潘小炎　李天資　周喜漢　尹毅霞　潘興壽

【摘要】目的探討石斛治療慢性萎縮性胃炎(CAG)的療效及其機制。方法用氨水、乙醇和去氧膽酸鈉灌胃法，制成大鼠CAG模型。造模后治療組以石斛治療5周，觀察血胃泌素（GAS）、生長抑素（SS）和胃黏膜前列腺素E2（PGE₂）的變化情況，并與模型組和對照組比較。結(jié)果石斛治療組治療前SS 、GAS和PGE2分別為7.95±2.14 ng/L，216.13±77.21 ng/L，1435.10±200.53 pg/mp，均較對照組低（P＜0.01），治療后分別為9.58±1.01 ng/L，328.53±84.74 ng/L，1715.66±125.49 pg/mp；治療后除SS外，各觀察指標水平均較治療前高（P＜0.01），與對照組比較差異不大(P＞0.05)。結(jié)論石斛可使GAS和 PGE₂增多，對CAG有良好的治療作用。

【關(guān)鍵詞】萎縮性胃炎;石斛;大鼠

文章編號：1003-1383(2009)01-0001-03中圖分類號：R 573.32；R285.6文獻標識碼：A

材料與方法

1.動物及分組采用2 m±2 d齡，體重200±10 g，一級質(zhì)量標準的雌性遠交系Wistar大鼠，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物研究所提供。購回后采用架式籠養(yǎng)，室溫為20±2℃，濕度50%～60%，光照明暗各12 h交替，單獨空調(diào)。先在動物室飼養(yǎng)4 d后隨機分為對照組、模型組、石斛治療組3組，分籠喂養(yǎng)，每組一籠，每籠25只。

2.實驗用藥物及試制氨水：中國瓶窯醫(yī)藥化工試制廠，批號20060431，現(xiàn)用現(xiàn)配成濃度0.1%氨水；乙醇：純度＞99.5%，宜興市鈕家化工助劑廠，批號20060113，現(xiàn)用現(xiàn)配成60%乙醇溶液；去氧膽酸鈉：Serva公司生產(chǎn)，上?；瘜W(xué)試制采購供應(yīng)站進口分裝經(jīng)銷，批號2005618，現(xiàn)用現(xiàn)配成20 mmol/L溶液；石斛煎劑：石斛300 g加水2000 ml于陶瓷皿慢火煎60分鐘，過濾備用。

3.實驗方法①對照組：不造模，灌服生理鹽水；②模型組和石斛治療組：用0.1%氨水作為飲用水自由飲用；20 mmol的去氧膽酸鈉溶液每日灌胃一次，每次2 ml；60%的乙醇每周空腹灌胃2次，每次2 ml。上述三因素共處理16周建立鼠CAG模型；對照組用生理鹽水灌胃， 每只5 ml，每日1次， 連續(xù)5周。實驗進行至16周(治療前)每組取11只大鼠處死；取標本備檢，對照組鼠胃病檢無明確病態(tài)表現(xiàn)，模型組和石斛治療組鼠胃病檢均符合慢性萎縮性胃炎表現(xiàn)，表示造模成功。③模型組停止造模，灌服生理鹽水，石斛治療組也停止造模，每日每只大鼠灌服石斛水煎劑5 ml，連續(xù)5周。

4.標本及化驗試制胃泌素（GAS）酶聯(lián)免疫試劑盒，美國Lifkey公司生產(chǎn)；生長抑素（SS）、胃黏膜前列腺素E2（PGE2）放免試劑盒，第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供。

5.檢測方法①血清GAS含量檢測:采用ELISA法，將受實驗的大鼠斷頭處死，取頸動脈血5 ml(分為2管，各2.5 ml，另一管加1 g/l肝素25 μl抗凝和抑肽酶1250 U用作血漿SS檢測)，將1管1500 r/min離心5 rain取10 μl血清，分別加入包被好抗原的96孔酶標板的孔板中，每孔中加入GAS抗體50 μl和POD(緩沖液)50 μl，輕輕混勻30 s，封住蓋板，室溫孵育45 min，棄除混合物，PBS洗滌5次，甩盡板內(nèi)液體，用吸水紙拍干，加入100 μl的TMB(酶底物)，輕輕混勻10 s，室溫孵育20 min，加入100 μl終止液，混勻30 s后，在酶標儀450 nm波長下，測A值，計算血清中GAS含量。

②血漿SS含量檢測：采用RIA法，將加入肝素和抑肽酶的全血離心，取血漿。在試管上分別標上管號，標準品管中各加入100 μl不同濃度的標準品，實驗管中各加入300 μl待測血漿；所有管中分別加入SS抗血清100 μl和緩沖液200 μl，4℃孵育24 h后，分別加入125I AVP 100 μl混勻，再次4℃孵育24 h，加分離劑500 μl，混勻，室溫放置45 min后，4000 r/min離心，20 min，棄上清液，上放免計數(shù)儀測定cpm值，由放免數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)繪制標準曲線并計算SS含量。

③胃黏膜前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的測定方法：取出鼠胃，迅速刮取胃黏膜，于液氮中速凍，稱重后，放入勻漿器中，加無水乙醇 0.4 ml，輕研磨后，再加入生理鹽水 1.6 ml，研磨制成勻漿，離心10 min(3500 r/rain)，取上清液，放-30℃冰箱保存?zhèn)錂z。

6.統(tǒng)計學(xué)處理計量資料用均數(shù)±標準差（-±s）表示，運用SPSS12.0統(tǒng)計軟件包進行檢驗，三組資料比較用F檢驗，兩兩比較用LSD檢驗，P＜0.05為差異有顯著性意義。

結(jié)果

各組大鼠治療前后各觀察指標變化情況，石斛組治療前后GAS和PGE2均有下降（P＜0.01），SS治療后較治療前有上升，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），模型組治療前后GAS和PGE2均有下降但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），對照組治療前后SS、GAS和PGE2變化不大（P＞0.05），GAS和PGE2石斛組治療后與模型組治療后和對照組治療后比較均有顯著性差異（P＜0.01），見表1。SS石斛組治療后與對照組治療后比較差異無顯著性（P＞0.05）。

討論

胃黏膜是前列腺素的主要合成場所之一，其中PGE2是其重要的一種，后者有很強的抑制胃酸參傅鞍酌岡分泌、刺激黏液和碳酸氫鹽分泌、增加黏膜血流和促使上皮再生等作用，又有增強黏膜抵抗力的作用(細胞保護作用)。PGE2的細胞保護作用與改善胃黏膜血流有關(guān)。 PGE2可保持胃黏膜微血管的完整性，減少血管充血，使完好的胃小凹細胞快速移行，修復(fù)破壞了的上皮。PGE2對胃黏膜損傷有較好的保護作用，而提高胃黏膜保護能力又具有一定的防治胃癌前病變和胃癌的作用，大量的研究表明，對胃黏膜的保護作用是通過提高內(nèi)源性PGE2的含量來實現(xiàn)的。GAS是胃酸分泌的主要調(diào)節(jié)激素，其分子量2100，是含有17個氨基酸的多肽，GAS分泌受胃內(nèi)pH、進食、胃內(nèi)壓變化、SS和其他胃腸激素及交感神經(jīng)興奮等諸多因素的影響，同時GAS分泌又可引起近端胃舒張、胃竇收縮的作用。而SS是一種對外分泌、內(nèi)分泌、旁分泌及自分泌均起作用的調(diào)節(jié)肽，對消化系統(tǒng)的生物學(xué)作用主要是抑制胃泌素等各種胃腸激素的分泌，亦可抑制胃腸運動和黏膜細胞的增生，減少胃腸道壁血流量，抑制胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌。GAS可直接刺激SS分泌，而SS又可抑制GAS的分泌，二者間具有獨特的區(qū)域性調(diào)節(jié)作用。近年來對GAS、SS和PGE2在模型動物或患者外周血中含量水平高低有不同的認識，不但其研究結(jié)果報道不一致，而且對其在外周血中的含量變化與CAG的關(guān)系也有不同的認識。我們的研究結(jié)果表明，CAG大鼠SS、GAS和PGE2水平均有下降(P＜0.01)；而且從模型組實驗結(jié)果來看，由于不給予治療藥物，結(jié)果大鼠仍維持CAG的病理狀態(tài)。

CAG是消化系統(tǒng)常見病，其胃黏膜上皮遭到反復(fù)損害后導(dǎo)致固有腺體的減少或消失。CAG屬中醫(yī)的“胃痛”、“痞滿”范疇，由于其發(fā)病日久，多種致病因素長期損害，病變漸呈復(fù)雜化；或因飲食、情志、勞倦、外邪等因素影響反復(fù)發(fā)作，故常兼見脾陽虛或胃陰虧之證，或有兼熱夾濕；而氣滯血瘀、熱郁濕阻又可蘊結(jié)成毒。這些總的形成了CAG的本虛標實、虛實夾雜的病機，因此，對CAG的治療要針對病因，且標本同治。本實驗用單味中藥石斛制成水煎劑對CAG大鼠進行實驗性治療。其具有益氣健脾、理氣活血，兼以補脾陽益胃陰、清胃熱祛瘀毒等功效，從而標本兼治，虛實共調(diào)，恰中CAG的病機。從現(xiàn)代藥理學(xué)分析，本方諸藥有調(diào)節(jié)免疫功能、改善胃黏膜血液循環(huán)、清除自由基及抑制組織細胞癌變的作用。本實驗可以證實，石斛具有使CAG大鼠前列腺素和胃泌素明顯增高之功效。由此可以推測石斛對慢性萎縮性胃炎有修復(fù)和促進其康復(fù)之功效。

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(收稿日期：2008-12-05修回日期：2009-01-23)

(編輯：潘明志英文審校：鐘京梓)