張 瓊 曾燕楠 張寧寧 朱儆元 高年春

摘要:通過(guò)表面殺菌劑的篩選、無(wú)菌種子播種技術(shù)研究、增殖、壯苗生根培養(yǎng)基及煉苗基質(zhì)的篩選,建立一套組培快繁春石斛蘭的技術(shù)體系,實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn)的目標(biāo)。

關(guān)鍵詞:春石斛蘭;組織培養(yǎng);無(wú)菌播種;增殖;生根;壯苗;工廠化

中圖分類號(hào):S682.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:ADOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.05.022

Foundation of System on Tissue Culture of Dendrobium nobile

ZHANG Qiong, ZENG Yan-nan, ZHANG Ning-ning, ZHU Jing-yuan, GAO Nian-chun

(Nanjing Institute of Agricultural Sciences, Nanjing, Jiangsu 210046, China)

Abstract:Tissue culture techniques of Dendrobium were researched in this paper. Through filtrating surface antiseptic, In vitro rapid propagation and regeneration,filtrating the multiplication media and rooting media, the system for techniques tissue culture of Dendrobium nobile was set up.

Key words: Dendrobium nobile; tissue culture; multiplication; radication; factorys

春石斛蘭(Dendrobiumnobile)是蘭科石斛屬植物。具有花朵密集繁茂,花形千姿百態(tài),色彩艷麗豐富的特點(diǎn)。它的切花及盆栽優(yōu)良品種在國(guó)際花卉市場(chǎng)上倍受青睞,成為人們裝點(diǎn)居室、會(huì)議廳的精品,是一種正處于發(fā)展中的具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值和觀賞價(jià)值的花卉植物。國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上,一盆四拼組合的優(yōu)質(zhì)春石斛蘭價(jià)格曾高達(dá)1 000元,國(guó)際市場(chǎng)上則更加昂貴,市場(chǎng)空間巨大。但常規(guī)的分株繁殖速度慢,滿足不了市場(chǎng)需求,大大地限制了推廣速度。采用組織培養(yǎng)及其快繁技術(shù),建立一套經(jīng)濟(jì)高效的組培快繁體系,對(duì)解決春石斛蘭種苗的供需矛盾具有重要意義。

1材料和方法

1.1供試材料

試驗(yàn)在南京市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所組織培養(yǎng)中心進(jìn)行,供試材料有從深圳蕙鑫科技有限公司引進(jìn)的星光、友誼使者,南京市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的雜交品種春石斛1號(hào)及經(jīng)過(guò)20 Gy輻照過(guò)的春石斛4號(hào)。以星光、友誼使者的莖頭(見(jiàn)1.2.1)及春石斛1號(hào)、春石斛4號(hào)半成熟種子為外植體進(jìn)行組培試驗(yàn)。

1.2方法

1.2.1莖頭表面滅菌試驗(yàn)星光、友誼使者新萌發(fā)的嫩莖除去葉片,保留葉鞘,用洗潔精清洗浸泡10 min,再用軟毛刷仔細(xì)清洗并流水沖洗30 min。分成5組,每組20個(gè)。以用75%酒精滅菌作對(duì)照,另外4組分別用75%酒精滅菌后再用0.1%升汞、0.2%升汞、10%的次氯酸鈉和15%的次氯酸鈉消毒,無(wú)菌水沖洗干凈,剝?nèi)∏o段接種到6-BA和NAA分別是3.0 mg/L和1.0mg/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

1.2.2種子消毒試驗(yàn)取春石斛1號(hào)、春石斛4號(hào)的半成熟、未開(kāi)裂種莢,先用75%的酒精進(jìn)行表面消毒,再用0.2%的升汞殺菌10 min,無(wú)菌水沖洗干凈,小心地撕開(kāi)種莢,取出棉絮狀的微型種子,攤開(kāi)在加入激素的MS培養(yǎng)基上。在22～25℃, 1 000～2 000 lx的環(huán)境下培養(yǎng)50 d。以長(zhǎng)成的叢芽為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。

1.2.3激素對(duì)組培苗的影響待誘導(dǎo)出的不定芽長(zhǎng)到1 cm以上,切下接入添加不同配比激素的MS培養(yǎng)基中,6-BA和NAA濃度配比分別為0.5 mg/L ∶0.1 mg/L ,0.5 mg/L ∶0.2 mg/L,1.0 mg/L∶0.1 mg/L,2.0 mg/L∶0.2 mg/L,1.0 mg/L∶0.2 mg/L,2.0 mg/L∶0.1 mg/L。在22～25℃,光照1 000～2 000 lx的環(huán)境下培養(yǎng)。

1.2.4基本培養(yǎng)基的篩選本試驗(yàn)進(jìn)行了基本培養(yǎng)基的篩選,將增殖苗接入不含激素的不同基本培養(yǎng)基MS、LS、R2、B5、N6中,篩選壯苗的基本培養(yǎng)基。

1.2.5生根試驗(yàn)待壯苗25 d后,叢生芽達(dá)到2 cm以上,轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。選取健壯的增殖苗,從每株苗的基部分開(kāi),接入N6加不同濃度配比的IBA、IAA、NAA生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根。

1.2.6馴化煉苗試驗(yàn)石斛蘭組培苗對(duì)環(huán)境條件要求較高,常規(guī)移栽成活率較低,因此,在移植之前必有一個(gè)煉苗過(guò)程。當(dāng)生根苗長(zhǎng)到4 cm以上時(shí),即可開(kāi)始出瓶煉苗。先將生根苗連瓶移到煉苗場(chǎng),適應(yīng)1 d之后打開(kāi)瓶蓋,10 d后出瓶。出瓶時(shí)要小心仔細(xì),盡量減少根部損傷。選用了泥炭、水苔、珍珠巖、泥炭+珍珠巖和水苔+泥炭不同基質(zhì)。

2結(jié)果與分析

2.1莖尖表面滅菌試驗(yàn)

不同殺菌劑和濃度對(duì)外植體殺菌效果見(jiàn)表1。結(jié)果表明,0.2%升汞殺菌8 min效果最好。

2.2激素對(duì)石斛蘭增殖倍數(shù)和成苗率的影響

表2為生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素對(duì)石斛蘭類生長(zhǎng)的影響,及最佳配比。結(jié)果表明,6-BA和NAA濃度分別為0.5 mg/L 和0.2 mg/L的MS增殖培養(yǎng)基增殖效果最好,生長(zhǎng)速度快,葉色濃綠,成苗率高。

2.3壯苗培養(yǎng)基的篩選試驗(yàn)

以MS為基本培養(yǎng)基的增殖培養(yǎng)基增殖快,葉色綠。但有一個(gè)很大的缺點(diǎn),就是分枝太多,易倒伏,根系向上,苗向下長(zhǎng),很不容易成苗。所以,我們進(jìn)行了基本培養(yǎng)基的篩選,結(jié)果如表3所示,N6基本培養(yǎng)基對(duì)石斛蘭壯苗效果較好。

2.4生根試驗(yàn)

研究發(fā)現(xiàn),IBA為0.5 mg/L的生根培養(yǎng)基生根量和生根率最高(表4)。當(dāng)根系長(zhǎng)至0.5 cm即可進(jìn)入馴化練苗階段。

2.5馴化煉苗試驗(yàn)

從表5中可以看出,水苔是石斛蘭煉苗的最好基質(zhì)。4個(gè)品種的石斛蘭在水苔培養(yǎng)基中的成活率都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其他基質(zhì)。栽培之后的管理是保證組培苗移栽成功的關(guān)鍵,既要防病,又要控制好溫、濕度及光照,稍有不慎就會(huì)造成很大損失。在管理過(guò)程中要格外注意水分的控制,開(kāi)始幾天不能澆水,以刺激根系的生長(zhǎng)。接下來(lái)也不可大水漫灌,要用噴壺細(xì)心的慢慢噴,每天至少噴4次,雨天停止噴水。1個(gè)月后,種苗基本成活,新根系長(zhǎng)出,抽出新葉才能澆水。

3小結(jié)

(1)石斛蘭組培的難點(diǎn)是外植體增殖、無(wú)菌種子播種、生根壯苗和煉苗馴化,這些關(guān)鍵技術(shù)對(duì)于石斛蘭苗的工廠化生產(chǎn)意義重大。外植體的增殖倍數(shù)的高低、原球莖的多少,都關(guān)系著能否以最快的速度,繁殖出優(yōu)質(zhì)的石斛蘭種苗。無(wú)菌播種能夠快速大量的繁殖來(lái)自同一枚種莢的種苗,有利于優(yōu)良品種的快速擴(kuò)繁。生根壯苗技術(shù)也是石斛蘭組培的關(guān)鍵,如果生產(chǎn)的苗弱或者狀態(tài)不佳,有可能造成全軍覆沒(méi)的嚴(yán)重后果。

(2)擴(kuò)繁一定數(shù)量的石斛蘭組培苗后,必須提高練苗成活率。石斛蘭看似抗逆性強(qiáng),幾天不澆水也不會(huì)干死。但是一旦缺水就會(huì)停止生長(zhǎng),無(wú)法恢復(fù)。一次澆水過(guò)多,幾天后就會(huì)發(fā)黃、爛根。因此,石斛蘭的煉苗技術(shù)對(duì)管理者的管理水平要求很高,稍有不慎,就會(huì)使前期的工作白白付之東流。

(3)在幼苗期,要抹去基部多余的側(cè)芽,留1~2個(gè)健壯的芽繼續(xù)生長(zhǎng)。每隔10 d要施肥1次。隔周噴藥防病。只要管理精細(xì),方法得當(dāng),石斛蘭一定會(huì)茁壯成長(zhǎng),為我們創(chuàng)造很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

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