宋　輝

摘要介紹了蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒的檢測原理，分析了在快速檢測過程中易出現(xiàn)的問題，并提出相應(yīng)的對策，以加快蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測方法的推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞蔬菜農(nóng)藥殘毒；快速檢測；存在問題；對策

中圖分類號S481+.9文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739（2009）03-0155-01

蔬菜農(nóng)藥殘毒快速檢測技術(shù)是一種生化方法，以丁酰膽堿脂酶被抑制程度（抑制率）來檢測蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類的農(nóng)藥殘毒。該方法可對含農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩，將一部分含藥量較高的蔬菜控制在市場之外，避免農(nóng)藥中毒事故發(fā)生，讓人們吃上相對放心的蔬菜。該方法適用于葉菜類、果菜類、豆菜類、瓜菜類、根菜類（除胡蘿卜、茭白等）中甲胺磷、氧化樂果、對硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲萘威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威等的農(nóng)藥殘毒快速檢測。

1農(nóng)藥殘毒快速檢測原理

有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死，根據(jù)這一昆蟲毒理學(xué)原理，進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測。檢測過程為蔬菜樣本提取液加入反應(yīng)試劑乙酰膽堿酯酶后，用分光光度計(jì)測定吸光值隨時(shí)間的變化，計(jì)算出抑制率，判斷蔬菜中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘毒情況。操作流程見圖1。在分光光度計(jì)410nm處有最大吸收峰。根據(jù)3min前后吸光值之差可測得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。抑制率≥70%時(shí)，蔬菜中含有某種有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒，抑制率＜70%時(shí)，算合格。

2檢測過程中出現(xiàn)的問題與對策

2.1同批次蔬菜檢測結(jié)果重現(xiàn)性不同

因?yàn)榇朔椒榭焖贆z測，所以每次檢測過程中使用的定量加液器的量及取樣量各有差異。另外，操作方法和儀器系統(tǒng)存在誤差等，致使同批次檢測結(jié)果重現(xiàn)性不同。

對策：①對同批次蔬菜抽樣要有公正性和代表性。要保證抽樣工具和容器潔凈、干燥、無異味，不會(huì)對樣品造成污染。并及時(shí)封存，保護(hù)樣品的待檢性狀。②取樣檢測時(shí)，樣品量要保證，葉菜類2g，非葉菜類4g；取樣部位均勻合理，多點(diǎn)混取，要有代表性，盡量取可食用部分。③定量加液器的量要均勻一致。④振蕩后要充分靜置，避免細(xì)小菜未被管嘴吸到比色皿中，影響吸光值。⑤定期對儀器進(jìn)行自檢，嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，可減少誤差，有效避免結(jié)果重現(xiàn)性不同。

2.2抑制率偏小

試驗(yàn)通過酶被抑制的程度（即抑制率）來反應(yīng)農(nóng)殘是否超標(biāo)。抑制率的正常范圍是-10%~110%，對照組/樣本的吸光值在3min后與3min前的差值（ΔAc/ΔAs）范圍是0.3~0.8，當(dāng)抑制率值偏小，即小于-10%時(shí)，原因：一是酶在參加反應(yīng)之前就已部分失活，導(dǎo)致ΔAc<0.3。二是底物與酶未反應(yīng)完全。

對策：①酶是生物催化劑，較其他催化劑更加脆弱，易失去活性，因此酶作用一般要求比較溫和的條件，如常溫、常壓、接近中性的酸堿度。在培養(yǎng)箱中酶的最適溫度是37.5~38.5℃，提取液的pH值控制在8.0。在試驗(yàn)過程中，酶液可暫時(shí)置于室內(nèi)的冰盒上，做完試驗(yàn)后，酶液應(yīng)儲存在0~5℃的冷藏室內(nèi)。②取底物時(shí)，用移液槍直接加到比色杯內(nèi)，盡量不要濺到壁上，加完底物后快速搖晃比色皿，再將比色皿放入儀器內(nèi)立即進(jìn)行比色。

2.3抑制率偏大

當(dāng)抑制率出現(xiàn)不正常偏大時(shí)，主要原因是在上機(jī)比色前酶就已與底物發(fā)生反應(yīng)或底物已經(jīng)分解失活，致使ΔAs<0.4。

對策：從樣本培養(yǎng)結(jié)束到上機(jī)比色速度要快，盡量在1min內(nèi)完成，而且培養(yǎng)時(shí)間要準(zhǔn)確把握，不能超過15min，或換底物重新做空白。

3其他注意事項(xiàng)

①儀器應(yīng)置于干燥、通風(fēng)的環(huán)境中，儀器工作以前，應(yīng)預(yù)熱5~10min，使儀器狀態(tài)穩(wěn)定。在測量的過程中不要打開儀器樣品室蓋，以免影響測量結(jié)果。②在制備待測液過程中，加入提取液后需震蕩1~2min，并保證上清液靜置3~5min，使殘留物浸提完全。且酶液、顯色劑不能漏加或多加。③注意手不要摸比色皿的光面，要拿毛面，光面對準(zhǔn)光路，里面的液體要超過2/3，且不得溢出，以保持光面外側(cè)的潔凈。④對蔥、大蒜等辛辣味較濃的蔬菜，采用酶抑制法速測，出現(xiàn)假陽性的可能性極大，如果要驗(yàn)證結(jié)果是否正確，必須重新取樣重新做試驗(yàn)。⑤生菜、小白菜、豆角、芹菜等為必檢項(xiàng)目，因?yàn)檫@幾類蔬菜或容易殘留農(nóng)藥，或使用農(nóng)藥次數(shù)多、密度大。⑥檢測結(jié)果僅起監(jiān)督作用，且僅是對含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的粗篩，對其他農(nóng)藥的檢測無作用。

4參考文獻(xiàn)

[1] 杜宗緒，孫竹生，楊連學(xué).農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留分析技術(shù)進(jìn)展[J].濰坊高等職業(yè)教育，2006（1）：43-45.

[2] 王偉，方婷，邵暉，等.蔬菜中農(nóng)殘快速檢測方法的研究[J].中國食品工業(yè)，2008（4）：44-45.