摘要：目的：通過HPLC多成分一測多評含量測定方法及多模式化學識別方法對陳香露白露片進行質(zhì)量分析研究。方法：采用高效液相色譜法，以橙皮苷為內(nèi)參物，建立與其他5個成分之間的相對校正因子，計算5種待測成分的含量，實現(xiàn)一測多評。同時與外標法測定結(jié)果進行比較，驗證QAMS法的定量評價和穩(wěn)定可控。通過聚類分析（CA）、主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法判別分析（OPLS-DA）分別探討不同廠家陳香露白露片的質(zhì)量。結(jié)果：橙皮苷與甘草苷、甘草酸銨、β-細辛醚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的相對校正因子分別為0.681、3.744、0.680、1.030、1.068，然后與外標法進行比較。CA可將17批次陳香露白露片聚類為2類，PCA結(jié)果提取了2個主成分，OPLS-DA能有效地將不同廠家的產(chǎn)品明顯區(qū)分開來。結(jié)論：以橙皮苷為內(nèi)參物，建立陳香露白露片中5個成分的QAMS法準確、可行，可用于陳香露白露片的定量分析及質(zhì)量控制。

關鍵詞：陳香露白露片；一測多評法；高效液相色譜法；化學模式識別

中圖分類號：R286.0文獻標志碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1674-4977.2025.01.003

基金項目：湖北省藥品監(jiān)督管理局藥品安全監(jiān)管科研項目（20220117）。

0引言

一測多評（quantitative analysis of multi-compo？ nents by single marker，QAMS）由王智民[1]于2006年首次提出。它是一種高效、簡便的測定方法，適用于中藥的多指標質(zhì)量控制評價。該方法利用樣品中各活性成分之間的關系，僅選定1個化學成分（內(nèi)參物，通常為典型成分且對照品低價易得），建立內(nèi)參物與其他多種成分間的相對校正因子，實現(xiàn)多個同類成分的測定[2]。

2010年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）首次收錄QAMS法，不過當時其應用范圍僅局限于黃連。之后，由于QAMS法有效解決了對照品不足以及多指標測定成本高昂等難題，其應用領域不斷拓展，被廣泛應用于各類中藥質(zhì)量評價研究，在推動中藥質(zhì)量精準把控方面發(fā)揮著越來越重要的作用。到2020年版《中國藥典》時，QAMS法的應用已延伸至中藥飲片、提取物以及制劑等多個方面。

陳香露白露片的處方由陳皮、甘草、川木香、大黃、石菖蒲五味中藥和碳酸鎂、氧化鎂、次硝酸鉍、碳酸氫鈉4種化學藥組成?，F(xiàn)行質(zhì)量標準為WS3-B-1553-93《陳香露白露片》，僅規(guī)定了采用滴定法測定次硝酸鉍中鉍的含量[4]，未對其他成分，特別是甘草、陳皮等中藥成分進行控制。而利用高效液相色譜（HPLC）法測定甘草苷、甘草酸銨、橙皮苷、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、β-細辛醚這6種有效成分的含量[5-6]，將中成藥含量測定與化學模式識別相結(jié)合，可以有效分析和控制中成藥質(zhì)量。本研究以17批陳香露白露片樣品為對象，測定其有效成分含量，并借助聚類分析（CA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法（OPLS-DA）等模式，對不同廠家生產(chǎn)的陳香露白露片進行分析，為通過多指標含量測定評價不同廠家產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣提供有效的參考。

1儀器與試劑

1.1儀器

1260高效液相色譜儀，DAD檢測器（安捷倫公司）；MS205DU十萬分之一電子天平（梅特勒）；AE100電子天平（梅特勒）；KQ-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q Reference超純水機（默克密理博）。

1.2樣品

17批陳香露白露片樣品來自10個生產(chǎn)廠家：云南白藥集團大理藥業(yè)有限責任公司（企業(yè)1），批號DCA2139（S1）；廣西邦琪藥業(yè)集團有限公司（企業(yè)2），批號20221118（S2）；廣西慧寶源醫(yī)藥科技有限公司（企業(yè)3），批號20221214（S3）、230502（S4）；廣西圣特藥業(yè)有限公司（企業(yè)4），批號230211（S5）、230510（S6）；廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)集團有限公司（企業(yè)5），批號20220702（S7）、20220209（S8）；貴州百靈企業(yè)集團制藥股份有限公司（企業(yè)6），批號20221204（S9）、20230306（S10）、20220605（S11）；葫蘆娃藥業(yè)集團廣西維威制藥有限公司（企業(yè)7），批號221002（S12）、230901（S13）；湖南漢森制藥股份有限公司（企業(yè)8），批號2303119（S14）、2305108（S15）；四川康福來藥業(yè)集團有限公司（企業(yè)9），批號2220901（S16）；重慶科瑞制藥（集團）有限公司（企業(yè)10），批號833008（S17），以上樣品規(guī)格均為每片重0.3 g。

1.3試劑

對照品甘草苷（批號111610-202209，純度95.2%）、甘草酸銨（批號110731-202122，純度94.4%）、橙皮苷（批號110721-202220，純度97.2%）、細辛醚（批號112018-201802，純度99.3%）、木香烴內(nèi)酯（批號111525-202313，純度99.6%）、去氫木香內(nèi)酯（批號111525-202313，純度99.8%）均購自中國食品藥品檢定研究院。

乙腈和甲醇為色譜純（湖北弗頓科學技術有限公司），其余試劑均為分析純（購于國藥集團化學試劑有限公司），水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用Agilent5 TC-C18（2）色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為0.1%磷酸水（A）-甲醇（B）-乙腈（C），梯度洗脫見表1。流速為1.0 mL/min，柱溫為40℃，進樣量為10μL。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液制備

取甘草苷、橙皮苷、甘草酸銨、β-細辛醚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，分別用體積分數(shù)為50%的甲醇溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為78.64、63.58、159.3、23.66、20.92、36.56μg/mL的混合對照溶液。

2.2.2供試品溶液制備

取陳香露白露片10片，研細，精密稱定粉末（過4號篩）0.5 g，精密加入20 mL體積分數(shù)為50%的甲醇，超聲30 min，放冷，精密稱定，用體積分數(shù)為50%的甲醇補足損失的重量，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜濾過，即得。

2.3相對校正因子（RCF）計算

采用多點校正法，精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10、15μL，按色譜條件分別進樣測定。以對照品易得、穩(wěn)定且含量最高的橙皮苷作為內(nèi)參物，建立該成分與其他5個待測成分之間的相對校正因子。公式為：

5個成分相對校正因子計算結(jié)果見表2。

2.4一測多評法和外標法測定結(jié)果比較

橙皮苷作為內(nèi)參物，采用一測多評法（QAMS）同時測定5種成分含量，與外標法測定結(jié)果比較結(jié)果見表3。

5種成分QAMS計算結(jié)果與外標法（EMS法）測定結(jié)果的相對偏差（RSD）為±5%，無顯著性差異，表明一測多評法測定結(jié)果準確可靠，能有效反映陳香露白露片的質(zhì)量。運用SPSS軟件進行PL回歸計算，分析橙皮苷對于各目標成分的影響，結(jié)果見表4。

結(jié)果表明，兩種方法差異無統(tǒng)計學意義（p<0.05，說明x對于y呈現(xiàn)出顯著性影響）。本研究建立的相對校正因子準確可靠，QAMS法可用于陳香露白露片成分的同步定量檢測。

2.5聚類分析（CA）

采用SPSS統(tǒng)計軟件對17批次陳香露白露片中6種有效成分含量進行樣品聚類。由圖1可知，當分類距離為29時，17批樣品分為兩類：第一類為S1～S3、S5～S8、S16；第二類為S4，S9～S17。

當分類距離為20時，17批樣品分為四類：第一類為S5、S6、S16；第二類為S1～S3、S7、S8；第三類為S10、S12、S13；第四類為S10、S12、S13、S14、S15、S4、S17、S9、S11。其中，S5、S6為企業(yè)4生產(chǎn)的不同批次，S7、 S8為企業(yè)5生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，S12、S13為企業(yè)7生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，S14、S15為企業(yè)8生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品。說明這四家企業(yè)生產(chǎn)的陳香露白露片批次間有效成分含量穩(wěn)定，但不同廠家之間的陳香露白露片有效成分含量具有明顯差異。

2.6主成分分析（PCA）

將17批陳香露白露片6種組分含量導入SIM？ CA14.0軟件，進行PCA分析，得分矩陣圖（R2x=0.446）見圖2。從圖2中可以看到樣品間的分離趨勢。x軸以上有8批，x軸上有1批，x軸以下有8批。

其中，位于第一象限的S7、S8為企業(yè)5生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，位于第二象限的S14、S15為企業(yè)8生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，位于第三象限的S12、S13為企業(yè)7生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，位于第四象限的S5、S6為企業(yè)4生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品。從整體來看，不同廠家生產(chǎn)的陳香露白露片的有效成分含量存在一定差異。

2.7正交偏最小二乘法（OPLS-DA）

以17批陳香露白露片6種有效成分含量為變量，導入SIMCA 14.0軟件進行OPLS-DA分析，得到的得分圖和VIP圖分別見圖3和圖4。

建立的OPLS-DA模型（R2x=0.53）可以對不同廠家間的產(chǎn)品質(zhì)量進行判別。由圖3可知，10家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的陳香露白露片沒有交叉。2個廠家生產(chǎn)的陳香露白露片批次間有交叉，證明2家生產(chǎn)企業(yè)批次間產(chǎn)品有效成分含量較穩(wěn)定。

對成分含量進行變量投影重要性（VIP）分析，當某一成分含量VIP大于1.0時，表示該成分為重要變量。6個變量中橙皮苷、甘草苷、甘草酸銨含量的VIP值大于1，可以標記不同廠家生產(chǎn)的陳香露白露片的成分含量存在差異，其余含量VIP值小于1，無法高效區(qū)分不同樣品的產(chǎn)品質(zhì)量。

3討論

陳香露白露片的處方工藝較為簡單，產(chǎn)品質(zhì)量主要體現(xiàn)在藥材品質(zhì)的差異上。橙皮苷作為君藥陳皮的主要成分，在不同生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品中測得的含量差異較大。主要原因是各生產(chǎn)企業(yè)采購的藥材產(chǎn)地、種植方式及采收年限不同。β-細辛醚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯為揮發(fā)性成分，如果企業(yè)在藥材購進及養(yǎng)護方面存在不當，將會導致其含量流失，從而產(chǎn)生差異。CA、PCA、OPLS-DA是含量測定結(jié)合化學模式識別應用最普遍的一種分析方法，其可以清晰地標明不同廠家間產(chǎn)品質(zhì)量的差異。結(jié)果表明，CA能將17批次陳香露白露片清晰地分為2類。通過OPLS-DA分析結(jié)果可以找出影響陳香露白露片產(chǎn)品質(zhì)量差異的3種主要成分。由于現(xiàn)行標準缺乏對該品種重要指標成分的控制，因而導致不同企業(yè)生產(chǎn)的陳香露白露片存在較大差異。

參考文獻

[1]王智民，高慧敏，付雪濤，等.一測多評法中藥質(zhì)量評價模式方法學研究[J].中國中藥雜志，2006，31（23）：1925.

[2]王智民，錢忠直，張啟偉.一測多評法建立的技術指南[J].中國中藥雜志，2011，36（6）：657.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[4]陳香露白露片：WS3-B-1553-93[S].

[5]張璐，戴群芳，陳思思.HPLC法同時測定陳香露白露片中7個成分的含量[J].藥學實踐與服務，2022，40（6）：553.

[6]胡昭君，陳斌，余岳林.HPLC法同時測定陳香露白露片中4種成分[J].中成藥，2019，41（2）：274.

作者簡介

李華，女，1982年出生，工程師，碩士，研究方向為中藥分析。通信作者：張正懸，女，1990年出生，檢驗員，學士，研究方向為中藥分析，836376191@qq.com。

（編輯：李鈺雙，收稿日期：2024-10-09）