曹紅，王浩

（國(guó)家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，北京 100094）

HPLC法快速測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中維生素B1

曹紅，王浩

（國(guó)家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心，北京 100094）

建立了快速測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的高效液相色譜測(cè)定法。采用Zorbax XDB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm i.d）反相色譜柱，以濃度為0.05 mol/L乙酸鈉水溶液與甲醇比為65︰35（體積比，調(diào)pH值為4.5）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量20μL。方法定量限為0.5 mg/kg，加標(biāo)回收率92.1%～103.8%，線性范圍0.00～1.00 mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.34%。該法具有樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單,靈敏度高,分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),適用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的快速測(cè)定。

高效液相色譜儀；嬰幼兒配方奶粉；維生素B1

0 引 言

維生素B1又稱硫胺素或抗神經(jīng)炎素。由嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)結(jié)合而成的一種B族維生素。其在體內(nèi)的含量雖然很少，但在人體生長(zhǎng)、代謝、發(fā)育過(guò)程中卻發(fā)揮著重要的作用,因而成為嬰兒配方奶粉的重要組成部分。

目前測(cè)定食品中維生素B1的方法主要有：熒光分光光度法、液相色譜法[1，2]。其中，嬰兒配方奶粉中維生素B1的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法（GB/T5413.11-2010）為液相色譜法,該法樣品需要在稀鹽酸環(huán)境水解，酶解過(guò)夜，費(fèi)時(shí)，回收率偏低。本文將樣品經(jīng)酸沉蛋白后直接用堿性鐵氰化鉀衍生，正定醇萃取，HPLC法進(jìn)行直接測(cè)定,獲得較滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

儀器：Agilent1100型高效液相色譜儀，配置自動(dòng)進(jìn)樣器，G1321A熒光檢測(cè)器。

試劑：甲醇，冰醋酸，鹽酸，氫氧化鈉，乙酸鈉，鐵氰化鉀。以上均為分析純。維生素B1。

樣品為嬰幼兒配方奶粉。

1.2 色譜條件

色譜柱：反相Zorbax XDB-C18色譜柱；流速為1.0 mL/min；柱溫為25℃；激發(fā)波長(zhǎng)375 nm，發(fā)射波長(zhǎng)435 nm；進(jìn)樣量為20 μL；流動(dòng)相：0.05 mol/L乙酸鈉比甲醇為65︰35（體積比，調(diào)pH值為4.5）。

1.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取5 g樣品，用25.0 mL 50℃熱水溶解，超聲10 min，用濃度為5 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.7，放置2 min后，再用濃度為2.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值至4.5。將樣品溶液移至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性濾紙自然過(guò)濾，棄去最初濾液，在50 mL錐形瓶中收集濾液，并充分混勻，待用；取上述濾液10.0 mL于25 mL具塞比色管中，加10.0 mL正丁醇，強(qiáng)烈振蕩后靜置約10 min，充分分層，吸取正丁醇于5000 r/min離心5 min，取上清液用0.45 μm濾膜將樣液過(guò)濾，進(jìn)樣20 μL進(jìn)行色譜分析。

1.4 定性定量方法

采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間對(duì)樣品峰進(jìn)行準(zhǔn)確定性，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算定量，依次配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

維生素B1為水溶性物質(zhì)，而嬰兒配方奶粉中蛋白質(zhì)含量較高，因此，本方法先用50℃熱水超聲提取，再經(jīng)酸沉蛋白后直接用堿性鐵氰化鉀衍生，正定醇萃取待測(cè)液中的維生素B1；國(guó)標(biāo)測(cè)定方法（GB/T5413.11-2010）樣品需要在121℃下保持30 min,待冷卻至40℃再酶解過(guò)夜，其后同本法。經(jīng)過(guò)加標(biāo)對(duì)比實(shí)驗(yàn)，國(guó)標(biāo)測(cè)定方法平均回收率小于80%，而本法平均回收率大于92.0%，其原因可能為在維生素B1在121℃高溫下可能會(huì)有所損失，造成國(guó)標(biāo)測(cè)定方法平均回收率偏低。

2.1 色譜條件的優(yōu)化

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，可用于分離維生素B1的色譜柱主要包括C18和C8柱。本文分別采用上述兩種色譜柱進(jìn)行分離試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Zorbax XDB-C18柱對(duì)維生素B1具有較好的分離效果；維生素B1屬于強(qiáng)極性化合物，在反相色譜柱上保留較弱，為了有利于色譜峰的分離及峰形的改善，選用以濃度為0.05 mol/L乙酸鈉與甲醇比65︰35（體積比，調(diào)pH值為4.5）為流動(dòng)相；對(duì)維生素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液分別用激發(fā)波長(zhǎng)為280，310，370，490 nm；發(fā)射波長(zhǎng)為380，400，435，500 nm進(jìn)行測(cè)定；發(fā)現(xiàn)激發(fā)波長(zhǎng)為375 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為435 nm時(shí)，維生素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)值最大；通過(guò)不同體積進(jìn)樣量比較,發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣量20 μL時(shí),峰形較好，響應(yīng)值比較理想。綜合以上色譜條件的測(cè)定結(jié)果令人滿意（如圖1所示）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍和方法檢測(cè)限

將逐級(jí)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)工作液分別進(jìn)樣20 μL，測(cè)定結(jié)果經(jīng)線性回歸，線性范圍為0.00～1.00 mg/L；線性相關(guān)系數(shù)為0.99999；回歸方程為

式中：y為峰面積；x為質(zhì)量濃度。

進(jìn)空白樣,以基線3倍噪聲值在標(biāo)準(zhǔn)曲線查得結(jié)果計(jì)算,按測(cè)定方法計(jì)算,本方法最低檢出量為0.5 mg/kg。

2.3 方法的回收率和精密度

稱取已知含量的同一樣品6份,每份5.00 g,添加維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品0.03 mg,按供試品制備方法處理后,進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如表1所示。從表中可看出,樣品加標(biāo)回收率92.1%～103.8%,平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.34%（n=6）。

表1 加標(biāo)樣品回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

3 結(jié) 論

建立了快速測(cè)定嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的高效液相色譜測(cè)定方法。該法樣品經(jīng)酸沉蛋白后直接用堿性鐵氰化鉀衍生，正定醇萃取，HPLC法進(jìn)行直接測(cè)定,樣品加標(biāo)回收率92.1%～103.8%,平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.34%（n=6）,適用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的快速測(cè)定。

[1]常相娜，黃榮清，王正平，等.B族維生素測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].科學(xué)技術(shù)與工程,2004,4（4）：312-315.

[2]崔蓉，李皎，王洪瑋.水溶性維生素的高效液相色譜測(cè)定方法的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，15（1）：55-57.

Study on rapid detection of Vitamin B1 in infant milk powder by HPLC

CAO Hong，WANG Hao
（Nation Food Quality&Safety Supervision and Inspection Center,Beijing 100094，China）

This thesis developed a HPLC method for rapid determination of Vitamin B1 in infant milk powder.In the method,the analysis column is revered-phase column of Zorbax XDB-C18（5μm，4.6 mm×250 mm i.d）.the mobile phase is 0.05mol/L CH3COONa water solution：Methanol（65：35,V/V,pH4.5）,the flow is 1.0 mL/min,and the injection volume is 20 μL.The limit of t quantitation was 0.5 mg/kg,The linear plots were obtained between 00.0 μg/mL and 1.00 μg/mL.Overall recoveries were between 92.1%and 103.8%,and RSD（n=6）value were between 4.34%.The results showed that the method was sensitive,accurate,convenient and quick,which can be used to detect Vitamin B1 in infant milk powder.

HPLC；infant milk powder；Vitamin B1

TS252.7

A

1001-2230（2010）11-0046-02

2010-08-30

曹紅（1951-），女，高級(jí)工程師,從事食品安全與營(yíng)養(yǎng)檢驗(yàn)的研究工作。

王浩