李錦山　李國輝　繆英年　吳志光　李　亮

[摘要]目的：研究蘆薈大黃素對大鼠急性胰腺炎(AP)炎性介質(zhì)的作用。方法：應(yīng)用牛黃膽酸鈉制備大鼠AP模型，將54只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、AP模型組、蘆薈大黃素治療組。術(shù)后3、6、12 h各處死6只，測定AP大鼠血小板活化因子(PAF)、白介素－6(IL－6)及腫瘤壞死因子－α(TNF－α)的水平。結(jié)果：蘆薈大黃素治療組與AP模型組比較，血清中PAF及IL－6、TNF－α水平明顯低于重癥急性胰腺炎模型組。結(jié)論：PAF、IL－6及TNF－α水平的降低可能與蘆薈大黃素對它們的抑制作用有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]急性胰腺炎；蘆薈大黃素；血小板活化因子；白介素－6；腫瘤壞死因子

[中圖分類號]R657.5+1[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A[文章編號]1673－7210(2009)02(c)－014－02

大黃的游離單蒽醌類化合物包括大黃素、大黃酸、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等，是其主要的有效成分。急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是一種并發(fā)癥多、病死率高的嚴(yán)重危害人類健康的疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，有多種因素和炎性因子參與。一些細(xì)胞因子及炎性遞質(zhì)在急性胰腺炎的發(fā)生及發(fā)展中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)主要研究蘆薈大黃素對大鼠急性胰腺炎炎性介質(zhì)PAF、TNF－α及IL－6的影響。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

健康SD大鼠54只，雌雄兼用，質(zhì)量200－300 g，術(shù)前禁食12h，自由進(jìn)水。

1.2實(shí)驗(yàn)藥品與試劑

蘆薈大黃素購自陜西森弗生物技術(shù)有限公司；牛磺膽酸鈉，PAF標(biāo)準(zhǔn)品購自美國Sigma公司；大鼠IL－6 ELISA試劑盒、TNF－α ELISA試劑盒購自武漢博士德公司。

1.3實(shí)驗(yàn)動物分組

隨機(jī)將大鼠分為3組(n＝18)：假手術(shù)組、AP模型組和蘆薈大黃素治療組(20 mg/kg)。各組大鼠分別于術(shù)后3、6、12 h取材。

1.4大鼠急性胰腺炎模型的制作

大鼠于術(shù)前12h禁食，自由飲水，戊巴比妥溶液2mg/100g行腹腔內(nèi)麻醉，固定。經(jīng)上腹正中正中切口入腹，提起十二直腸以小號血管夾分別夾住十二指腸段和肝門部胰膽管。在肝門處用TB針(4.5號針頭，1ml注射器)穿刺胰膽管，注射牛磺膽酸鈉5mg/100g，持續(xù)1min，停留5min，然后拔出針頭，去除血管夾，可觀察大鼠胰腺組織明顯水腫、出血，縫合腹壁各層。假手術(shù)組打開腹腔，翻動胰腺組織后關(guān)腹。蘆薈大黃素治療組于術(shù)后5min將蘆薈大黃素溶液通過股靜脈給藥。

1.5標(biāo)本采集

各組分別于術(shù)后3、6、12h再次麻醉，經(jīng)原腹部切口入腹，抽出腹腔積液，記錄其量和性質(zhì)。從下腔靜脈采血2 ml，注入試管內(nèi)凝固后，離心分離血清。TNF－a及IL－6以ELISA法測定。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較用SPSS 13.0軟件行t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 IL－6的變化

術(shù)后3、6、12 h模型組血清IL－6水平較假手術(shù)組顯著升高(P<0.01)，術(shù)后12 h重癥急性胰腺炎模型組血清IL－6水平是術(shù)后3h的2.1倍。與模型組比較，蘆薈大黃素組血清細(xì)胞因子IL－6的水平顯著降低(P<0.01)，見表1。

2.2TNF－α的測定

術(shù)后3、6、12h模型TNF－水平較假手術(shù)組顯著升高(P＜0.05)。蘆薈大黃素組與模型組比較，血清腫瘤壞死氣因子水平明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)，見表2。

2.3 PAF的測定

術(shù)后3、6、12 h模型組血清PAF持續(xù)升高，與假手術(shù)組各時(shí)段比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，蘆薈大黃素組與模型組比較血清PAF水平的降低程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

AP的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，早期胰腺細(xì)胞損傷可導(dǎo)致局部的炎癥反應(yīng)，隨著疾病的進(jìn)展，全身炎癥反應(yīng)綜合征嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)多臟器功能不全甚至多臟器功能的衰竭，病死率很高。

IL－6在血中出現(xiàn)早、易檢測，具有較高靈敏度和特異性，是判斷TNF－α預(yù)后的重要指標(biāo)。TNF－α是AP發(fā)生時(shí)體內(nèi)重要的細(xì)胞因子之一，是導(dǎo)致胰腺及胰外器官組織釋放其他炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子的重要啟動因子，其與AP的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。急性壞死性胰腺炎時(shí)TNF－α子可作為始發(fā)因子在細(xì)胞核亞細(xì)胞水平上激發(fā)一系列反應(yīng)，誘導(dǎo)IL－1、IL－6等的基因表達(dá)，活化PIA₂，使花生四烯酸分解產(chǎn)生PGE、TXA₂等炎性介質(zhì)。它還能促進(jìn)多形核粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，從而促使內(nèi)皮細(xì)胞炎癥、核通透性增加，加劇炎癥性損傷。在AP中，PAF作為較強(qiáng)的血小板聚集劑及血管活性脂類遞質(zhì)，是重要的增加血管通透性的炎性介質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，PAF、IL－6、TNF－α水平明顯低于重癥急性胰腺炎模型組。因此，筆者認(rèn)為，PAF、IL－6和TNF－α水平的降低可能與蘆薈大黃素對它們的抑制作用有關(guān)。