and unstable angina pectoris[J]. Am J Cardiol, 2003, 91(2):133-136.

[13]Waehre T, Halvorsen B, Damas JK, et al. Inflammatory imbalance between IL-10 and TNFalpha in unstable angina potential plaque stabilizing effects of IL-10[J]. Eur J Clin Invest, 2002, 32(11):803-810.

[14]Sun Y, Pei W, Wu Y, et al. An association of herpes simplex virus type 1 infection with type 2 diabetes[J]. Diabetes Care，2005，28:435-436.

[15]Sun Y, Pei W, Wu Y, et al. Herpes simplex virus type 2 infection is a risk factor for hypertension[J]. Hypertens Res, 2004, 27，541-544.

[16]Sun YH, Pei WD, Wu YJ, et al. Smoking increases the risk of coronary artery disease in Chinese with Chlamydia pneumoniae infection[J]. Int J Cardiol, 2004, 97:199-203.

[17]孫余華，裴衛(wèi)東，吳永健，等.肺炎衣原體感染增加血脂紊亂者患冠心病的危險性[J].中華醫(yī)學雜志，2004，84(23)：1990-1993.

[18]Espinola-Klein C, Rupprecht HJ, Blankenberg S, et al. Impact of infectious burden on extent and long-term prognosis of atherosclerosis[J]. Circulation, 2002, 105:15-21.

[19]Nieto FJ. Infection and atherosclerosis: new clues from an old hypothesis? [J]. Am J Epidemiol, 1998, 148:937-948.

[20]Hesschen C, Dimmeler S, Hamm CW, et al. Serum level of the antiinflammation cytokine interleukin-10 is an important prognostic determinant in patients with acute coronary syndromes[J].Circulation, 2003,107(16):2109-2114.

[21]Bouwman JJ, Visseren FL, Bosch MC, et al. Procoagulant and inflammatory response of virus-infected monocytes[J]. Eur J Clin Invest, 2002, 32(10):759-766.

[22]Nordoy I, Muller F, Nordal KP, et al. The role of the tumor necrosis factor system and interleukin-10 during cytomegalovirus infection in renal transplant recipients[J]. J Infect Dis, 2000, 181(1):51-57.

[23]Filice GA, Clabots CR, Riciputi PE, et al. Changes in cytokine levels during reactivation of Toxoplasma gondii infection in lungs[J]. Infect Immun, 1999, 67(5):2082-2089.

[24]Reuss E, Fimmers R, Kruger A, et al. Differential regulation of interleukin-10 production by genetic and environmental factors--a twin study[J]. Genes Immun, 2002, 3(7):407-413.

[25]Koss K, Satsangi J, Fanning GC, et al. Cytokine (TNF alpha, LT alpha and IL-10) polymorphisms in inflammatory bowel diseases and normal controls: differential effects on production and allele frequencies[J]. Genes Immun, 2000, 1(3):185-190.

[26]Mizia-Stec K, Zahorska-Markiewicz B, Mandecki T, et al. Hyperlipidaemia and serum cytokines in patients with coronary artery disease[J]. Acta Cardiol, 2003, 58(1):9-15.

[27]Lindmark E, Siegbahn A. Tissue factor regulation and cytokine expression in monocyte-endothelial cell co-cultures. Effects of a statin, an ACE-inhibitor and a low-molecular-weight heparin[J]. Thromb Res, 2002, 108(1):77-84.

[28]Ohtsuka T, Hamada M, Hiasa FG, et al. Effect of Beta-blockers on circulating levels on inflammatory and anti-inflammatory cytokines in patients with dilated cardiomyopathy[J]. J Am Coll Cardiol, 2001, 37:412-417.

[29]Harig F, Hohenstein B, von der Emde J, et al. Modulating IL-6 and IL-10 levels by pharmacologic strategies and the impact of different extracorporeal circulation parameters during cardiac surgery[J]. Shock, 2001, 16 Suppl 1:33-38.